梅毒螺旋体抗体检测方法分析
摘要 目的 人体感染梅毒螺旋体后，具有高度传染性，血清梅毒螺旋体抗体检测对梅毒诊断和疗效进行分析很重要，比较梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）三种检测方法，探讨如何合理利用这3种方法来检测梅毒抗体。 方法 对龙岗中心医院350例梅毒患者、100例非梅毒患者、50例正常人的血清标本进行TP-ELISA、TRUST、TPPA三种方法联合检测并进行分析。 结果 153例一期梅毒患者阳性检出率分别为97.4%、83.7%、98.9%；185例二期梅毒患者阳性检出率均为97.8%、96.2%、100%；22例潜伏期梅毒患者阳性检出率分别为95.5%、72.7%、100.0%；100例非梅毒患者阳性率分别为1%、4%、1%；50例健康体检者的阳性率均为0。 结论 三种方法都是梅毒检测的快速方法， pangTP-ELISA适合批量筛查试验而且对早期梅毒灵敏度也较高，适合早期特异性诊断，TRUST 可以测定抗体滴度，疗效观察优于TP-ELISA和TPPA，TPPA的灵敏度特异性最高，适合作为确证试验。
关键词 梅毒螺旋体 检测方法 检出率 试验
Syphilis helicoid antibody test method analysis
Abstract objective Human infections after syphilis helicoids,Highly infectious, Serum syphilis helicoid antibody test for syphilis diagnosis and curative effect analysis is very important,compare syphilis ELISA test (TP-ELISA),Syphilis armour aniline red do not heat rum test (TRUST)with Syphilis helicoid gelatin particles agglutinate experiment (TPPA) the three kinds of methods, Discuss how to reasonable u of the three methods to detect syphilis antibody. Methods 153 cas of syphilis patients a positive detection rate of 97.4%, 83.7% and 98.9% respectively; 185 cas of patients with two positive detection rate of syphilis are 97.8%, 96.2%, 100%; 22 cas of syphilis patients positive incubation period detection rate of 95.5%, 72.7% and 100.0% respectively; 100 cas of syphilis positive patients were 1%, 4% and 1%; 50 cas of all the healthy check-up of positive for 0. Conclusions Three methods are syphilis detection method of fast, TP-ELISA suitable for mass screening test for early syphilis and higher nsitivity, Suitable for specific diagnosis early, TRUST can be determined antibody concentration degree, Clinical obrvation is better than the TP-ELISA and TPPA, The nsitivity of the highest TPPA specificity, As a test for confirmation.
Keywords Treponema pallidum test method relevance ratio testmaintenance是什么意思
比较梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）为临床上常用的检测方法，TP感染后可产生两种抗体，一种是抗心磷脂抗体，一种是抗TP特异性抗体，据文献[1]报道，人体感染梅毒螺旋体后，血清中产生的抗螺旋体抗体相对与抗类脂质抗体早英文名测试[2]。由于检测方法的局限性所以存在误检和漏检。以下是实验分析过程：
材料和方法
1. 材料
1.1 标本来源 收集本院2011年10月到ignore是什么意思2012年3月门诊、住院病人、体检者合格新鲜的血清标本共500份，年龄在40±28周岁。
1.2 试剂盒 TP-ELISA（双抗原夹心法）试剂盒来自珠海丽珠股份有限公司、TRUST试剂盒来自上海荣盛生物药业有限公司、TPPA试剂来自日本富士瑞必欧株式会社。
1.3 设备 汇松洗板机、MK2酶标仪
2. 方法
2.1 静脉采血取血清，离心后吸取上清液进行测试，所有标本均用TP-ELISA、TRUST、TPPA进行梅毒筛查试验，所有检测操作程序和结果判读均按照试剂盒说明书进行，每次试验均设阴阳质控对照，试剂盒在有效期内使用。
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2.2 TP-ELISA试验 在每孔加入待检样本，酶标试剂各50μL，轻轻震荡混匀，封板，37℃水浴30min，洗版5遍，扣干。每孔加入显色剂A、B液各50μL，混匀，封板37℃，15min再加50μL终止液混匀比色，酶标仪450/630nm，空白孔对照调零，读取吸光度（A值），A<临界值为阴性，A≥临界值为阳性。
2.3 TRUST试验 定性试验：加50μL待测血清在纸卡的圆圈内，用盒内专用针头垂直滴加TRUST试剂1滴，以100r/min离心8分后在显微镜下观察凝集状况，凝集为阳性。半定量试验：对检测样本进行倍比稀释，按定性试验方法进行检测，以最大稀释倍数凝集处作为最终滴度。
2.4 TPPA室温条件下，在U形板上用稀释液将每份血清样本稀释，加入致敏粒子或未致敏粒子，静置2h后观察结果，加致敏粒子孔大于或等于1:80为阳性。
2.5 统计学处理 计数资料采用x²检验，P<0.05，为差异有统计学意义。
结果
所有标本均用三种方法（TP-ELISA、TRUST、TPPA）进行检验，153例一期梅毒患者的阳性检出率依次分别为97.4%、83.7%、98.9%，185例二期梅毒患者阳性检出率均为97.8%、96.2%、100%，22例潜伏期梅毒患者阳性率为95.5%、72.7%、100.0%，100例非梅毒患者阳性率依次分别为1%、4%、1%，50例健康体检者的阳性率均为0。具体结果见表1：
表1梅毒患者、非梅毒者、健康者三种试验阳性率（%）
试验者 | 梅毒分期 | 总例数 | TP-ELISA | TRUST | TPPA |
阳性数 | 阳性率 2011高考试题 | 阳性数 | 阳性率 | 阳性数 | 阳性率 |
梅毒患者 | 一期 | 153 | 149 | 97.4 | 128 | 83.7 | 151 | 98.9 |
二期 | 185 | 181 | 97.8 | 178 | 96.2 | 185 | 100.0 |
潜伏期 | 22 | 21 | 95.5 | 16 | 72.7 | 22exoto | 100.0 |
非梅毒者 | | 100 | 1 | 1 | 4 | 4 | 1 | 1 |
健康者 | | 50 | 0 | 0 | violet怎么读 0 | 0 | 0 | 0 |
| | | | | | | | |
TP-ELISA有2例一期梅毒阴性，而TPPA检测结果阳性，对样本进行复检，仍为阴性，可能抗体浓度不够，而二期梅毒TP-ELISA有4例阴性，TPPA检测结果全为阳性，对样本稀释后进行复检，为阳性，证实为梅毒特异性抗体过高而出现前带现象造成TP-ELISA结果阴性。非梅毒患者中有34例为60岁以上的老人，主要原因可能是这些老年患者所换的基础疾病使机体释放诱导产生抗类脂抗体或梅毒特异性抗体的交叉抗原，TP-ELISA，TRUST、TPPA均未配吸收稀释剂吸除与非梅毒螺旋体交叉反应的抗体，所以需要不断进行方法改进，提高特异性。
讨论
梅毒自欧洲传入中国已有500年的历史[3]，是我国曾经基本消灭的性传播疾病，大量的临床资料以及有关的流行病学调查结果显示，在我国梅毒的发病率有逐年上升的趋势[4]。为了控制梅毒的院内感染，输血传播疾病等，梅毒血清学检测已经列入献血者和临床患者输血的常规检查项目。对梅毒的早发现，早诊断，早治疗是控制其蔓延至关重要的一个环节。所以加强梅毒的筛查力度，可以及时对各个时期的梅毒采取有效的治疗措施。
TP-ELISA是用Nichol株为抗原，以超声波击碎，通过基因工程途径生产的重组抗原包被在微孔板上，测定血清中梅毒特异性抗体。此法可用于各期梅毒诊断，灵敏度为96%，对感染血清灵敏度为95%[5]。 在血清学检查中，对特异性抗体的检测，TP-ELISA被广泛应用，因其自动化程度高，可大批量检测，试剂相对来说比较廉价，而且保存期更久更稳定，可以较好地进行质量控制、敏感性高、特异性较高[6]，与TPPA常接近，及成本低廉，因此被大多数试验视为首选[7]。但此法检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体，梅毒IgG抗体在治愈后相当长时间里仍然存在较高的阳性率，甚至终生阳性，所以TP-ELISA阳性说明正在感染或有既往感染，不能判断梅毒疾病活动与否及监测疗效，可用于早期梅毒判断与排除，适用于临床梅毒患者血清学抗体的早晚期及手术前、输血前常规筛查。
TRUST为非密螺旋体试验，是检测类脂质抗体的试验，又称筛选试验，属性病研究实验室试验（VDRL） 的改良试验, 由于在抗原中加入了氯化胆碱和EDTA等试剂, 使血清不必加热处理即能达到灭活和延长抗原保存期的目的，在抗原中加入了胶性碳和甲苯胺红便于肉眼观察结果。作为初筛试验具有操作简便、快速、价格低廉的特点，可作为梅毒疗效观察或随访有否复发或再感染的指标[8]。在一期梅毒初期，血清内抗体的量还不够多时，TRU
ST试验会是阴性，从实验可以看出其漏检率较高。硬下疳出现1到2周后，TRUST试验才转为阳性。说明对于梅毒早期患者体内非特异性抗体和特异性抗体产生均需一定的时间或由于二期梅毒患者血清中的心磷脂含量过多而抑制TRUST阳性反应出现，即所谓的前带现像[9]。试验中的阴性结果不排除具有传染性，应该用其他实验确证或四周后复查。
TPPA是将纯化的致病性梅毒的精致菌株成分包被在人工载体明胶粒子上，血中存在的梅毒螺旋体抗体时，可出现肉眼可见的明胶颗粒凝集反应。从本试验可以看出TPPA检测血清中的梅毒螺旋体抗体，能排除各种非特异性反应，特异性好、灵敏度高，已是目前公认的检测梅毒血清试验方法，但试剂较贵，检测用时较长[10]。TPPA操作复杂，结果难以自动，原始数据无法保存，故一般用于临床确诊试验。所以临床上高度可疑为梅毒患者而TP-ELISA为阴性者，应对血清样本稀释后再检测或采用TPPA试验复检，稀释时可作梯度稀释，防止因抗体滴度过高而稀释倍数不足带来的假阴性。
近十年来TP的人工抗原合成取得了很大的进展，梅毒检测方法的发展突飞猛进，用于研究的试剂盒也不断更新。敏感度和特异度不断提高，对早期梅毒、潜伏梅毒、先天梅毒、无症状神经梅毒的检出提供了极大的帮助。综上所述，要认真对待梅毒检测阳性的问题，这
些试验各有优缺点，结合临床病史，及时区分真假阳性，联合检测对减少梅毒的发病率和控制其传播将起到重要的作用，对于真阳性的患者及时治疗，而对假阳性的患者要耐心解释，减少患者的经济负担及心理负担，减少不必要的医患矛盾及医疗纠纷。
参考文献
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[3] 李群，王福华.三种梅毒检测方法的比较[J]，中华医学实践杂志，2006,5（3）：305.citricacid
[4] 梁庆华.3种方法联合检测在老年梅毒诊断中的应用价值[J].检验医学与床,2009,6(7):498～499.
[5] 汪正清.临床微生物学与检验.人民卫生出版社，2008.
[6] 贾月琴，季必华.梅毒螺旋体实验室诊断研究进展[J].安徽医学，2005,26（5）：453～454.
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[8] 董雅荣，李桂娥，马季等.TRUST与USR、RPP在梅毒筛选试验中的对比观察[J], 中华皮肤性病学杂志,1994,5(2):114～115.
