安捷伦1100中文教程
作者: 世良(站联系TA)发布: 2006-05-05
一、培训目的：
● 基本了解1100LC硬件操作。
● 掌握化学工作站的开机，关机，参数设定，学会数据采集，数据分析的基本操作。
二、培训准备：
1、仪器设备： Agilent 1100LC
● G1310A :(单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。
● G1313A（自动进样器）。
● G1316A（柱温箱）。
● G1314A（VWD检测器）。
● G1362A（示差检测器）。
● G1315A/B (DAD检测器)。
● G1321A (FLD检测器)。
● 色谱柱: Zorbax eclip XDB C8,150mm×4.6mm i.d。
2、溶剂准备：
● 色谱级纯或优级纯乙腈（ACN）或甲醇。
● 二次蒸馏水
基本操作步骤:
(一)、开机：
1、打开计算机，进入Windows NT （或Windows 2000）画面，并运行Bootp Server 程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top T oo lbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
初中音乐教学反思6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭 Purge valve。
黄帝内经讲解11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。
(二)数据采集方法编辑：
1、开始编辑完整方法：
● 从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：
● 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
● 单击Ok 进入下一画面。
3、泵参数设定：（以二元泵为例）
● 在“Flow”处输入流量，如1ml/min，在“Solvent B”处输入
70.0,(A=100-B) ，也可Inrt 一行”Timetable” ，编辑梯度。在“Pr essure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
● 单击Ok进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:
空穴来风
● 选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积 1.0ul ，洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“U injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。
● 点击Ok进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:
● 在”Temperature”下面的方框输入所需温度，并选中它，点击”more>>” 键，如图所示，选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。
● 点击ok进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:
● 在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm, 在”Peak width (Respon time)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间,
如>0.1min (2s)。
● 在Timetable 中可以“Inrt”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。点击ok进入下一画面。
7、DAD检测器参数设定:
● 检测波长: 254nm,BW=30nm, 参比波长=350nm,BW=100nm;
● 检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区
域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width（R
espon time）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，围，阈值。选中所用的灯。
● 点击Ok进入下一画面。
8、 RID检测器参数设定:
● 色谱条件:
进样体积: 20ul。光学单元温度: Off 。
极性: 正。峰宽(响应时间) : 4s 。
● 如图所示: “Optical Unit Temperature”---若环境温度控制在±2℃，设定为Off, 若环境温度不稳定，则设定光学单元温度为高于环境温度5度，以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。
● ***** 点击RID图标，选择RID Control ：Heater 设为On，若要循环流动相，必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池，将其设为On，并输入Purge 时间。
9、 FLD检测器参数设定:
色谱条件：
● 样品：P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。
● 进样体积：5ul。
● 柱温箱: 30℃ 。 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。
● 响应时间=4s. 停止时间：出峰完毕。
● Excitation A: 激发波长:200-700nm，步长为1nm，或Zero Order。
● Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm，或Zero Order。
● PMT: 大多数应用适当的设定值为10，若高浓度样品峰被切平头，则减少 PMT 值。
● “Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。
橘右京怎么玩● Multi Ex ：多波长及光谱（激发）。
● Multi Em：多波长及光谱（发射）。
● 同时可以输入围Range、步长step、采集光谱。
10、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。
11、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。
12、从菜单“View”中选中”Online signal” ，选中Windows 1，然后单击Change 钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击Ok.(如同时检测二个信号，则重复12，选中 Windows 2)。
13、从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。
区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。
14、从Instrument 菜单选择System on。
15、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。（DAD, VWD色谱图如下所示：）
（三）、数据分析方法编辑:
1、从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。
2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。
3、做谱图优化，从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。从Ranges 中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok，或选择”U Ranges” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4、积分:
2一4人小游戏>马婷达(1)、从“Integration”中选择“Auto integrate”，如积分结果不理想，再从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的Slope nsitivity，Peak width，Area reject，Height reject。
(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。
(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
5、打印报告:
(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。
(2)、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。
键盘清洁(3)、单击Ok.
(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。
(四)、关机:
● 关机前，用 100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。
● 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关）。
● 关掉Agilent 1100电源开关。
(五)、Agilent 1100 LC维护保养：
1、色谱柱长时间不用，存放时，柱应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）
2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
*3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
*4、带al-wash的 1100，要配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹
吸排出，溶剂不能干涸。
5、其它主意事项见说明书，或由现场工程师介绍。
维护知识问答
1、为什么溶剂和样品要过滤?
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。
色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
样品过滤头的类型：
30mm径：适用于大进样量的过滤，由0.2μm和0.45μm两种规格，材料有纤维素，醋酸纤维，聚四氟乙烯。处理样品体积少于50μl。
13mm径：适用于围广的过滤，由0.2μm和0.45μm两种规格，材料为纤维素。3mm径：适用于小进样量的过滤，由0.2μm和0.45μm两种规格。处理样品体积为7μl。
滤膜类型：
聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。
2、为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？
HPLC用缓冲盐时，由于泵头的缓冲盐溶液存在高压析盐现象，析出的细小盐粒非常坚硬，它附着在蓝宝石活塞杆上，随着蓝宝石活塞杆的往复运动，容易产生划痕，并磨损密封垫，造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时，必须使用该在线冲洗选项. 清洗液配制: 90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。
3、为什么Agilent 1100LC的流动相管路非常细?
在使用HPLC时，应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent 1100LC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。
毛细管线分类：0.17mm径 ------绿色 ;0.12mm径-------红色。
PEEK 管线：径 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛细管线优点: 柔韧性好.
***Agilent 公司同时备有1/16in 的粗外径毛细管线，适用于不同习惯的用户 ，优点是刚性好，但柔韧性差一些。
4、流动相使用前为什么要脱气？
项目考察流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在
