原创性声明
本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。
论文作者签名：幽日期：２一‰与．９
关于学位论文使用授权的声明
本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。
（保密论文在解密后应遵守此规定）
论文作者签名：盟导师签名：芝竺二！一日期：ｊ—ｑ·｝Ｊ
一．坐查盔兰堡：！：兰堡垒壅一一
＿————————＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－—－＿＿＿＿＿＿＿＿＿●＿—————＿———————＿＿—＿＿＿＿＿＿＿＿－－＿＿－＿＿＿＿＿＿———————
血管抑素基因转染及联合化疗治疗人卵巢癌
裸鼠移植瘤的实验研究
魔法棒怎么做专业研究生导师妇产科
孙平
孔北华教授
我不是小三中文摘要
目的：
Ｉ．研究血管抑素Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其相关机理。
２．研究血管抑素基因联合化疗药物顺铂对人卵巢癌细胞ＳＫＯＶ３诱导的裸鼠腹腔肿瘤和腹水的抑
客户经理助理制作用及其相关机理。
仿写秋天的怀念方法：
使用ＢＡＬＢ／Ｃ遗传背景的雌性裸小鼠作为实验动物，４—５周龄，按ＳＰＦ级饲养。人卵巢上皮癌细胞株ＳＫＯＶ３用含有１０％ｄ、牛血清的ＲＰＭＩｍｅｄｉｕｍ１６４０在３７。Ｃ、５％Ｃ０２条件下培养。收集肿瘤细胞，调整细胞悬液浓度。于裸鼠背部皮下注射细胞悬液０，２ｍｌ（细胞总数约为５ｘ１０６个），裸鼠腹腔内注射细胞悬液０．２ｍｌ（细胞总数约为ｌｘｌ０７个），建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和腹水瘤动物模趔。血管抑素基因真核表达质粒采用分子生物学方法大量制各，转染细胞时以阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ作为介导。
皮下移植瘤实验：将荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、空质粒组和基因治疗组，待肿瘤生长至直径约０．４ｃｍ时，分别向瘤体内注射无菌生理盐水、空质粒ｐｃＤＮＡ３、Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ／ｐｃＤＮＡ３。观察各组裸鼠的肿瘤生长曲线，２ｌ天后取肿瘤标本作免疫组织化学检查（ＳＡＢｃ法）及蛋白质印迹（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）检查，检测各组肿瘤组织＠Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ、ＶＥＧＦ的表达和微血管密度（ＭＶＤ），利用ＴＵＮＥＬ染色法行原位细胞凋亡分析。
东人学博士学位论文
腹水瘤实验：裸鼠腹腔接种卵巢痛细胞后被随机分为空质粒组、基因治疗组、化疗组和联合治疗组，待７天后先进行基因治疗再进行化疗。基凶治疗时分别向各组裸鼠腹腔内注射空质粒ｐｃＤＮＡ３、Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ／ｐｃＤＮＡ３、生理盐水、
Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ，ｐｃＤＮＡ３，化疗时向化疗组和联合治疗组裸鼠腹腔内注射顺铂溶液。观察各组裸鼠的腹水量、腹腔瘤负荷，取肿瘤标本作免疫组织化学检查（ＳＡＢＣ法）及蛋白质印迹（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）检查，检测各组肿瘤Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ的表达和微血管密度（ＭｖＤ），利用ＴＵＮＥＬ染色法行原位细胞凋亡分析。
采用ＳＰＳＳｌｌ．５统计分析软件进行数据处理。免疫组化和腹腔荷瘤量的统计分析采用矛检验。其它实验数据以Ｘ±ｓ表示，采用单因素方差分析（ＳＮＫ法）检验。当Ｐ＜０．０５时，统计学上具备显著性差异。
结果：劳动关系和劳务关系的区别
１．对于人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型：Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因治疗具有抑制肿瘤生长的作用，但是不能消灭肿瘤，肿瘤以缓慢的速度生长。Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因治疗组的肿瘤组织中呈现Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ局部高表达，微血管密度（ＭＶＤ）低于对照组，ＶＥＧＦ表达高于对照组。细胞凋亡指数（ＡＩ）高于对照组，统计学检验有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。
２．对于人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型：Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因治疗可以明显抑制腹腔内肿瘤及腹水的形成（Ｐ＜Ｏ．０５），肿瘤组织内呈现Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ的高表达，ＭＶＤ明显下降，肿瘤细胞凋亡明显增加；与化疗药物顺铂联合应用后产生协同作用，抑瘤作用比单用Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ或顺铂更加明显（Ｐ＜ｏ．０５）。
结论：
１．Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因可以通过抑制血管内皮细胞增生而抑制肿瘤生长，其作用的发挥是独立于ＶＥＧＦ的。
２．Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ基因可以抑制人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３诱导的裸鼠腹腔内肿瘤和腹水的形成，而且与化疗药物顺铂联合应用后能够产生明显的协同作用。
关键词：卵巢癌；血管抑素基因；抗血管生成治疗；基因治疗；化疗
坐查叁堂堕二！堂些兰里二—————————————————一
ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙＯｎｔｈｅＩｍｐｌａｎｔｅｄＨｕｍａｎＯｖａ，ｒｉａｎｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ
Ｍａｊｏｒ：ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ
Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：ＰｉｎｇＳｕｎ
ＴｕｔｏｒＰｒｏｆ．：ＢｅｉＨｕａＫｏｎｇ
Ａｂｓｔｒａｏｔ
【ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ】
１．ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｎｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｍｐｌａｎｔｅｄｔｕｍｏｒｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｕｍａｎｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＳＫｏＶ３ｉｎｎｕｄｅｍｏｕｓｅ．
２．Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｔｕｍｏｒｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ０１１ａｎｄａｓｃｉｔｅｓｆｌｕｉｄｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｕｍａｎｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ
ｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＳＫｏＶ３ｉｎｎｕｄｅｍｏｕｓｅ
［ＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓｌ
ｆｅｍａｌｅｎｕｄｅｍｉｃｅ，４—５ｗｅｅｋｓｏｌｄ，ｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｔｈｅｃｅｌｌｌｉｎｅｏｆｈｕｍａｔｌｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｎａｍｅｄＳＫＯＶ３，ｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄａｔ３７。Ｃｉｎ１６４０
ｍｅｄｉｕｍ，ｗｈｉｃｈｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ１０％ｃａｌｆｓｅｒｕｍ．Ｔｕｍｏｒｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｉｎｊｉｅｃｔｉｏｎｏｆａｂｏｕｔ５×１０６ａｎｄ１ｘ１０７ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｔｏｔｈｅｂａｃｋａｎｄａｂｄｏｍｉｎａｌｃａｖｉｔｙｏｆＵＵｄｅｍｉｃｅ．
Ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｕｓｅｄａｌｏｎｅ，ｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｔｕｍｏｒｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅｌｏｎｇａｎｄｓｈｏｒｔｄｉａｍｅｔｅｒｓｅｖｅｒｙｄａｙ．Ｏｎｃｅｔｈｅｔｕｍｏｒｓｒｅａｃｈｅｄ０．４ｃｍｉｎｄｉａｍｅｔｅｒ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｉｔｈ１００９ｌＮＳ、ｅｍｐｔｙｐｌａｍｉｄｐｃＤＮＡ３．０ａｎｄａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｐｌａｓｍｉｄ．Ｔｈｅｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙ
些查查堂堡！二！：堕兰一ｃａｔｉｏｎｉｃｌｉｐｏｓｏｍｅＤＯＴＡＰ．ｈ１ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓａｆｔｅｒ７ｄａｙｓｏｆｔｈｅｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ａｎｄｉｎｊｅｃｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｉｔｈｅｍｐｔｙｐｌａｓｍｉｄｐｃＤＮＡ３．０、ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｐｌａｓｍｉｄ、ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｐｌａｓｍｉｄ＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎ．Ｆｏｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｒｅａｇｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｌｉｖｅｒｅｄｉｎａｔｉｍｅｄｆａｓｈｉｏｎ，ｗｈｅｒｅａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｐｌａｓｍｉｄｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｆｉｒｓｔ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｃｉｓｐｌａｔｉｎ２４ｈｌａｔｅｒ．
理实一体化
ＴｈｅｔｕｍｏｒｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｔＯｂｅｕｓｅｄｉｎｔｈｅｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅ
ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ、ＶＥＧＦｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄ
ＭＶＤｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄｏｆｃｅｌｌａｐｔｐｔｏｓｉｓｗｉｔｈａｎａｌｙｓｉｓ，ｏｆ
ＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇ．
Ｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｓｍｅａｎｖａｌｕｅｓ±ｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ（Ｘ±ｓ）＋ＳＮＫｔｅｓｔａｎｄｒｔｅｓｔｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，ｗｈｅｒｅａｖａｌｕｅｌｅｓｓｔｈａｎＯ．０５（Ｐ＜Ｏ．０５）ｄｅｎｏｔｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．ＴｈｅｓｏｆｔｗａｒｅＳＰＳＳｌｌ．５ｗａｓｕｓｅｄｉｎｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．
［Ｒｅｓｕｌｔｓ］
１．Ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｕｍｏｒｇｒｅｗｒａｐｉｄｌｙｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｒｅａｃｈｉｎｇｌｃｍｉｎｓｉｚｅ１８—２１ｄａｙｓ；ｗｈｅｒｅａｓ，ｉｎｔｈｅａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｒｏｕｐ，ｔｕｍｏｒｓｗｅｒｅｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｔｅｒｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ，ｂｕｔｔｈｅｙｄｉｄｎｏｔｖａｎｉｓｈａｎｄｇｒｏｗｕｐｓｌｏｗｌｙ．Ｉｎｍａｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｖｅａｌｅｄｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｉｎｓｉｔｕ．Ｉｎ
ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＥＧＦｉｎｔｈｅａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｒｏｕｐｗａｓａｌｉｔｔｌｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＡＩｉｎｔｈｅａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｒｏｕｐｗａｓｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）。ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙＭＶＤｗａｓｌｏｗｅｒ（Ｐ＜０．０５）．
２－Ｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ３ｇｒｏｕｐｓｅｘｃｌｕｄｅｄｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐｃｏｕｌｄｂｅ
竭心
ｆｏｕｎｄｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｕｍｏｒ—ｇｒｏｗｔｈａｎｄｔｈｅａｓｃｉｔｅｓ—ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．ＴｈｅａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｇｒｏｕｐｃｏｍｂｉｎｉｎｇａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｃｉｓｐｌａｔｉｎｗａｓｍｏｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｔｈａｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔＷＯｇｒｏｕｐｓ．Ｉｎｔｈｉｓｇｒｏｕｐ，ＭＶＤｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｎｄＡｌｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ．暗财是什么意思
［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］
