QIAGEN EndoFree Plasmid Maxi Kit
Catalog numbers 12362 室温下15-25度存放2年。
在开始之前作如下准备
lonely是什么意思布鲁塞尔自由大学1)按照说明把RNa A加到Buffer P1 中,混匀,放到2-8度储存。选作:按照1:1000的比例把LyBlue 加到Buffer P1
2)pre-chill Buffer P3 4°C存放。
3)检查Buffer P2 是否有SDS沉淀物,可以放到37℃短暂温热以便溶解分子沉淀物。
不成材4)准备异丙醇。
5)用试剂盒提供的无内毒素的水中加入40ml的96-100%的酒精。
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在LB培养基中种植转化的E.coli菌。使用100ml(高复制数的质粒)或者250ml(低复制数的质粒)
过夜培养。
操作步骤如下
细节英文1.收获LB培养过夜的细菌,在6000g,4℃条件下离心15min。
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2.加入10ml Buffer P1(根据SBI要求加倍,用20ml)重悬细菌。
3. 加10ml Buffer P2(根据SBI要求加倍,用20ml),剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀,室 高考理综2020
温放置5min。如果使用了LyBlue试剂,溶液应该变成均匀蓝色。
4.在孵育期间,打开针口的密封盖.并把过滤器放到合适的架子上。
美容职业培训>怎么学好日常英语口语5.加入10ml冰浴的Buffer P3(根据SBI要求加倍,用20ml)到此溶菌产物中,剧烈晃动离心管4-6次使其混匀。如果加入了LyBlue试剂,混匀试剂直到没有颜色。
6.将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中,室温放置10min,不要插入活塞。打开针口的密封盖,轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中,充分混匀10次后冰上孵育30min。
8.将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上,加入10ml Buffer QBT,让管中溶液通过重力滴下排空。
9.将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
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10用2×30ml Buffer QC洗QIAGEN-tip柱。
11再用15ml Buffer QN洗脱DNA,用离心管收集DNA洗脱液。
12加入10.5ml异丙醇到洗脱液中使DNA沉淀下来,混匀。大于15000×g,4℃离心30min,离心后小心倒出上清液。
13 洗DNA用5ml无内毒素-70%乙醇(添加40ml 96%-100%乙醇到试剂盒的无内毒素水中),15000g, 4℃离心10min。小心倒出上清液不要碰到质粒。
14烘干离心管底部的质粒5-10min。用合适体积的无内毒素的Buffer TE重新溶解DNA。
15检测DNA质粒的浓度并记录。
