高效液相色谱仪操作步骤
1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3. 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4. 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。点击file，选取lect urs and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器
等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9. 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10. 登记。
一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？
答:关于漂移问题：
1． 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定
2． 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3． 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
1． 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2． 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3． 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
二、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？</B>
答: 1． 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
如何锻炼小腿肌肉2． 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子
三、问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法</B>
答: 1． 样品量不足，解决办法为增加样品量
2． 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3． 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4． 检测器衰减太多。调整衰减即可。
5． 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6． 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7． 检测池中有气泡。解决办法为排气。
8． 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9． 流动相流量不合适。调整流速即可。
10． 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
四、问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？</B>
答：原因可能有：
1． 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；
2． 比例阀失效，更换比例阀即可；
3． 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；
4． 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；
5． 系统检漏，找出漏点，密封即可；
6． 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
五、问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？</B>
答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本
身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1． 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
2． 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；
3． 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；
4． 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。 一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
Agilent1100液相基本操作步骤
高铁什么时候检票(一)、开机：
1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control饭店怎么经营才能吸引客人”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”5的乘法口诀教学反思，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
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9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
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10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵， 关闭
Purge valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：
1、开始编辑完整方法：
● 从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：
● 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
● 单击Ok 进入下一画面。
3、泵参数设定：（以二元泵为例）
● 在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Inrt 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
● 单击Ok进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:
● 选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“U injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。
● 点击Ok进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:冰火两重天什么意思
● 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击乘法口诀表下载”more>>” 键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。 ● 点击ok进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:
● 在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在”Peak width (Respon time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min (2s)。 ● 在Timetable 中可以“Inrt”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。点击ok进入下一画面。
