α和IL-1β的表达
ISSN1007—7626
CN11-3870/Q
中国生物化学与分子生物
ChineJournalofBiochemistryandM—
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2006年5月
22(5):415—421
类风湿关节炎中自三烯B4诱导和几.1Ijl的表达
陈占昆，吕厚山，林剑浩，许少华，蒋东芳
(北京大学人民医院关节病研究中心，北京100044)
摘要为了探讨类风湿关节炎的发病过程中白三烯B4(1eukotriene,LTB4)对,I'NF-a 和IL-1/3表达的
影响.加入外源性LTB4或者在LIT存在的情况下，加入苯丁抑制素(bestatin,LTA4水解酶抑制剂)
和MK.886(5.脂氧合酶激动蛋白抑制剂)后，采用实时PCR和酶联免疫吸附分析法来检测原代培
养的类风湿滑膜细胞及培养上清液中TNF.a和IL.1B在mRNA及蛋白水平的表达.外源性的LTB4
10mol/L使,I'NF.a和IL.18mRNA水平表达分别增加了14倍和1倍，蛋白水平分别增加了3倍.加
入LIT刺激内源性的LTB4增加了14倍后，使frNF.a和IL.18mRNA水平表达分别增加了145倍和
12倍，蛋白水平分别增加了3倍.在LIT存在的情况下,MK.88610ttmol/L使LTB4
合成降低了
62%(P<0.0001)，使TNF.a和IL.1/3mRNA水平表达分别降低了66%(P<0.05)和71%(P<
0.001)，它们的蛋白水平分别降低了75%和70%(P<0.01),100ttg/ml苯丁抑制素使LTB4合成降
低了78%(P<0,0001)，使frNF.a和IL.1BmRNA水平表达分别降低了86%(P<0.001)和79%(P
<0.01)，它们的蛋白水平分别降低了84%和76%(P<0,05)，在类风湿关节炎中,LTB4诱导TNF.
a和IL-1/3的表达，这一结果为类风湿关节炎发病机制进一步探讨提供了一条新思路.
关键词白三烯B4；肿瘤坏死因子.a；白细胞介素.1/3；类风湿关节炎
湖南省科技馆中图分类号R593.22
LTB4InduceExpressionofTNF-仅andIL-lpinRheumatoidArthritis
毛笔字的写法CHENZhan-Kun,LCHou-Shan,LINJian-Hao,XUShao.Hua,JIANGDong.Fang (ArthritisRearchCenter,PekingUniversityPeople'sHospital,Beijing100044,Ch/n~) AbstractToinvestigatetheeffectofleukotfieneB4(LTB4)onexpressionsofTNF.aandIL-1/ 3inpathogenesis
0frheumatoidarthritis(RA),primaryculturedsynovialceⅡsfromRApatientsweretreatedwithexogenous
嘲,UTorMK-886(inhibitorof5一lipoxygenaactivatingprotein)andBestatin(inhibitorofleukotrieneA4
hydrola)intheprenceofLIT(1ipepolysaccharidandionomyeinandthapsigargin)respe ctively,expressionsof
TNF-aandIL.1/3weredetectedatmRNAlevelbyrealtimePCRandtheirproteinproductionb yELISA.LTB4
(10一mol/L～10mol/L)wasshowntoindueedo.dependentincreaofmRNAandproteinexpressionof ,I'NF
咀.Incontrast,IL.1/3walevateddo.independentlyatbothmRNAandproteinleve1.14.f old
endogenousproductofLTB4byLITsignificantlyincreadmRNAtheexpressionsofTNF.a (145times)and
IL-1/3(12times),whiletheirproteinproductionwereineread3times, atedsynoviocyte
withadditionofMK-886(1ttmol/L～10ttmol/L)wasinhibitedtocreteLTB4do.dependently,following
themarkedlyd0wn-regulatedexpressionsofTNF-aandIL-1/3bothatmRNAandproteinlev e1.Bestatin(100
ttg/m1)couldalsoremarkablyreducedLTB4about78%(P<0.0001)anddiminishedLTB 4.induqedmRNA
expressionof,I'NF-a(86%)andIL-1G(79%),paralleledbydecreadproteinproductsabout 84%and76%
respectively.ThedatasupporttheviewthatexpressionsofTNF.aandIL.1Bcouldbeinducedb yLTB4,which
providedanewc]uetoinvestigateextensivelypathogenicmechanismofrheumatoidarthritis .
收稿El期:2005—05.25，接收日期:2005—10-20吊篮安装规范
国家重点基础研究发展项目(973计划)(No.2002CB513007)
联系人Tel:(010)68314422-5550,E—mail:********************.ca Received:May25,2005;Accepted:October20,2005 SupportedbyMajorStateBasicRearchDevelopmentPro~amofChina(973Program,No. 2002CB513007)
'CorrespondingauthorTel:(010)68314422—5550,E—mail:********************.ca
4l6中国生物化学与分子生物22卷
iphone连不上wifi
KeywordsleukotrieneB4;TNF—a;interleukin一113;rheumatoidarthritis借款协议书范本
类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一个
网页打不开怎么办与环境，细胞，病毒，遗传，性激素及神经精神状态等多种因素相关的疾病，主要以滑膜炎，关节肿胀强直及疼痛为特点，并伴随关节软骨及软骨下骨的破坏. 在西方国家，患病率为1%It]，我国初步调查该病患病率在0.32%～0.38%之间.RA的最初信号表现
在滑膜衬里层，即滑膜成纤维细胞增生并在关节的周围黏附于软骨表面，随后巨噬细胞,T细胞和其
它炎性细胞募集到关节内，并在此生成许多炎性调节因子，其中最重要的有肿瘤坏死因子.a(tumor necrosisfactoralpha,TNF.a)和白细胞介素.1 (interleukinlbeta,IL.16)，两者主要引发滑膜炎，软骨
与软骨下骨的破坏.1980年在《Nature))上发表的
一
篇文章中，首次报道了白三烯B4(1eukotrieneB4, LTB4)可能具有重要的生理特性.在钙离子A238187 的刺激下，多形核白细胞合成一种花生四烯酸的脂氧化酶的代谢产物，它具有强大的化学激动作用和使中性粒细胞聚集的作用，这个化学物质被鉴定是LTB4.LTB4是一个作用很强的趋化因子，它可以
激活并聚集许多炎性和免疫效应细胞J，它作用于
各种免疫现象所涉及的T细胞释放各种细胞因子: 白细胞介素.1，肿瘤坏死因子及基质金属蛋白酶. 2,.3和.9，在类风湿关节炎病人的滑液和血清中,
含有高浓度的LTB4，并且其中性粒细胞释放
LTB4的能力加强.口服LTB4受体拮抗剂BIIL. 284可对类风湿关节炎进性长期治疗…，提示LTB4 在炎性过程及类风湿关节炎的发病机制中起到重要作用.在胶原诱导关节炎的类风湿关节炎动物模型中,LTB4受体拮抗剂CP.105,656可抑制小鼠关节炎
的发展，即使经过IL.1处理，它的治疗效果也是明
显的，进而推测LTB4可能对细胞因子TNF.a和IL. 1B起作用.为了进一步探讨这个问题，本实验取
类风湿滑膜细胞进行原代培养，加入外源性LTB4 或者在LIT(1ipopolysaccharideandionomyeinand thapsigargin,LIT)存在的情况下，加入苯丁抑制素(bestatin,LTA4水解酶抑制剂)和MK.886(5-脂氧合酶激动蛋白抑制剂)，采用实时PCR和酶联免疫吸附分析法来测定类风湿滑膜细胞及其培养上清液中TNF.a和ILB在mRNA及蛋白水平的表达，结果证实了类风湿关节炎中LTB4可通过诱导细胞因子TNF.a和IL.1B的表达起作用，有助于进一步探讨类风湿关节炎的发病机制.
1材料与方法
1.1试剂
DMEM培养基(Gibeco公司,USA),LIT和苯丁
河南专科
抑制素(bestatin)(Sigma公司,USA)，三磷酸脱氧核
苷酸(dNTP)(Promega公司,USA),LTB4(Sigma公司,USA),Invitrogen逆转录试剂盒(Invitrogen公司, USA),TrizolRNA提取试剂盒(Gibeo公司,USA), MK886(德国Merck公司),TaqManMasterMix试剂盒(ABI公司,USA)，引物合成及探针合成(北京伯
亚公司),Oligo(dT)15(Promega公司,USA),RNA酶抑制剂(Pmmege公司,USA).h.TumorNecrosisFactor. aELISAKit(Roche公司,USA),LeukotrieneB4ELA Kit(Cayman公司,USA),HumanInterleukine.16Kit (RD公司,USA).
1.2标本取材
RA滑膜均取材于北京大学人民医院关节病诊
