【51】Antimicrobial Effectiveness Testing
抑菌劑效力檢查法
1. 抑菌劑效力檢查：
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①用於測定無菌、非無菌製劑中抑菌劑的活性，用以評價最終產品的抑菌效力；
torrey devitto②用於指導製造廠在製劑研發階段抑菌劑的選用確定。
2. 如果藥物本身不具有充分的抗菌活性，則應根據製劑特性（如：水溶液製劑）添加適
宜的抑菌劑，以防止製劑在正常貯藏和使用過程中可能發生的微生物污染和繁殖，尤其是多劑量包裝的製劑，避免因藥物微生物污染及變質而對患者造成傷害。
3. 在藥品生產過程中，抑菌劑不能用於替代藥品生產的GMP 管理，不能作為非滅菌製劑
降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝製劑滅菌前的生物負載的手段。
4. 所有抑菌劑都具有一定的毒性，製劑中抑菌劑的量應為最低有效量。
同時，為保證用藥安全，最終包裝容器中的抑菌劑有效濃度應低於對人體有害的濃度。
5. 要求具有抗菌活性的製劑，不管是添加的抑菌劑，還是藥物本身具有抗菌活性，在藥物
研發階段，均應確認其抗菌效力。
单据6. 抑菌劑的抗菌效力在貯存過程中有可能因藥物的成分或包裝容器等因素影響而提高或
降低。因此，應驗證最終容器中的抑菌劑效力在效期內不因貯藏條件而降低。
7. 本試驗方法和抑菌劑抑菌效力判斷標準用於包裝未啟開的成品製劑。
叫鸡8. 需要進行本試驗的藥品分為四類（表1）。
表1 Compendial Product Categories
9.1 菌株活化後使用，繼代培養以不超過5代為原則。（冷凍乾燥菌種為第0代）
9.2 以液體培養基培養的菌種：
保存前，先將菌種活化培養18~24H →離心（一般使用4000rpm）
→用1/20 體積的無菌TSB，將沉降的細胞懸浮分散於其中
→加入等體積的sterile glycerol （20% v/v in water），混勻後冷凍保存。
10. All media ud in the test must be tested for growth promotion.
growth promotion test：
⇩取Escherichia coli ATCC No.8739、Pudomonas aeruginosa ATCC No.9027、Staphylococcus aureus ATCC No.6538各50～100cfu，分別注入sterile Petri dish中，立即傾注TSA培養基(每株試驗菌做2重覆) ，混勻，待凝固，放置於30～35℃，培養48 小時，計數菌落數；
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⇩取Candida albicans ATCC No.10231、Aspergillus niger ATCC No.16404各50～100cfu，分別注入sterile Petri dish中，立即傾注SDA培養基(每株試驗菌做2重覆)，混勻，待凝固，放置於20～25℃培養72 小時，計數菌落數。
→同時，進行對照組試驗用。
⇩結果判定
被檢培養基的菌落數與對照組培養基菌落數相比大於70%，且菌落形態大小應與對照組培養基上的菌落一致。
則判定該培養基的growth promotion test符合規定。
11. 測試用菌株及其製備相關條件（Culture conditions for Inoculum Preparation）
* TSA / TSB：Soybean-Cain Digest Agar / Soybean-Cain Digest Broth ；
* SDA / SDB：Sabouraud Dextro Agar / Soabouraud Dextro Broth 。
12. Preparation of Inoculum 菌液製備
⇩各菌株，依11項之列表中所需條件培養
⇩培養後的菌液（除了Aspergillus niger ATCC No.16404 外），
→若為Agar 培養物，以適量的sterile saline TS，將agar表面的培養物洗下；
然後，用適宜方法吸出菌懸浮液(suspension inoculum)至無菌試管或適當的容器中。
加入適量的sterile saline TS，使菌液約為1*108 cfu/ml。
dacia→若為Broth 培養物，以離心方式取得菌液，
白朗听力然後，用適宜方法吸出菌懸浮液(suspension inoculum)至無菌試管或適當的容器中。
加入適量的sterile saline TS，使菌液約為1*108 cfu/ml。
⇩Aspergillus niger ATCC No.16404培養後的菌液，u sterile saline TS（containing 0.05% of polysorbate 80）, 將孢子洗脫，收集沖洗液置於適當的容器中，再加以適量sterile saline TS，使菌液約為1*108 cfu/ml。
⇨製備後的菌懸浮液，應在2 小時內使用；若保存在2～8℃，可以在24 小時內使用。
Aspergillus niger ATCC No.16404可製成穩定的孢子懸浮液保存在2～8℃，可在一周內使用。伤感网名2013最新版
13. Procedure
→如果~~~供試品的包裝容器的容量足夠試驗用，同時容器可方便依照無菌操作程序接入試驗用菌液
、混合及取樣等…，一般應將試驗菌直接接種於供試品原包裝容器
中進行貯存。
→若因樣品的性狀或每個容器裝量等因素，不適於實驗操作，需將樣品轉移至其他無菌容器時，該容器的材質不得影響樣品的特性（如：吸附作用），特別應注意不得
影響樣品的pH，pH 對抑菌劑的活性影響很大；同時，容器的口徑大小應便於樣品
於實驗過程中的操作及混勻。
⇩取包裝完整的樣品至少5 份，直接接種試驗菌懸浮液，或取適量樣品分別轉移至5個適宜的無菌容器中（若試驗菌株數超過5 株，應增加相應的樣品份數）；
每一容器接種一個試驗菌；The volume of the suspension inoculum ud is between
0.5% and 1.0% of the volume of the product。
机械专业英语⇩Categories 1,2 and 3 類樣品，接種菌量為105～106 cfu / ml；
Category 4 類樣品，接種菌量為103～104 cfu / ml。
⇩將接種後的樣品充份混合，使供試品中的試驗菌均勻分佈，置放在22.5±2.5℃。
→ The conditions of media and microbial recovery incubation times listed in 11 項表中。
→ Using the calculated concentrations of cfu per ml prent at the start of the test, calculate the change in log10 values of the concentration of cfu/ml for each microorganism at the applicable test intervals, and express the changes in terms of log reductions.
存活菌數測定：根據產品類型，在樣品剛接種時(initial) 及規定的間隔時間，
分別從每個容器中取樣品1ml，用pH7.0 sterile saline solution-peptone
buffer solution 稀釋成1：10、1：100、1：1000等稀釋倍數。
採用plate或membrane filtrate法，測定每份樣品中所含的菌數。
根據菌數測定結果，計算1ml樣品中，各試驗菌所加的菌數及各間隔
時間的菌數，並換算成log值。
14. Criteria for antimicrobial effectiveness
→ No increa in defined as N.M.T. 0.5 log10 unit higher than the previous value measured.
→結果判斷
抑菌劑效力根據各間隔時間的菌數log值相對於初始值(initial時菌數log值)減少程度進行評估（見下表）。結果符合下表要求，即判斷該產品抑菌效力符合規定。
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