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奈比洛尔抑制AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞上皮—间质转化的机制
目的:探讨奈比洛尔抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮-间质转化(EMT)的作用及机制,为肾小管间质纤维化的治疗提供新思路。方法:(一)预实验确定AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞EMT的适宜浓度及时间。
(二)奈比洛尔抑制AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞EMT的作用。奈比洛尔抑制AngⅡ诱导HK-2细胞EMT分组如下:空白对照组;AngⅡ(10<sup>-</sup>66 mol/L)组;奈比洛尔不同浓度(1,5,10,20μmol/L)和时间(30min,1.5h,3h)预处理组。
奈比洛尔抑制高糖诱导HK-2细胞EMT分组如下:空白对照组;渗透压对照组;高糖(30 mmol/L)组;奈比洛尔不同浓度(1,5,10,20μmol/L)和时间(30min,1.5h,3h)预处理组。荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS),划痕实验测细胞迁移能力,Western Blot检测细胞α-SMA,Collagen I,Vimentin,Fibronectin和E-Cadherin蛋白表达。
(三)奈比洛尔抑制AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞EMT的机制。分组如下:空白对照组;空白对照+奈比洛尔(10μmol/L,1.5h)组;AngⅡ(10<sup>-</sup>66 mol/L,48h)/高糖(30 mmol/L,4
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8h)组;奈比洛尔(10μmol/L,1.5h)+AngⅡ(10<sup>-</sup>66 mol/L,48h)/高糖(30 mmol/L,48h)组;空白对照+二苯基氯化碘盐(DPI)(1μmol/L,1.5h)组;DPI(1μmol/L,1.5h)+AngⅡ(10<sup>-</sup>66 mol/L,48h)/高糖(30 mmol/L,48h)组。
亡羊补牢的故事剩饺子怎么做好吃荧光探针法检测细胞内ROS,Western Blot检测细胞NADPH氧化酶(NOX)2,NOX4,p22<sup>phox</sup>,AMPK,p-AMPK,TGF-β<sub>1</sub>,ERK1/2,p-ERK1/2蛋白表达。(四)奈比洛尔抑制转化生长因子(TGF-β<sub>1</sub>)诱导HK-2细胞EMT的作用。
分组如下:空白对照组;空白对照+奈比洛尔(10μmol/L,1.5h)组;TGF-β<sub>1</sub>(10ng/mL,48h)组;奈比洛尔(10μmol/L,1.5h)+TGF-β<sub>1</sub>组;空白对照+DPI(1μmol/L,1.5h)组;DPI(1μmol/L,1.5h)+TGF-β<sub>1</sub>组。划痕实验测细胞迁移能力,Western Blot检测细胞α-SMA,E-Cadherin,Collage I,Vimentin和Fibronectin蛋白表达。
贫病交加结果:(一)AngⅡ(10<sup>-</sup>66 mol/L,48h)或高糖(30 mmol/L,48h)促进HK-2细胞内ROS生成,下调E-Cadherin蛋白表达、上调α-SMA蛋白表达,诱导细胞EMT。(二)
奈比洛尔10和20μmol/L作用1.5和3 h可抑制AngⅡ/高糖诱导的HK-2细胞内ROS生成,但两个浓度在相同时间点无显著性差异。
奈比洛尔10μmol/L作用1.5h可明显抑制AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞EMT:降低HK-2细胞迁移能力,增加E-Cadherin蛋白表达,减少α-SMA,Collage I,Vimentin,Fibronectin蛋白表达。(三)奈比洛尔和DPI均可降低AngⅡ/高糖诱导的HK-2细胞内ROS生成。
谜语有哪些水杯材质奈比洛尔减少AngⅡ诱导的HK-2细胞NOX2,NOX4,p22<sup>phox</sup>,TGF-β<sub>1</sub>,p-ERK1/2表达及p-ERK1/2/ERK1/2,但对ERK1/2表达无显著影响。另一方面,奈比洛尔增加高糖刺激下HK-2细胞AMPK和p-AMPK蛋白表达和p-AMPK/AMPK,降低NOX4,p22<sup>phox</sup>,TGF-β<sub>1</sub>,ERK1/2,p-ERK1/2表达及p-ERK1/2/ERK1/2。
(四)TGF-β<sub>1</sub>(10 ng/mL,48h)可诱导HK-2细胞EMT。此作用可被奈比洛尔和DPI显著抑制:降低细胞迁移能力,增加HK-2细胞E-Cadherin蛋白表达,降低Collage I,Vimentin,Fibronectin和α-SMA蛋白表达。
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结论:奈比洛尔可通过抗氧化作用和抑制TGF-β<sub>1</sub>,改善AngⅡ/高糖诱导HK-2细胞EMT。