.论著.
2018年广西崇左边境地区新报告HCP
感染者治疗前耐药监测结果分析！
杨去1梁华悦1刘德平2张谊3农丽华4梁冰玉1梁浩"
1广西医科大学公共卫生学院&广西艾滋病防治研究重点实验室，南宁市530021；2崇左市疾病
预防控制中心，广西崇左市532200；3崇左市龙州县疾病预防控制中心，广西崇左市龙州县532400；
short怎么读4崇左市宁明县疾病预防控制中心，广西崇左市宁明县532500
【摘要】目的了解广西边境城市崇左市新报告艾滋病病毒1型（HIVP）感染者的基因亚型及治疗前耐药%PDR）情况，为评估现有一线疗法的长期效果和调整抗病毒治疗方案提供参考。方法选取2018年1~9月广西崇左市大新县、龙州县和宁明县新报告的HIV-1感染者149例为研究对象，检测分析其基因亚型和PDR情况；对影响感染者发生PDR的因素进行单因素Logistic回归分析。结果新报告HIV-1感染者的HIV基因亚型中CRF01_AE 占87.9%,CRF08_BC和CRF07_BC分别占6.0%和4.7%（基因距离分析显示CRF01_AE>CRF07_BC>CRF08_BC；149例新报告HIV-1感染者中，发生PDR10例（6.7%），其中对
非核昔类逆转录酶抑制剂％NNRTV）耐药6例，其优势*类逆转录酶抑制剂％NRTV）和蛋白酶抑制剂％PV）耐药各2例；未发现同时对2种及以上耐药位点为V106V对核
抗逆转录病毒%ARV）药物耐药的新报告HIV-1感染者。单因素Logistic回归分析结果显示，耐药与不耐药的新报告HIVP感染者的性别、年龄、所在地、民族、文化程度、职业、危险因素等比较差异均无统计学意义% !>0.05）。结论广西崇左市边境地区新报告的HIV-1感染者治疗前耐药发生情况已达到警戒线水平，加强耐药监测、及时调整优化抗病毒治疗方案，将有助防止耐药毒株的广泛传播、控制疫情。
【关键词】艾滋病病毒；治疗前耐药；亚型；耐药位点
【中图分类号】R512.91【文献标识码】A【文章编号】1673-7768（2021）02-137-6
D0V10.ki45-1347/r.2021.02.02
Analysis of pre-treatment drug resistance surveillance results among HIV-1newly
reported cas in tte borUer of Chongzuo,Grangxl in2018 YANG Yao1,LIANG Huayue1,LIU Deping2,ZHANG-2,NONG Lihua4,LIANG Bingyu,LIANG Hao1
1Public Health School of Guangxi Medical University&Guangxi Key Laboratory far AIDS Prevention and Treatment, Nanning530021,China;2Centes foe Dhea Prevention and Cofrol of Chongzuo,Chongzuo532200,Guangxt,China; 3Center foe Dia Prevention and Cootroi O Longzhoo,Longzhoo Countt532400,Chongzuo,Guangxt,China; 4Centes fos Dia Prevention and Cootroi o.f Ningming,Ningming County532500,Chongzuo,Guangxi,China &AbstracC]Objective To understand gene subtype and pre-treatment drug resistance（PDR%of newly reported patients infected with human immunodeficiency virus1（HIV-1%in the bordec og Chongzuo in Guangxi,and ta provide a reference foc evaluating the long-term effects of existing first-line drugs,and foc adjusting the antiviral treatment scheme. Methods A totai of149newly repoced HIV-1infected patients in Daxin County,Longzhou County and Ningming County of Chongzuo City from Januac te September2018were lected as the rearch objects,and their gene subtypes and PDR status were detected and analyzed.Univaaate lovistic regression analysis was perfomed on the factors affecting the occurrence of PDR among infected patients.Results Foe gene subtypes in the newly repoCed HIV-1infected patients,CRF01_AE accounted for87.9%,CRF08_BC and CRF07_BC for6.0%and4.7%,respectively.The genetic distance analysis was expresd in descending order as follows:CRF01_AE>CRF07_BC>CRF08_BC.Among the149newly repoCed HIV-1 infected patients,PDR occurred in10ces（6.7%%,of which6ces were resistant te non-nuclear reversa tra
nscCpta inhibitors（NNRTV）,and the dominant drug resistance site was V106V;meanwhile,2ces were resistant te nucleoside eeeeeeeanscerpearnhrbrees（NRTVs%and peeearnhrbrees（PVs%,eespecereeys.N@newyep@eeed HVV-1rnoeceed ▲基金项目：“十三五”国家科技专项子课题(2018ZX10101002-001-006)，国家自然科学基金地区基金项目(82060610)
炫耀英语
"通信作者：梁浩，广西医科大学公共卫生学院，电子邮箱lianghao@
patient who was resistant te two or more drugs of antiretrovirus(ARV)at the same time was obrved.The univeriate loyistic rearession analysis resultr showed that there was no statistically sivnificant dri'erencvs in gendee,age,location,nationality, education levd,occupation,and risk factoe betaeen drug-resistant and non-resistant newly reported HIV-1infected patientr (P>0.05).Conclusion The PDR among HIV-0newly reported patientr in the bordev area of Chongzuo,Guangai has already reached alarm levels.Drug resistance monitoring and timely optimization of anhvirai treataent schemes are helpful O c prevent the widespread of drug-resistant strains,and to controe the epidemic.
&Key words]HIV；Pre-Aeatment drug resistanco；Subtype；Resistanco site
"治疗即预防(Treatmeni as Prevention,Tasi)/和“暴露前用药(pre-oxposureprophylaxis,PrEP)”等策略的实施对于控制全球范围内艾滋病的流行起到了重要的作用［1"3］+然而，随着使用抗逆转录病毒(Antiretrovies,ARV)药物人群的不断增大,HI V耐药突变概率增大，部分耐药株可以在高危群体中稳定传播，耐药问题逐渐成为一个不可忽视的问题⑷+治疗前耐药(Pre-treatmeni dog resistanco,PDR)是指HIV 感染者在进行抗逆转录病毒治疗(Antiretroviral therapy,ART)前即存在耐药。PDR人群若不能通过检测及早被发现，则不能及时调整其后续ART方案，可能会严重影响其抗病毒一线疗法的长期效果［5］+因此监测PDR的发生情况对HIV-1感染者的一线ART方案选择和疗效评估具有重要的意义。
广西崇左市处于中越边境，是广西艾滋病疫情较为严重的地区之一⑷。既往已有一些研究就该地区HIV/AIDS患者的基因型耐药情况进行了分析，但关于PDR检测的相关研究却相当匮乏［7-8］。为此，本研究选取2018年1~9月广西崇左市大新县、龙州县、宁明县新报告的HIV-1感染者作为研究对象，通过相关的检测分析明确了感染者的PDR水平，以便为评估该地区现有抗病毒一线疗法的长期效果以及调整ART方案提供参考依据。
1对象与方法
1.1研究对象选取2018年1~9月广西壮族自治区崇左市大新县、宁明县、龙州县三个地区的新报告HIV-1感染者149例为研究对象。纳入标准：首次确诊HIV-1感染，未接受抗病毒治疗，未进行暴露后预防
性用药；年龄#18岁；自愿签署检测研究知情同意书。排除标准：有严重并发症的感染者；所留取的血样HIV基因序列测序结果不佳的感染者。从崇左市CDC艾滋病防治基本信息系统收集研究对象阳性报告信息和随访信息，获取感染者的基本人口学信息、危险因素、感染途径等信息。
1.2实验室检测采用ZTLJB-A64T核酸提取试剂盒(西安天隆科技有限公司)对研究对象的留存血清样本进行RNA提取，采用R055A和Premie Taq Tm 试剂(均为Takara公司)进行RT-PCR扩增，扩增长度为1300碱基对(ba pair,bp)。将扩增成功的样本送往北京诺赛基因组研究中心进行HIV基因序列测序。
1.3基因亚型及耐药分析将感染者的HIV基因序列上传至美国阿拉莫斯实验室数据库的在线质量控制工具(https：//www.hie.lane gov/content/ quence/QC/index.htmi)，判断有无异常终止密码子，下载常见亚型的参考序列+将测序所得序列与参考序列通过Aliviewv1.25进行合并与对齐，手动裁切出控制蛋白酶和逆转录酶的基因区域(裁切位点对应HXB2参考株的2253-3314bp)。在FastTree v1.4.4中采用GTR+G的氨基酸替代模型建立最大似然(ML)树进行亚型确证，使用MEGAX的distanco中Kiniura2-parameter model参数校正方法计算各亚型间的平均基因距离。采用斯坦福耐药数据库(https：//hivdb.Stanford.edu/hivdb/by-muta/ons/)中的HIVdbv9.0进行序列比对、耐药突变位点、耐药分数分析+根据该数据库的评分标准就耐药突变位点对每种ARV的耐药程度进行耐药评分，分为敏感、潜在低度耐药、低度耐药、中度耐药和高度耐药5个等级。耐药标准参考世界卫生组织发布的PDR监测指南(简称“指南”)⑼，对指南中推荐的12种ARV药物中的1种以上发生低度耐药(及以上)即判
定为耐药。
1.4统计学处理采用R4.0.4软件进行数据分析+计数资料以％表示，比较采用X2检验。对新报告HIV-1感染者发生PDR的影响因素进行单因素Logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者的亚
型与基因距离 本研究共获得有效序列149条，基因
型检测结果显示CRF01_AE 占87. 9% （131/149）,
CRF08_BC 占 6. 0% （9/149） , CRF07_BC 占 4. 7%
cretary（7/149） ,CRF55_01B 和 C 各占 0. 7% （1/149） + 3 种
主要亚型序列间的基因距离分别为:CRF01_AE 平均
基因距离为（0.0475 ±0.0033）bp ,CRF07_BC 平均基
我爱你英文因距离为（0.0454 ±0.0043）bp ,CRF08_BC 平均基因
距离为（0.0335 ±0.0033）bp 。见图 1。
2.2新报告HIV-1感染者的PDR 情况149例新报
告HIV-1感染者中，发生PDR10例（6.7%），其中对
类逆转录酶抑制剂（NNRTIs ）耐药6例，
耐药 V106I ；对 类逆转录酶抑制剂
（NRTV ）和蛋白酶抑制剂（PV ）耐药各2例；未发现
同时对2种及以上ARV 药物耐药的新报告HIV-1感
染者。在10例新报告的PDR 感染者中，对WHO 推
荐的12种监测药物中的8种发生PDR ，对阿扎那韦
（ATV ）、达芦那韦（DRV ）、洛匹那韦（LPV ）、齐多夫
bvi定（AZT ）、去轻肌昔（DDI ）低度耐药，对司他夫定
（D4T ）低度或中度耐药，对依非韦伦（EFV ）中度或高
度耐药，对奈韦拉平（NVP ）为低度或高度耐药。详见 表1、图2 +
图1广西崇左市边境地区新报告HIV-1
感染者 分 大似然进化树
表1广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者对ARV 药物的耐药情况及耐药位点（（,％）
ARV 类型耐药
purpoful
位点例数
耐药耐药
NNRTIa
21
6V106I (7,33.3) ,V179D (4,19.0) ,K103N (3,14. 3) ,E138A (2,9. 5),V179E/G190A/G190GA/E138EK/V108VI (1,4. 8)
NRTIa 22L210W (1,50.0) ,V75M (1,50.0)
PV
8
2
M46L (5,62.5) ,M46V/K4L/I54IL ( 1,12.5)
65
■高度耐药
II 中度耐药 低度耐药
2
1
■
辜一辜.
^TVDRVLPVABCAZTDATDDIFTCSTCWFEFVNVP
ARV 药物
图2广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者对ARV 药物的耐药情况分析
注:PIs 包括ATV （阿扎那韦）、DRV （达芦那韦）、LPV （洛匹那韦）；NRTIs 包括ABC （阿巴卡韦）、AZT （齐多夫定）、D4T （司他
夫定）、DDI （去轻肌昔）、FTC （恩曲他滨）、3TC （拉米夫定）、TDF （替诺福韦）；NNRTI s 包括EFV （依非韦伦）、NVP 奈韦拉平
）
2.3广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者发生PDR的单因素Logistic回归分析将是否发生PDR 作为因变量，将HIV-1感染者的性别、年龄等因素进行单因素Logmtm回归分析发现，发生与不发生PDR 感染者的性别、年龄、所在地、民族、文化程度、职业、危险因素比较差异均无统计学意义(P>0.05)o见表2。
表2广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者发生PDR的单因素Logmtm回归分析[n(%)]因素耐药5=10)不耐药5=139)OR(95%CI)P 性别
女2(4.1)47(95.9)1
男8(8.0)92(92.0) 2.043(0.417,10.009)0.378民族
壮族9(7.1)118(92.9)1
汉族1(6.2)15(93.8)0.874(0.103,7.390)0.902其他06(100.0)
年龄(岁)
<402(4.7)41(95.3)1
40~604(7.3)51(92.7) 1.608(0.280,9.220)0.594 >604(7.8)47(92.2) 1.745(0.304,10.023)0.533
所在地
大新县4(9.8)37(90.2)1
龙州县2(5.4)35(94.6)0.529(0.091，3.070)0.477宁明县4(5.6)67(94.4)0.552(0.130,2.338)0.420文化程度
文盲1(9.1)10(90.9)1注册会计师成绩什么时候出
小学4(6.7)56(93.3)0.714(0.072,7.070)0.774初中4(6.1)62(93.9)0.645(0.065，6.376)0.708中专及以上1(8.3)11(91.7)0.909(0.050，16.540)0.949职业
农民7(6.0)110(94.0)1
商业服务1(12.5)7(87.5)0.955(0.110，8.307)0.966离退人员1(12.5)7(87.5) 2.143(0.116，39.469)0.608其他1(6.2)15(93.8) 2.143(0.116，39.469)0.608危险因素
异性性
3(4.7)61(95.3)1
商业性接触5(9.3)49(90.7) 2.075(0.472，9.114)0.334阳性配偶/固定性伴2(8.7)21(91.3) 1.937(0.302，12.398)0.485其他08(100.0)
3讨论
近年来，中国和越南对艾滋病已经开始实施治疗即预防(Treatnient as Prevention,TasP)和暴露前用药(pre-exposure prophylaxis,PrEP)策略，这样能更好地控制HIV-1的流行，但同时也增加了高危人群治疗前耐药(PDR)的发生风险[10-12]+对新报告HIV-1感染者进行抗逆转录病毒(ARV)药物耐药检测、监测其PDR情况有助于及时调整感染者的后续抗逆转录病毒治疗(ART)方案，从而提高抗病毒一线疗法的长期效果，提高感染者的整体生存率[13]+
本研究检测分析了广西崇左市边境地区新报告HIV-1感染者的HIV亚型和PDR水平。结果显示，在崇左市新报告HIV-1感染者中共发现5种HIV亚型，其中CRF01_AE亚型占87.9%,CRF08_BC占6.0%,CRF07_BC占4.7%，CRF55_01B和C各占0.7%，与既往报道的结果类似[14]+HIV亚型的多态性可能会引起感染者ARV交叉耐药，导致ART失败[15]+在广西崇左市新报告的HIV-1感染者的亚型序列中，以CRF01_AE亚型的平均基因距离最大,
CRF07_BC的平均基因距离居中，CRF08_BC的平均基因距离最小，与既往文献报道的结果类似[16-20]+ CRF01_AE主要在异性性接触人群中流行，其传播范围大、速度快，人口流动和交叉传播导致该
亚型发生变异的程度较高[18]+CRF08_BC亚型最早发现于云南，主要在云南和广西的吸毒人群中流行，其从吸毒人群向一般人群扩散的过程中变异程度较低[20]+本监测分析结果显示，广西崇左市边境地区新报告的HIV-1感染者的PDR发生率为6.7%，与我国的平均水平(6.8%)接近，已达到WHO提出的耐药流行警戒水平(5%~15%)[21-23]。文献报道，不同地区的HIV-1感染人群对同类型ARV药物的优势耐药位点不同，云南省未治疗HIV-1感染人群对NNRTV的优势耐药位点为E138A/G/K/R及V179E/D/T等[24]，而四川省凉山州HIV-1感染人群的优势耐药位点为K65R及K103N等)25*，本分析结果显示广西崇左市新报告的HIV-1感染人群对NNRTV的优势耐药位点为V160V对PV的优势耐药位点为M46L O 本研究结果显示，广西崇左市边境地区新报告的HIV-1感染者对WHO推荐需监测的三类ARV药物的12种药物中的8种发生PDR，这可能与广西近些年来主要采用NNRTV联合NRTV治疗方案治疗感染人群有关，但单因素L。gmtm回归分析结果显示，耐药与不耐药的首次确认感染人群的性别、年龄、所在地、民族、文化程度、职业、危险因素等比较差异均无统计学意义，这是否与本研究的样本量较小有关尚有待进一步分析+
综上所述，广西崇左市边境地区新报告的HIV-1感染者治疗前耐药已处于警戒线水平，及时调整和优化后续抗病毒治疗方案、做好溯源工作，对防止耐药毒株的广泛传播，有效防控疫情具有重要的意义。
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