陕西农业科学2020,66（12）:1-3Shaanxi Journal of Agricultural Sciences -试验研究-
内源乳化凝胶法制备嗜酸乳酸杆菌微胶囊肉鸡饲喂效果研究
李龙，李文凤
（杨凌职业技术学院动物工程分院，陕西杨凌712100）
摘要：试验旨在研究利用内源乳化法制备微胶囊化益生菌嗜酸乳杆菌对肉鸡生产性能、免疫机能和盲肠微生物组成的影响。选取1d龄雄性AA肉仔鸡480只，随机分为4处理（每个处理6个重复，每个重复20只）：对照组饲喂不含抗生素的基础日粮，益生菌组、空壳组和微胶囊组分别在基础日粮中添加未包被的益生菌、微胶囊空
壳和微胶囊益生菌，试验期为42d。结果表明相比于对照组:①饲粮添加微胶囊化益生菌显著提高了肉鸡平均
d增重。②益生菌组和微胶囊组显著提高了21d肉鸡法氏囊指数、血清IgG和IgM水平，同时微胶囊组肉鸡血
清IgG水平显著高于益生菌组。益生菌组和微胶囊组显著提高了肉鸡42d法氏囊指数、血清IgM水平，
同时微胶囊显著提高了肉鸡脾脏指数和血清IgG水平。③益生菌组显著提高肉鸡21d盲肠乳酸杆菌数量，微胶囊组显著提高21d和42d盲肠乳酸杆菌数量和42d双歧杆菌数量，同时显著降低21d和42d沙门氏菌数量、42d
大肠杆菌数量。由此可见，内源乳化凝胶法制备的嗜酸乳酸杆菌微胶囊在肉鸡上有良好的使用效果。
关键词：肉鸡；微胶囊；免疫；肠道微生物
益生菌作为一种微生态制剂已广泛应用于动物生产中［1］。益生菌在宿主体内存活率的高低直接影响到使用效果，但很多益生菌菌株在宿主胃肠道中存活率很低［2］（微胶囊技术能够在益生菌表面形成一个抵抗不利因素的表面屏障，从而能够有效的将益生菌传递至特定位置［3］（受限于产量低和包埋颗粒过大等缺陷，目前微胶囊益生菌还不能广泛的进行工业化生产⑷。
内源乳化法是利用凝胶（如海藻酸、果胶和卡拉胶等）将活的细胞进行包埋，其基础是连续相（细胞聚合物悬浮）与分散相（油）之间的关系。这种方法包被的益生菌在不利环境下存活率高，包埋颗粒大小适中，易于大规模工业化生产［5］。唾液乳杆菌是乳酸杆菌属中的一类，在人类和动物生产中都被作为益生菌来使用（李龙（2015））6*研究发现给饲喂唾液乳酸杆菌LTC-55能够存进肉鸡消化酶分泌和肠道发育，并提高生产性能。本研究拟利用内源乳化法制备唾液乳酸杆菌LTC-55微胶囊，并进行饲养试验研究其对肉鸡生产性能、免疫机能和盲肠微生物组成的影响。
1材料与方法
1-1微胶囊制备
所用益生菌菌株唾液乳酸杆菌LTC-55为本实验室从藏鸡胃肠道中分离所得［6］。微胶囊制备参照Guan等（2011）［7］推荐的方法操作，并略作修改，将100mL1-8%（W/V）海藻酸钠#5 mL植物乳杆菌JM113悬菌液（1f108CFU-mL_1"和0.45g碳酸钙混匀后，用灭菌水补足300mL，合中（0-2% Span80），在磁力搅拌器上以400rpm的速度乳化5min，加入900$L冰醋酸继续乳化10min，再加入100mL灭菌水使制备好的微珠进入水相层，吸取水相层离心清洗三次后，冷冻干燥收集微胶囊包被的益生菌。以未进行微胶囊化的益生菌为对照，使用同样的方法进行冷冻干燥。利用平板计数检测活菌数为7.2X108CFU-g-1微胶囊。
1.2饲养试验
1.2.1试验设计480只1日龄雄性AA肉仔鸡被随机分为至4个处理，每个处理6个重复，每个重复20只鸡，进行为期42d的饲养试验。对照组饲喂不含抗生素的基础日粮（对照组），益生菌组、空壳组和微胶囊组分别在基础日粮中添加未包被的益生菌干粉（活菌数未1X108CFU-kg'1饲）、0.14g未菌的微胶囊空壳微胶囊益生菌（活菌数未1X108CFU-kg-1饲料）o 整个试验期肉鸡自由采食和饮水，按照AA肉鸡常规免疫程序进行免疫。
1.2.2指标检测主要有：
（1）生产性能。分别在第21天和第42天时称取每个重复鸡只的体重，并统计上述阶段中该重复鸡只的耗料量和增重，计算21d和42d每个
收稿日期:2020-04-02修回日期：2020-04-25
基金项目：国家自然科学基金项目（31560651），杨凌职业技术学院自然科学研究基金项目（A2019066）
第一作者简介：李龙（1981-），男，陕西杨凌人，副教授，主要从事畜禽新型饲料添加剂的开发与利用。
-1-
陕西农业科学2020年第66卷第12期
重复肉鸡的平均日增重(ADG )、平均日采食量 (ADFI )和饲料转化率！FCR )(
(2) 免疫器官指数。分别在第21天和第42 天每个重复随机抽取2只鸡，称重后翅静脉采血,
分离血清-20T 保存备用。断颈处死后，立即分 离脾脏和法氏囊，称重后计算免疫器官指数(免 疫器官重f1 000/鸡只体重)(
(3) 免疫球蛋白水平。血清免疫球蛋白水平 (IgA , IgG 和IgM )采用ELISA 检测试剂盒测定 (南京建成)，所有操作均严格按照试剂盒说明书
规定程序进行。
(4) 盲肠微生物。断颈处死鸡只取盲肠，无菌 收集盲肠内容物，置于冰上带回实验室。称取1)
盲肠内容物用无菌生理盐水(0.85% NaCl )进行
10倍梯度稀释，分别取稀释液100$L 涂布于乳酸
表1
微胶囊益生菌对肉鸡生产性能的影响
杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌选择性固体 培养基上,37g 培养24 h 后进行菌落计数，结果 以log10 CFU - g-1肠道内容物表示。1.3数据统计
试验数据利用SPSS17.0软件的单因素方差
分析(one - way ANOVA )进行方差分析，LSD 法
进行多重比较。结果以"平均值土标准差"表示，
以7 <0.05认定结果为差异显著。
2结果
niorhigh
2.1微胶囊益生菌对肉鸡生产性能的影响
结果见表1，由表1可知在21 d 和42 d 时相
比与对照组，微胶囊组显著提高肉鸡ADG ( 7< 0.05)。而所有处理组在整个试验期ADFI 和
maggie smithFCR 上并无显著差异(7>0.05 )。
处理
对照组
益生菌组
空壳组
微胶囊组
21d
ADG ,g 26.3 ±5.2b 27.7 ±4. 9訪26.8 ±6. 1b 29.1 ±4.0a ADFI ,g 40.6 ±7.741.2 ±6.439.9 ±8.041.9 ±5.5FCR 1.5 ±0.21 1.49 ±0.25 1.49 ±0.33 1.44 ±0.2742d ADG ,g 70.8 ±9. 3b 72.9 ±6. 6訪70.6 ±10.8b 74.4 ±7.9a
ADFI ,g 133.8 ±23.1135.9 ±19.8131.7 ±22.6137.1 ±14.8FCR
1.89 ±0.22
1.86 ±0.19
1.87 ±0.30
1.84 ±0.24
注：同行无字母或数据肩标相同字母表示差异不显著！7 >0.05)，不同小写字母表示差异显著(7 <0.05)，下同
2.2微胶囊益生菌对肉鸡免疫器官指数和血清 免疫球蛋白水平的影响
结果见表3 ，由表3可知在21d 时相比于对 照组，益生菌组和微胶囊组显著提高了肉鸡法氏
囊指数、血清IgG 和IgM 水平!7 <0. 05)，同时微
表2 微胶囊益生菌对肉鸡免疫器官指数和血清免疫球蛋白水平的影响
胶囊组肉鸡血清IgG 水平显著高于益生菌组(7
<0.05)。在42 d 时相比于对照组，益生菌组和 微胶囊组显著提高了肉鸡法氏囊指数、血清IgM
水平! 7 <0.05 "，同时微胶囊组显著提高了肉鸡 脾脏指数和血清IgG 水平! 7<0.05)O
处理
对照组益生菌组空壳组
微胶囊组
21d
脾脏指数
0.93 ±0.150.91 ±0.100.95 ±0.130.92 ±0.18法氏囊指数
2.21 ±0.32b 2.41 ±0.41a
2.29 ±0.28b 2.44 ±0.23a
IgA , mg + mL_i 288.4 ±32.8293.4 ±41.8283.7 ±37.2291.9 ±26.6IgG , mg + mL_i 507.1 ±23.5c 566.8 ±38.1b 511.2 ±49.4c 594.8 ±31.3a IgM , mg + mL_i
17.2 ±3.5b
20.8 ±4.7a 16.8 ±2.6b
20.6 ±4.4aspike
42d
脾脏指数
bee是什么意思1.09 ±0.32b 1.14 ±0.17b 1.03 ±0.21b 1.21 ±0.33a 法氏囊指数
0.61 ±0.08b 0.71 ±0.10a
0.60 ±0.13b 0.73 ±0.14a IgA , mg + mL - 1 5.7 ±0.8 5.5 ±0.6 5.4 ±0.7 5.8 ±1.0IgG , mg + mL - 1360.2 ±25.3b 362.4 ±33.3b 367.1 ±54.8b 411.1 ±29.2a IgM , mg + mL 1
8.9 ±1.0b
9.8 ±0.2a
8.8 ±0.9b
10.1 ±1.1a
2.3微胶囊益生菌对肉鸡盲肠微生物组成的 影响
结果见表3，由表3可知在21 d 时相比于对
菌 微胶囊 显 高肉鸡 乳酸
杆菌 量( 7 <0.05) ， 微胶囊 显肉鸡盲肠沙门氏菌数量(7 < 0. 05 )o 在42 d 时
-2 -
李龙，等：内源乳化凝胶法制备嗜酸乳酸杆菌微胶囊肉鸡饲喂效果研究
相比于对照组，微胶囊组显著提高肉鸡盲肠乳酸数量!7<0.05）（
杆菌和双歧杆菌数量，降低大肠杆菌和沙门氏菌superdisk
表3微胶囊益生菌对肉鸡盲肠微生物组成的影响
项目
处理
对照组益生菌组空壳组微胶囊组
21d
乳酸杆菌7.63±1.21b8.38±0.89a7.71±0.63b8.44±0.82a 杆菌 6.26±0.66 6.90±0.89 6.88±0.55 6.71±0.81肠杆菌 5.01±1.01 4.83±0.94 5.31±0.85 4.81±0.73沙门氏菌 6.45±1.21b 6.84±0.71b 6.43±0.99b 5.51±0.79a 42d
乳酸杆菌8.31±1.21b8.67±1.33b8.09±1.61b9.10±1.10a 杆菌 6.43±0.89a 6.71±1.01a 6.60±1.11b7.52±1.09a 肠杆菌 5.42±0.55a 5.31±0.61a 5.46±0.78a 4.91±0.66b 氏菌8.03±1.53a7.89±1.03a8.09±1.48a7.03±0.86b
在线中文翻译成英文
3讨论
为了验证内源乳化凝胶法制备嗜酸乳酸杆菌微胶囊的活体使用效果，本试验研究了其对肉鸡生产性能、免疫器官指数、免疫球蛋白水平和盲肠微生物的影响。结果发现微胶囊化的唾液乳杆菌能够显著提高肉鸡生产性能。李龙等（2019）［8］研究发现用冷冻干燥法制备的微降囊化植物乳酸杆菌能够提高肉鸡生产性能,Zhang等（2015）［9］同样发现用内源乳化法包埋的布拉酵母菌能够显著提高肉鸡生产性能。但不同的微胶囊制备方法不同，包埋率、包埋颗粒大小等因素都会影响到微胶囊的使用效果，因此可能出现同样的菌株利用不同的包埋方法产生不同的使用效果（
官指球蛋白平肉鸡免疫水平的一个重要指标［10］（本研究发现胶囊化和未胶囊化的益生菌均能提高肉鸡的免疫器官指数和免疫球蛋白水平，但胶囊化益生菌效果更佳。这也就说明微胶囊化益生菌能够进一步提高益生菌的免疫增强作用。
外源微生物在进入动物肠道后在酸性和多种酶的环境作用下可能失活［2］。笔者试验结果显示微胶囊益生菌能够提高21d和42d肉盲肠中有益菌数量，而微胶囊化益生菌仅在21d时能够提高盲肠乳酸杆
菌数量。这可能是有在肉鸡饲养前期肉鸡消化功能还不完善，益生菌更容易附着在肠道，而在生长后期随着消化机能完善造成益生菌很难在肠道增殖和存活，而在这个期间微胶囊化益生菌的保护作用就更佳明显，从而造成微胶囊化益生菌在42d时在改善肠道微生态上仍然有良好的使用效果。
参考文献：
［1］Zhang ZF,Kim IH.Effects of probiotic supplementa
tion in diJerent energy and nutrieni density diets on
performance,egg quality,excreta microfloro,excreta
noxious gas emission,and rum cholesterol concentra
body lotiontions in laying hens.Journai of animat sciencc.2013,
91(10):4781C787
[2]Wang Y,Dong Z,Song D,et at.Effects of microen
capsulated probiotics and prebiotics on growtU perform
ance,antioxidative abilities,immune functions,and
caecai microforo in broileo chickens[J].Food andas one
Agriculturai Immunology,2018,29(01)：859-869. [3]Gerez CL,Foni de Valdez G,Gieante ML,ei al.
Whey protein coating bead iniproves the survival of the
probiotic Lactobacillus rhamnosus CRL1505to low
pH.[011x0of Applied Microbiology.2012；54(06):
552-556B
[4]吴小孃，胡乐琴.复合法制备嗜酸乳杆菌-双歧杆菌
益生菌微胶囊饲料工艺及体外消化特性研究[J].
动物营养学报，2020,32(01):372-381.
[5]张国芳，王婷婷，刘丽波，等.内源乳化法制备干
酪乳杆菌微胶囊[J].中国乳品工业，2017,45
(03):15-20B
[6]李龙•藏鸡源乳酸菌和红景天对肉鸡生产性能、腹
水敏感性和肠道功能的影响[D].杨凌：西北农林
科技大学，2015.
[7]Guan H,Chi D,Yu J,et aL Encapsulated ecdysone
trolling its relea and photostability,J-.Chemicai en
gineering journai,2011,168(01)：94-101.
[8]李龙，仇薪鑫，刘锁珠.微胶囊化益生菌对肉鸡生
产性能、抗氧化性能和免疫机能的影响[J]•饲料研
究,2019,42(06):52-54.
[9]Zhang L,Li J,Yun TT,et s I.Evaluation of pilot-
scs I o microencapsulation of probiotics and product
effect on broilers.Journai of Animai Sciencc.2015,93
(10):4796-4807.
[10]林红，沃野千里，甘山义，等.低聚壳聚糖季！盐
董事长英文翻译
的体外抑菌作用及其对肉鸡生产性能、免疫和抗
氧化功能的影响[J].畜牧与兽医，2019,51(09):
情人节快乐英语怎么说
47-53.
・3・
