一、溶液配制
一直走
1：LB /Agar /Amp，配置100 mL汪峰身高。
1g tryptone、0.5g Yeast Extract、0.5g Nacl和1.5 g Agar。121 ℃灭菌加8 mg Amp。
2：LB /Broth /Amp，配置100 mL。
1g tryptone、0.5g Yeast Extract、0.5g Nacl和100 ml H2O。121 ℃灭菌后加8 mg Amp。
3：A buffer，配置1000 mL。岑参怎么读
Tris 6.1 g（50mM）、右旋G+快乐运动会 dextro 9.02 g（50mM）、EDTA 0.373 g（1mM）。定容至1 L时，pH为7.9。
4：Pre-lysis buffer，配置1000 mL。
Tris 6.1 g（50mM）、右旋G+ dextro 9.02 g（50mM）、EDTA 0.373 g（1mM）。定容至1 L时，pH为7.9。
5：Lysis buffer，配置1000 mL。
Tris 1.22 g（10 mM）、Kcl 3.73 g（50mM）、EDTA 0.373 g（1mM）、北的笔顺怎么写PMSF（剧毒） 0.1742 g（1mM）、Tween20 5 mL（0.5%）和ci成语NP-40（0.5%），定容至1 L。
6：存储缓冲液Storage buffer，配置1000 mL。
Tris 6.1 g（50 mM）、Kcl 3.73 g（50mM）、EDTA 0.373 g（0.1mM）、DTT 0.154g（1mM）、PMSF（剧毒）悲伤的头像女生 0.0871 g（0.5mM）和甘油500 mL（50%），定容至1 L。
7：（NH4）2S04 30g
8：IPTG 125 mg。
9：溶菌酶，用Buffer A配置成4 mg/ml 的溶液50 ml。
二、实验步骤
酶抽提；
1、用含有pTaq的大肠杆菌划（LB /Agar /Amp）平板，37 ℃过夜培养，挑取单克隆，接种于50 mL LB /Broth /Amp中，220 rpm 37 ℃培养过夜。
2、取500 μL过夜培养的大肠杆菌接种于1 L LB /Broth /Amp中，220 rpm 37 ℃培养11 h，OD600遗传定律为0.8，加入125 mg IPTG。继续培养12 h。
3、置于冰上冷却后，6000 rpm，4 ℃，离心10 min收集细菌，弃去上清。
4、25 mL A buffer重悬菌体，6000 rpm，4 ℃，离心10 min，去上清。
5、加入含4mg/ml溶菌酶的Buffer A 25ml，室温放置15分钟。加入12.5 mL Pre-lysis buffer于室温下充分重悬裂解，再加入12.5 mL lysis buffer，混匀后75 ℃水浴1 h（期间摇匀数次）。
6、冰上冷却后，15000 rpm，4 ℃，离心10 min。上清转移到新的筒，按100 mL 上清加入30 g (NH4)2SO4迅速使溶液混匀，15000 rpm，4 ℃，离心10 min。收集漂浮的乳状物及管底少量沉淀。
7、3500 rpm，4℃，离心10 min，使粗蛋白沉积于离心管底部，并用移液枪尽量吸除液体，保留Taq 粗酶沉淀。
8、20 mL A buffer 溶解，并用2 L storage buffer 透析（分两次），透析后的蛋白用storage buffer 1:1稀释，即可用于PCR。
