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2种口蹄疫O型抗体阻断ELISA检测试剂盒应用比较
朱爱发
（桐城市畜牧兽医管理中心，安徽桐城231400）
摘要为评估2种常用口蹄疫0型抗体检测试剂盒的性能差异，对2020年春季随机抽检的3家规模养殖场提供的60份猪血清分别用液相阻断ELISA试剂盒和抗体阻断（固相）ELISA试剂盒进行了检测，并比较了2种试剂盒的阳性检出率和符合率遥结果表明，2种方法检测结果总符合率为91.67%，符合程度高遥在基层畜牧兽医部门日常定性检测中，推荐使用抗体阻断（固相）ELISA检测试剂盒遥
christmas card关键词口蹄疫病毒；液相阻断ELISA；抗体阻断（固相）ELISA；检测试剂盒；符合率
中图分类号S855.3文献标识码A
文章编号1007-5739(2021)06-0197-02
DOI：10.3969/j.iss灶.1007-5739.2021.06.081
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Comparison of the Application of Two Kinds of Foot-and-mouth Dia O-type Antibody
2011年高考英语试题
Blocking ELISA Detection Kits
ZHU Aifa
(Tongcheng Animal Husbandry and Veterinary Management Center,Tongcheng Anhui231400) Abstract In order to evaluate the performance differences of two commonly ud foot-and-mouth dia O-type antibody detection kits,60pig rums provided by three large-scale farms randomly lected in the spring of2020were detected with liquid-pha blocking ELISA kits and antibody blocking(solid pha)ELISA kits,and the positive detection rate and coincidence rate of the two kits were compared.The results showed that the total coincidence rate of the two methods was91.67%,which was a high degree of coincidence.In the daily qualitative testing of the grassroots animal husbandry and veterinary departments,it is recommended to u an antibody blocking ELISA detection kit.
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Keywords foot-and-mouth dia virus;liquid-pha blocking ELISA;antibody blocking(solid pha)ELISA;detection kit;coincidence rate
distinctions
honeybunch
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的可导致猪、牛、羊等偶蹄动物感染的一种急性、热性、高度接触性传染病叫口蹄疫病毒属小RNA病毒科口蹄疫病毒属，主要有A型、0型、C型、南非I型、南非域型、南非芋型和亚洲I型等7个血清型，其中0型、A型分布较广泛，危害最大。口蹄疫传播速度快、发病率高，被世界动物卫生组织和联合国粮农组织列为A类烈性传染病之首，我国将其列为一类传染病。
我国目前主要通过疫苗免疫接种对口蹄疫进行预防控制，疫苗免疫效果评估需要运用科学有效的检测手段叫实验室常采用血清学试验进行口蹄疫病毒抗体的检测，血清学试验一般包括病毒中和试验、液相阻断、固相竞争酶联免疫吸附试验和非结构蛋白抗体试验。口蹄疫病毒结构蛋白抗体检测方法主要有病毒中和试验（VN）、液相阻断酶联免疫吸附试验（LPB-
作者简介朱爱发（1964—），男，安徽桐城人，高级兽医师。
研究方向：畜牧兽医技术推广、动物卫生检疫与
防疫、动物疫病诊断与检测等。
收稿日期2020-10-10ELISA）等；用于检测口蹄疫病毒非结构蛋白抗体诊断的方法有非结构蛋白（NSP）3ABC抗体间接酶联免疫吸附试验（3ABC-I-ELISA）和非结构蛋白（N S P）3ABC 抗体阻断酶联免疫吸附试验（3ABC-B-ELISA）%非结构蛋白（NSP）3ABC检测试剂盒常用于判断动物是否
被野毒感染；口蹄疫VP1结构蛋白试剂盒常用于检测 合成肽苗免疫的动物；常规的注射灭活病毒疫苗产生的免疫抗体常用正向间接血凝试验、金标试纸条、液相阻断ELISA、抗体阻断ELISA等方法进行检测。
基层兽医实验室评判口蹄疫免疫抗体的有无主要使用的是酶联免疫吸附试验。液相阻断酶联免疫吸附试验是目前我国认可的一种标准诊断技术，具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点，但操作步骤繁琐，试验所需时间长，稍有不慎就会造成试验误差。为此，本文在口蹄疫抗体定性分析试验中将液相阻断ELISA和抗体阻断（固相）ELISA2种试剂盒进行对比，比较分析2种试剂盒的优点和缺点，以期寻找一种更适合基层畜牧兽医部门的操作简便的检测方法。
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1材料与方法
1.1试验材料
供试样品为2020年春季随机抽检的3家规模养殖场提供的合格猪血清60份。
主要试剂有：口蹄疫0型抗体LB-ELISA（液相阻断）检测试剂盒（E200705-1，洛阳莱普生信息科技有限公司），口蹄疫0型抗体阻断（固相）ELISA检测试剂盒（E191208-1，洛阳莱普生信息科技有限公司）o 器材有酶标仪、洗板机、恒温温箱、移液器及配套 设施、稀释板。
1.2检测方法
1.2.1液相阻断ELISA试验。①流程。在血清稀释板上A1~A10孔各加175滋L样品稀释液，除C12~H12外，余下各孔加入100滋L样品稀释液。A1~A10各加待检样品25滋L，以100滋L/孔倍比稀释至H;A…加入100滋L阳性对照倍比稀释至H;A12加入阴性对照倍比稀释至Bu。将上述稀释好的样品及阴阳对照依次转移到包被板对应孔,50滋L/孔;E12~H124孔分别加入已稀释好的抗原液100滋L,C12、D12不加，余下各孔加入抗原液50滋L/孔，振荡混匀，贴膜,37益温育30min。洗板5次，拍干；加入抗体溶液50滋L/孔，继续加酶结合物50滋L/孔，振荡混匀，贴膜,37益温育30min。洗板5次，拍干；加显色液100滋L/孔,37益避光温育15min。加终止液50滋L/孔，测量OD450。②试验成立条件。病毒抗原对照OD4
5。逸1.0；阳性对照抗体效价在1：1024±1以内；阴性对照抗体效价＜1：8。③结果判定。病毒抗原对照4孔，弃去最高OD值和最低OD值，计算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即为临界值。待检样品OD 值〉临界值的为阴性，反之为阳性。每份样品稀释最高梯度为阳性的孔即为该样品的抗体效价。猪抗体效价逸1：64,99%以上保护，判为免疫合格叫即为阳性，否则为阴性。
1.2.2抗体阻断（固相）ELISA试验。①流程。在包被板A1、B1、C1、D1上各加50滋L未稀释的阴性对照和阳性对照，每次各加2孔；在其余相应孔内加入50滋L稀释样品（1：20）；每孔加入50滋L酶结合物，振荡,37益温育30min；洗板5次，拍干；每孔加50滋L显色液A和50滋L显色液B,37益温育15min；加终止液50滋L/孔，测量OD450。②结果判定。按试剂盒说明书判定阴阳性。2结果与分析
液相阻断ELISA抗体检测试剂盒检测60份猪血清样品O型口蹄疫抗体阳性率为66.7%；抗体阻断（固相）ELISA抗体检测试剂盒检测O型口蹄疫抗体阳性率为65%o造成口蹄疫抗体阳性率较低的情况主要有以下几种可能：免疫次数不够；免疫时间未达到产生抗体所需的天数；免疫剂量不够；免疫注射不规范；自身有免疫抑制性疾病的存在；免疫前后饲喂不当；疫苗运输或存放环境不达标等。
液相阻断ELISA检测试剂盒阳性检出率高于抗体阻断（固相）ELISA检测试剂盒，这说明液相阻断ELISA的敏感性高。2个试剂盒检测猪O型口蹄疫免疫抗体阳性符合率为88.1%，阴性符合率为78.26%，总符合率为91.67%，具有较高的符合率。
3结论与讨论
colt本次试验发现液相阻断ELISA检测试剂盒和抗体阻断（固相）ELISA检测试剂盒的阳性符合率达到了88.1%，总符合率为91.67%，符合程度高。这2种口蹄疫O型抗体检测试剂盒各有利弊。其中，液相阻断ELISA 检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点[5]，能测定血清样品的具体抗体效价，在大批量血清检测领域中有较高的适用性。但其也有缺点：操作步骤繁琐（尤其是经典模式）；在梯度稀释过程中经常会出现跳孔现象；正常临界值应在阳性对照列的E孔与G孔之间，操作稍有不当，就会导致整个试验不成立，因而对操作人员的技术水平要求甚高。在基层畜牧兽医部门实际工作中，只需了解动物体内口蹄疫抗体是否在保护范围内即可，检测具体的抗体效价意义不大；而且1块ELISA板只能检测10~20份样品，成本高，误差大。在定性分析中，可用抗体阻断（固相）ELISA 代替液相阻断ELISA对血清样品进行抗体测定。抗体阻断（固相）ELISA试剂盒1块板能检测92份血清样品，在口蹄疫抗体定性分析中，具有操作简便、耗时短、经济实惠等优点[6]。虽然其无法检测出具体的抗体效价，但却非常适用于基层畜牧兽医部门。
4参考文献
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中国畜禽种业,2020（4）:55.
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农业开发与装备,2020（4）:236-237.
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18935—2018[S].北京冲国标准出版社,2018.
nerve
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的应用[J].浙江畜牧兽医,2015（1）:3-5.
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法[J].中国畜禽种业,2019（12）:28-29.
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