谷歌主页组胺刺激的气道平滑肌细胞钙离子浓度和
长度变化及机制
上海医学2003年第26卷第12期895
专题研究?
组胺刺激的气道平滑肌细胞钙离子浓度
和长度变化及机制
时国朝邓伟吾万欢英黄绍光洪秀华
【摘要】目的观察组胺刺激后大鼠气道平滑肌细胞(AsMc)内钙离子浓度([ca]i)和长度的变化，并初
步探讨其机制.方法以Fluo一3/AM作为细胞内游离ca示踪剂，通过激光共聚焦显微镜观察不同浓度组胺
对大鼠ASMC[Ca]i和长度的影响，观察胞外Ca",G蛋白，蛋白激酶C(PKC)，丝裂素活化蛋白(MAPK)在组
胺上述生理效应中的作用.结果组胺刺激后,[Ca]i变化呈现双相反应.组胺刺激后[Ca]i快速上升至峰
值，随后稍下降，进入一个维持期.[ca]i增加的峰值(13.39%±3.35%,36.35%±13.35%,64.68%
±11.42%)与组胺浓度(1×10一,1×10一,1×10mol/L)显着相关(P<0.05).无钙培养基不影响组胺刺激
肠胃炎不能吃什么的[Ca2]i上升，而在有钙培养基中加入乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)也不影响组胺刺激诱导的[ca"]i
上升.随组胺浓度(1×10～,1×10-,1×10mol/L)的上升,ASMC最大缩短程度(23.14%,37.62%,
41.75%)仅有增加的趋势(P>0.05)，但在同一组胺浓度下，其[Ca]i变化与细胞缩短程度显着相关(P<
0.01).百日咳毒素对组胺刺激ASMC[Ca]i和长度变化均有明显的抑制作用.Staurosporine和PD098059对
组胺刺激的[Ca2]i变化均无明显影响，但对组胺刺激后细胞长度变化有抑制作用.结论在大鼠ASMC中,
组胺刺激后[ca]i呈现典型的双相反应，并快速上升至峰值，随后进入维持期.组胺刺激后[ca]i上升主要
依赖于胞内储存Ca的释放.[Ca]i在组胺刺激ASMC收缩中可能起关键作用,G蛋白,PKC和MAPK在组
胺上述生理效应中起重要作用.
【关键词】支气管哮喘；组胺；气道平滑肌细胞；钙离子浓度；收缩
Thecyt~oliccalciumcomcentrationandlengthchangesofairwaysmoothmusclecellsinduc edbyhistamineandits
mechanismSHIGuochao.DENGWeiwu,WANHuanying,eta1.DepartmentofRespiratory Medicine,
RuijinHospital,Shanghai,SecondMedicalUniversity,Shanghai200025,China 【Abstract】ObjectiveToobrvethecytosoliccalciumcomcentration([Ca2]i)andlengthchangesofair way
smoothmusclecells(ASMC)inducedbyhistamineandtoexploreitsmechanism.MethodsW ithFluo-3/AMasthe
indicatorofintracellularfreeCa",the[Ca]iandchangesinlengthofASMCinducedbyhistami neatdifferentcon—centrationswereinvestigatedbylarscanconfocalmicroscopyandtheroleofextracellular Ca2,Gprotein,PKC, MAPKinthehistaminephysiologicaleffectwereexamined.Results[Ca]ichangesinducedb yhistamineprented
abiphasicrespon.[Ca]irorapidlytothepeak,thenmaintainedatalowerleve1.Themaxim al[Ca"]ichanges
(13.39%,36.35%,64.68%)correlatedsignificantlywithhistamineconcentrations(1×10
一.,1×10一,1×10一
mol/L)(P<0.05).Ca"一freemediumhadnoinfluenceonchangesof[Ca]iandEGTAalsodidnotinhibitthe
[Ca]ichangesinducedbyhistamine.ThemaximalshorteningofASMChadanincreasingten dencywiththeincre—
mentofhistamineconcentrations(37.62%,23.14%,41.75%)(P>0.05).Butthedegreeofs horteningatdiffer—
entconcentrationswascorrelatedwith[Ca]i(P<0.01).PTXsignificantlyinhibitedboth[C a]iandlength
changes.StaurosporineandPD098059hadnoeffecton[Ca]ichanges,butinhibitedthechang esinlengthofthe
musclecells.ConclusionInratASMC,histamineinducesatypicalbiphasic[Ca2]irespon,[ Ca2]irisrapidly
tothepeak.thenmaintainsatalowerlevel.[Ca]ichangesinducedbyhistaminemainlydepend sonthereleaof
intracellularstoreof[Ca]i,[Ca]iplaysavitalrolesinASMCcontractioninducedbyhistamine .Gprotein,PKC, MAPKalsoplayimportantrolesinthephysiologicaleffectsofhistamine.(ShanghaiMedJ,20 03,26:895—898)
作者单位:200025上海第二医科大学附属瑞金医院肺科(时国朝，邓伟吾，万欢英，黄绍光)；上海第二医科大学检验系(洪秀华)
Shart~haiDecJ,2003,V o126,Nol2水上项目有哪些
【Keywords】Bronchialasthma;Histamine;Airwaysmoothmusclecells;Cytosoliccalciumcomcentratio n;
Contraction
哮喘是一种慢性气道炎症，有很多细胞和细胞
成分在气道炎症中起作用.其中肥大细胞和嗜碱
性粒细胞受到抗原刺激后释放的组胺在哮喘的发
屋檐拼音
病中起关键作用，组胺可引起支气管平滑肌痉挛,
微血管扩张和通透性增加，腺体分泌增加1.2].本
实验通过激光共聚焦显微镜观察不同浓度组胺对
大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)内钙离子浓度([Ca2]i)和长度的影响，并观察胞外Ca2,G蛋
白，蛋白激酶C(PKC)和丝裂素活化蛋白(MAPK)
在组胺上述生理效应中的作用.
材料与方法
中药渣可以泡脚吗一
，实验材料
SD大鼠(100g)由上海第二医科大学实验动
物中心提供，平滑肌特异a一肌动蛋白SABC即用型试剂盒为武汉博士德公司产品；组胺,PKC抑制剂staurosporine,MAPK激酶抑制剂PD一098059和Fluo-3/AM为美国Sigma公司产品；百日咳毒素(PTX)为美国LifeTechnology公司产品；二氧化
碳(co2)培养箱为美国Heraeus公司产品;LSM510
激光共聚焦显微镜为德国Zeiss公司产品.
二，实验方法
分离SD大鼠气管平滑肌束，以胶原酶消化.
先将细胞接种于24mm×24mm盖玻片上，然后
将其置于直径为35mill的培养皿中培养.随机选
贵宾狗图片取部分原代培养细胞，应用平滑肌特异a一肌动蛋白SABC即用型试剂盒进行纯度鉴定,ASMC纯度> 95%.
待原代细胞培养至6～7d,Hank'S液轻洗后
加入1mlHank'S液，加Fluo一3/AM(终浓度为5×10mol/L)，培养皿置于37℃,5%CO2培养箱中
避光孵育30～60rain.吸净染色液，将盖玻片置
于特制观察池,Hank'S液轻洗后加1mlHank'S
液，置于激光共聚焦显微镜下观察.激光共聚焦显
微镜采用Kr/Ar激光，激发光波长为488nlTl，发射光波长为505～530nlTl,3.0--4.5S扫描1幅图像.
先测定基线[Ca2]i和细胞长度，然后加入不
同浓度的组胺(1×10一,1×10～,1×10
mol/L)，扫描时间为5～10min，将结果存盘.每
张盖玻片只加入1种浓度的组胺，每种浓度至少测定3张盖玻片，每张盖玻片至少分析6个细胞.为
《最后一课》
探讨胞外ca对组胺刺激ASMC[ca2]i和长度
变化的影响，将Hank'S液更换为无钙的D—Hank'S 液，先加入组胺,5rain后再加入氯化钙(CaCla,2
×10-3mol/L)，继续扫描5rain.或先在Hank'S
液加入组胺,5min后再加入乙二醇二乙醚二胺四
乙酸(EGTA,5×10-3mol/L)，继续扫描5min.为
观察PTX,Staurosporine,PD098059对组胺刺激ASMC[Ca2]i和长度变化的影响，在加入组胺
前，分别给予PTX(100ng/ml,24h),Staurosporine
(3×10～mol/L,30min，避光)和PD098059(1×
10～mol/L,30min)预处理.在时间点t的
[Ca2]i变化公式为:(时间t的[Ca2]i一基线
[Ca2]i)/基线[Ca2]i×100%.
本实验以细胞最长轴为ASMC长度，在时间
点t的长度变化公式为:(基线长度一时间t的长度)/基线长度×100%.
托莱多三，统计学处理
应用Statpal(version5.0)统计软件分析两组
数据间的相关性和组间差异，采用t检验，组胺浓
度均经对数转换后计算.
结果
一
