第 44 卷第 4 期2021 年 4 月名於，{I Drug Evaluation Rearch Vol. 44 No. 4 April 2021•751 •匹伐他汀钙片溶出度一致性评价研究
张莉，高扬，李浩然，张志清‘
foreskin河北医科大学第二医院药学部，河北石家庄050000
摘要：目的建立匹伐他汀钙片溶出度测定方法，评价国内仿制药与原研药溶出曲线的相似性。方法建立高效液相色谱（H P L C)法测定匹伐他汀钙片含量，并进行专属性、回收率、精密度、重复性、稳定性等方法学考察。以原研药为参 比制剂，采用桨法，转速50r/min，测定仿制药与原研药在4种不同p H溶出介质（p H 1.2盐酸溶液、p H4.5醋酸盐缓冲液、p H 6.8磷酸盐缓冲液、水）中的溶出度，绘制溶出曲线，采用相似因子（/2)法分析溶出曲线相似性。结果色谱条件为：色谱柱0丨3111〇1^1(^丨8(25〇111111父4.6 111〇1，5哗），醋酸盐缓冲液（冰醋酸500叫、醋酸铵140.6 11^，加水至1000 〇11-)-乙 腈（15:85)为流动相，波长244n m。方法学验证结果均符合检测要求。其中3家仿制药与原研药溶出行为基本一致，另外1家仿制药在水和p H 4.5醋酸盐缓冲液中均与原研药溶出曲线不相似。结论大部分厂家仿制药体外溶出与原研药一致。所建H P L C法适用于匹伐他汀钙片的浓度测定，可为今后匹伐他汀钙片溶出度一致性评价提供参考。
关键词：匹伐他汀钙片；高效液相色谱法；溶出曲线；一致性评价
中图分类号：R927 文献标志码：A文章编号：1674-6376 (2021) 04-0751-05
D O I：10.7501/j.issn. 1674-6376.2021.04.011
Evaluation of dissolution consistency of pivastatin calcium tablets
ZHANG Li,GAO Yang,LI Haoran,ZHANG Zhiqing
Department of Pharmacy, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, China
Abstact: Objective To establish a method for determination of dissolution curve of pivastatin calcium tablets, and evaluate the similarity of dissolution curve of domestic generic drugs and the original drugs. Methods The concentrations of samples were detected by HPLC. The specificity, recovery, precision, repeatability, stability and other methodological studies were carried out. The paddle method was using for the dissolution process. The rotation speed of paddle was 50 r/min. To determine the dissolution profiles of generic pivastatin calcium tablets and the original product in four dissolution mediums (the p H 1.2 hydrochloric acid solution, the p H 4.5 acetate buffer solution, the p H 6.8 phosphate buffer solution and water). The f2 factor method was ud for analyze the similarit
y of dissolution curves. Results A Diamonsil C,gcolumn (250 m m x 4.6 m m, 5 |xm) was ud. Mobile pha consisted of a mixture of acetate buffer(acetic acid 500 and a m m o n i u m acetate 140.6 m g were added to 1000 m L water)-acetonitrile(15: 85), and U V detection wavelength was 244 nm. The results of methodology validation met the detection requirements. The dissolution profile of three generic tablet were similar to the original tablet in the four dissolution media. The dissolution of the other company's products was inconformity to the innovater drug in the water dissolution media and p H 4.5 acetate buffer solution. Conclusion The in vitro dissolution of some generic drugs was significantly different from the original drug. The H P L C method be appropriate for the determination of the concentration of pivastatin calcium tablets, which can provide a reference for further consistency evaluation of pivastatin calcium tablets.
K ey words: pivastatin calcium tablets; HPLC; dissolution profiles; consistency evaluation
匹伐他汀（pitavastatin)为HMG-CoA还原酶抑低效果，用于治疗动脉粥样硬化、高胆固醇血症和制剂，对低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)有显著的降 家族性高胆固醇血症[“2]。匹伐他汀钙片是由日本*
收稿日期：2020-08-16
基金项目：河北省卫健委医学科学研究课题计划（20200916)
第一作者：张莉（丨988—），女，石家庄人，硕士，主管药师，主要从事药物制剂及药物安全性评价研究。Tel: (0311)66002773 E-mail ：L Z19881209@
*通信作者：张志清，主任药师。Tel: (0311)66002771 E-mail:**************
•752 •第 44 卷第 4 期2021 年 4 月名祐个河毛Drug 心〇/“〇"〇"/JearcA Vol. 44 No. 4 April 2021
曰产化学工业株式会社与兴和株式会社共同开发的第三代他汀类药物，于2003年在日本上市。针对 我国部分仿制药质量与国际先进水平存在一定差距的现状，对市售药品开展“一致性评价”已经成为 迫切需要完成的工作。对于口服制剂，溶出度是评 价其内在质量的重要指标，与生物利用度紧密相关，是仿制药一致性评价的关键指标[3]。
本实验以匹伐他汀钙片为模型药物，首先建立 HPLC法来检测匹伐他汀钙含量，然后测定原研和仿制匹伐他汀钙片在多个pH溶出介质（pH 1.2盐酸 溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和 水）中的溶出度，并对溶出曲线进行相似性对比[3]。以此来对市售匹伐他汀钙片进行质量考察，建立匹 伐他汀钙片的体外溶出度一致性评价方法，希望能 为匹伐他汀钙片工艺改进和临床用药提供参考依据。
1材料
1.1仪器
Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters); 2489UV/V is检测器（美国Waters);ZRS-4型智能溶 出试验仪（天津大学无线电厂）；CPA225D型电子分 析天平（德国Sartorius);pH213型台式酸度计（罗马 尼亚HANNA);YB-II型澄明度检测仪（上海精密仪 器仪表有限公司）。
1.2药品与试剂
匹伐他汀钙对照品（中国食品药品检定研宄院，批号101245-201801，质量分数96.2%)；匹伐他 汀钙片（兴和株式会社，规格每片2m g，批号01^8八- E02、FM9W-E01、GL9M-E01)；匹伐他汀钙片（仿制 药A，华润双鹤药业股份有限公司，规格每片2 mg，批号 190601、200408、200505)；匹伐他汀钙片（仿制药B，深圳信立泰药业股份有限公司，规格每片2 m g，批 号 BU19001、B200327、B200361)；匹伐他汀钙片（仿 制药C，江苏万邦生化医药集团有限责任公司，规格 每片 2 m g，批号 1907710、62006705、62006723)；匹 伐他汀钙片（仿制药D，山东齐都药业有限公司，规 格每片1m g，批号1D1906021、1D2006050、1D2007021)；乙腈（色谱纯，赛默飞，批号194210); 水为纯化水，其他试剂均为分析纯。
2方法
2.1色谱条件
013〇1〇1^1(!!18色谱柱(25〇111111父4.6〇1111，5|1111)；流动相为乙腈：醋酸盐缓冲液（冰醋酸500 pL、醋酸 铵140.6 m g，加水至1 000 mL)(85: 15)；体积流量1.0mL/min；柱温35°C；检测波长244 nm；进样量10 m L。
2.2溶液配制
2.2.1对照品溶液配制精密称取匹伐他汀钙对照品15 m g于100 mL量瓶中，流动相溶解定容，得 质量浓度为150 pg/m L的对照品储备液；取储备液 适量，用流动相稀释成质量浓度为2.1 |ag/m L的匹 伐他汀钙对照品溶液。
2.2.2供试品溶液配制将1片匹伐他汀钙片（2 m g)溶解于900 mL流动相溶液中，滤过，即为 质量浓度为2.1 ng/m L的匹伐他汀钙片供试品
溶液。
2.3方法学考察
2.3.1专属性取空白流动相溶液、“2.2.1”项下匹 伐他汀钙对照品溶液、“2.2.2”项下匹伐他汀钙片供 试品溶液，按上述“2.1”项色谱条件测定。结果显 示，流动相溶液在主成分处不出峰，对主成分含量测定无干扰。见图1。配制“2.2.2”项下供试品溶液 适量(约相当于匹伐他汀钙2 mg)，平行6份，进行破 坏性
试验。光照破坏：供试品溶液于4 500 lx下照 射24 h；高温破坏：供试品溶液沸水浴约4 h；酸破 坏：供试品溶液中加入5 mL 1mol/L盐酸，再置沸水 浴中10 min后，放冷，用1mol/L氢氧化钠调节pH，至中性；減破坏：供试品溶液中加入5 m L的 1mol/L氢氧化钠，再置沸水浴中10 min后，放冷，用1mol/L盐酸调节pH，至中性。以上经破坏的样品 按照“2.1”项下色谱条件进行测定。本品在经光照 后，匹伐他汀钙主峰面积下降，增加了 2个杂质峰，见图1-D；经高温破坏后，主峰面积下降；经酸和碱 破坏后，主峰消失，生成2个杂质峰，见图1-E、F。实 验说明，匹伐他汀钙片供试品对光照、高温、酸和碱 均不稳定，所产生的杂质峰与主峰分离度较好，该 方法的专属性强。
2.3.2线性范围精密称取匹伐他汀钙对照品15 mg，于100 mL量瓶中，流动相溶解定容，得质量 浓度为150 (ig/m L的对照品储备液；取储备液适量，用流动相稀释成质量浓度分别为0.30、0.75、1.05、1.50、2.10、3.00 ng/m L的系列对照品溶液，按 照“2.1 ”项下色谱条件测定。以匹伐他汀钙质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，标准曲线方程：55 344 X+ 1941 (尺2=0.999 5 )，匹伐 他汀钙在0.30〜3.00 fig/m L线性关系良好。
2.3.3 回收率精密称取 8.90、11.10、13.35 mg 匹伐他汀钙对照品各3份，分别置于100 mL量瓶 中，加入溶出介质振摇溶解，定容。精密量取其
第 44 卷第 4 期2021 年 4 月元Drug Evaluation Rearch Vol. 44 No. 4 April 2021 •753 •^-------A------------------------------------
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A-流动相溶液;B-匹伐他汀钙对照品：C-匹伐他汀钙供试品；D-光照
破坏；E-酸破坏:F-碱破坏
A-m o b il e p h a s e s o l u t i o n；B-r e f e r e n c e s u b s t a n c e o f p iv a s t a t i n c a l c i u m；C-t e s t s o lu ti o n o f p i v a s t a t i n c a l c i u m t a b l e t；D-d e s t r o y e d b y li g h t ；E-
d e s t r o y e d b y a c i d；F-d e s t r o y e d b y a l k a li
图1高效液相色谱图
Fig. 1HPLC chromatograms编制英文
中2mL，置lOOmL量瓶中，加入溶出介质定容。配 制成测定浓度80%( 1.78 ng/mL)、100%(2.22 |〇g/mL)、120%(2.67ng/mL)的溶液，按“2.1”项下色谱条件测 定溶液中匹伐他汀钙峰面积，带入“2.3.2”项中标准 曲线方程，计算得质量浓度Ca s，计算回收率=
结果显示，pH 1.2盐酸介质下低、中、高3 种质量浓度平均回收率95.13%, RSD为1.66%;pH 4.5醋酸盐介质下3种质量浓度平均回收率96.61%, RSD为1.98%;pH 6.8磷酸盐介质下3种质量浓度平 均回收率95.99%，RSD为1.72%；水介质下3种质量 浓度平均回收率97.98%, R SD为1.11%。实验表明，在所选择的溶出条件及测定条件下，方法准确 度良好。2.3.4精密度考察取“2.2.2”项下供试品溶液1份，按照“2.1”项下色谱条件测定含量，连续进样6 次，RSD为0.56%。再取“2.2.2”项下供试品溶液1份，按照“2.1”项下色谱条件，连续测定3 d，RSD为 0.98%。
2.3.5重复性试验按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，平行制备6份供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件分别测定含量，测得6份供试品溶液的峰面积RSD为0.91%。
2.3.6滤膜吸附试验取“2.2.2”项下供试品溶液2 份，其中一份用0.45 的尼龙滤膜滤过，弃去不同 体积的初滤液，取续滤液测定药物含量。另一份供 试品溶液做离心处理，取上清液测定药物含量。各 个续滤液样品浓度与离心的样品浓度相比较，计算 回收率。以上操作重复3次，测得平均回收率为99.81 %，RSD为0.79%。结果显示，滤膜对匹伐他汀 钙的吸附作用基本无影响，样品溶液在滤过时均无需弃去初滤液。
2.3.7稳定性考察将4片供试品分别投入4种介 质（900 mL)中，超声15 min加速溶解，取出少量溶液过膜，在室温下放置0、2、4、6、8、12 11，按照“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图和峰面积。将Oh 的峰面积计为100%，计算每个时间点样品峰面积变化情况。
匹伐他汀钙片在3种介质（pH4.5、pH 6.8和水）中，12 h内质量分数稳定在95%以上，而在pH 1.2介 质中稳定性较差。见表1。
表1匹伐他汀钙片在4种溶出介质中的稳定性考察Table 1Study on stability of pivastatin calcium tablets in
four dissolution mediums暮光之城歌曲
溶出介质
匹伐他汀钙片溶出样品质量分数/%
O h2h4h6h8h12 h p H 1.2盐酸溶液10095.1893.9793.3292.9791.91
greeting是什么意思p H4.5醋酸盐缓冲液10099.2999.9399.8399.9495.02
p H6.8磷酸盐缓冲液10099.9099.0598.4598.5096.36水100100.0099.8999.6999.3798.73因此，本实验选择氢氧化钠作为碱性调节剂。在pH 1.2介质下的溶出样品（500 nL)中加入氢氧化 钠，并对加入量进行摸索，结果见表2。结果显示，向pH 1.2样品（500 n L)中加入0.1 mol/L氢氧化钠500 pL,4 h后药品质量分数维持在97%以上，稳 定性有显著提高。由于加碱后的样品放置12 h后，质量分数仍会降低4.08%，所以全部样品在取样后
• 754 •r l 制药A
comanche
.制药B 仿制药C 仿制药D
A-pH 1.2盐酸溶液；B-pH 4.5醋酸盐缓冲液；C-pH 6.8磷酸盐缓冲
液;D -水
A - pH 1.2 hydrochloric acid solution ； B- pH 4.5 buffer solution ； C-
pH 6.8 buffer solution ； D- water
图2匹伐他汀钙片在4种不同介质中的溶出曲线U=18)
Fig. 2 Dissolution profiles of pivastatin calcium tablets in four kinds of dissolution mediums (/i=18)
/2 = 501g ，1
+100
当两条溶出曲线/2值不小于50时，表示两药品 的溶出度相似。原研和仿制药累积释放度在85% 以上的
取样点应不多于1个，一般除0时外，选择3 点以上进行比较。普通制剂若15 m in 内溶出量达 85%以上，可认为溶出曲线相似。
匹伐他汀钙片仿制药与原研药在4种溶出介质 中的/2值计算结果，见表3。
表3匹伐他汀钙片仿制药与原研药溶出曲线的，值
Table 3 /2 between test medicine and reference medicine
溶出介质/2值
仿制药A 仿制药B 仿制仿制 药C
药D
p H 1.2盐酸缓冲液52.1664.1165.68 72.76p H 4.5醋酸盐缓冲液46.8161.8480.43 68.73p H 6.8磷酸盐缓冲液
60.6065.16
67.10 69.06
水
44.59
15 min#fi!j>85% 58.87 56.64
憐酸盐缓冲液和水）各900 mL 为溶出介质，桨法，转 速为 50 r /min ，经 5、10、丨5、20、30、45 min 时，取溶液 适量（10 mL )，滤过，并即时补充相同温度相同体积 的溶出介质。对于pH 4.5醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷 酸盐缓冲液、水为溶出介质时，直接取续滤液作为 供试品溶液，而对于pH 1.2盐酸溶液为溶出介质 时，精密量取续滤液500 nL ，立即加入0.1 mol /L 氢 氧化钠500 nL ，摇匀，作为供试品溶液。进样量10心， 按“2.1”项下色谱条件测定含量，用外标法以峰面积 计算各时间点的溶出量，再计算各时间点的累积溶 出量（对于pH 1.2介质下各时间点的溶出量要进行 体积折算）。以18片（每批6片）的平均累积溶出量 为纵坐标，时间为横坐标，绘制溶出曲线。
溶出率=每个时间点的累积溶出量/标示量
匹伐他汀钙片在不同介质中的溶出曲线 见图2。
2.4.3批间差异考察计算每个取样时间点下，同 一厂家3批样品的溶出度相对标准偏差，以考察其 溶出行为的批间均一性。
原研药在4种介质中，每个时间点溶出度RSD 均小于丨0 %，批间差异较小；所有仿制药第一个时 间点RSD 不超过20%，后面的点不超过10%。仿制 药A 在4种介质中，第一个点溶出度RSD 均大于其 他3种仿制药，批间差异最大。
gettyimages2.4.4 溶出曲线的相似性判定[5]采用相似因 子(/2)法判定仿制药与原研药之间溶出曲线的相似 性，即将原研药的平均溶出度(/?,)、仿制药的平均溶 出度（7；)和平均溶出时间点的数量(《= 18)，分别带 入以下公式，计算/2值：
第 44 卷第 4 期 2021 年 4 月 名袷个M l Drug Evaluation Rearch Vol. 44 No. 4 April 2021
表2在pH1.2介质中匹伐他汀钙片溶出样品的稳定性考察
Table 2 Study on stability of pivastatin calcium tablets in pH 1.2 hydrochloric acid solution
p H 1.2溶出样品中加入匹伐他汀钙片溶出样品质量分数/%
0.1 m o l /L N a O H 的量/h L
O h 2h 4h 6h 8h 12h 010095.1893.9793.3292.9791.9125010097.3695.6394.6893.7592.8740010097.9596.2695.6794.3793.23500
100
99.17
97.18
97.58
96.59
希拉里竞选视频95.92
4 h 内测定。2.4溶出度测定
2.4.1溶出介质选择[3]分别以pH 1.2盐酸溶液、
pH 4.5醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、水为溶
出介质。
2.4.2溶出曲线测定方法[4]取本品，分别以4种 溶剂(pH 1.2盐酸溶液、pH 4.5醋酸盐缓冲液、pH
moderated
6.8
第 44 卷第 4 期2021 年4 月卷)Dr ug Evaluation Rearch Vol. 44 No. 4 April 2021 •755 .
结果表明，仿制药B、C和D与原研药在4种介 质中/2值均大于50，溶出曲线均相似。但是，仿制药 A在pH4.5醋酸盐溶液和水中,/2值小于50，与原研 药溶出曲线不相似。
3讨论
相位差
由于匹伐他汀钙在低pH环境中稳定性较差，如何提高匹伐他汀钙在pH 1.2介质中的稳定性成为实验难点之一。本实验选择氢氧化钠作为碱性调节剂，向pH 1.2介质样品中加入等体积0.1mol/L 氢氧化钠500 M L，混合后的样品p H接近7，稳定性 有显著提高[6]。但也并不是加入氢氧化钠的量越大 越好，色谱柱的耐受pH值为2〜11，当加入0.1 mol/L 氢氧化钠750 nL后，样品pH值接近11，碱性过大会 损坏色谱柱，故不采用。
匹伐他汀钙结构中的3,5-二羟基-6-庚烯酸对 于光、热均比较敏感，因此原研药的处方中采用了特殊作用的辅料(p H辅助化剂及多价金属盐）来防 止形成内酯和氧化产物，而仿制品中的关键辅料可能与原研不同，或采取其他方法来防止产品降解。这些因素都可能会影响片剂的质量和溶出过程。[7]通过比较国产样品与原研药在4种溶出介质中 的溶出度，可见有些市售国产仿制药与原研药溶出曲线不相似，
存在一定的质量差异。分析其原因可 能出现在仿制药的原辅料种类、质量和生产工艺等 诸多方面，而这些差异很可能是导致体内生物等效性试验失败的原因。
针对仿制药重复品种过多，质量参差不齐的情 况，开展仿制药一致性评价可有效地提高仿制药质量，提升仿制药体内生物等效性试验成功率，降低 医疗总费用支出[8]。本研究建立HPLC法和溶出方 法对于匹伐他汀钙片仿制药质量与疗效一致性评价具有一定的参考意义。
利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突
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[责任编辑兰新新]
