GPC的使用技巧
1 净化柱只有5ml容量
2 自检―→lftest二次，要选择样品盘，整个自检过程大概1min；高位激光和低位激光自检合格以后，主机会各响三次，这时要在PC与system上分别加以保存
大小分子分离开，大的先出来，小的后出来
3 自动进样器
二联机（16ml的样品瓶）
三联机（60ml的样品瓶），含预浓缩步骤
一个样品瓶（可以单浓缩，也可以运行三联机）+一个收集瓶
4 停电可自动转为面板操作
5 聚苯乙烯柱400×25mm×32cm，50g
6 上―→真空泵，缓冲瓶；下―→液相泵
7 日常操作注意：针摆动时不要碰，否则停止运行，针尖是弯的，关机重开针会自动复位。
8 开、关机间隔至少1min。
样品要求
1 上柱溶剂必须是环己烷、乙酸乙酯
2 100%二氯甲烷
3 样品要脱水，不能有可见颗粒物
4 去掉脂肪、色素、蛋白
5 油脂最大承受量1克
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1 填料泡12小时才能用，不能干
2 长时间不用，液相泵的压力会上不来，purge(低压报警，排气口排气)应处于stop状态
3 高压报警（进样口被堵），可将柱子倒过来装，或可更换柱子过滤膜
鱼肉有20～30%的脂肪量，应大概算一下脂肪量
1 System rinsing program 系统清洗，一般100个样品可能会有残留
2 Standard evaporation 大体积溶剂浓缩定量到5ml后，上GPC柱净化。
3 SPE的浓缩，浓缩以后进SPE；GPC定容到5ml；但是SPE的上样量不定，约4ml左右，是不准确定容的。
4 溶剂转换，是一种不蒸干的溶剂转换（二氯甲烷中可以直接加入正己烷），要将需要转换的有机溶剂放在紫色的瓶中。
5 /
6 原溶剂蒸干，加入新的溶剂至5ml
7 标准内标法，是定容到2ml的过程
整个浓缩过程：
Send sample ----→从现有溶液量浓缩到5ml ----→清洗----→至2ml；即二次浓缩，二次清洗， 2ml洗二次。 清洗体积+第二次浓缩的剩余体积≤定容体积
浓缩过程：
样品抽到样品瓶----→第一次浓缩Vac1----→Rin 1（洗挂壁）----→抽真空----→Vac2----→Rin 2----→定容----→抽出来
1 油浴温度控制在30～50℃
Nominal vacuum 手动真空度
2 温度一致，真空度差10～20（大）
3 样品转移到浓缩腔
① 取样的真空度，浓缩腔的真空度
② 间隔时间， 是警戒灯，约100ml，当需2～3次才抽完的间隔
③ 样品瓶清洗次数，用什么颜色清洗 环己烷、乙酸乙酯3ml
溶剂转换：只有选模块4才能起作用
真空度： 二氯甲烷是380～400；正己烷是180
z z加入何种溶剂（一般紫色溶剂瓶），一般2～3ml，通常加2～3次
高位溶剂的清洗，2次，每次2ml
低位溶剂的清洗：
1 1700μL chinked out
2 1200μL
不能超过定容体积
用什么溶剂清洗，定容以后需要转移的体积（Filled volume of conce.）
系统清洗：
避免样品间的干扰；预清洗----→丙酮
Sample 方法0是stop
二联机
进状态----→自检----→方法----→序列----→start
方法参数：1～97 个二联机的方法，保存
方法名称：清洗柱子的程序
↓
2002世界杯主题曲清洗程序是
↓
GPC（净化+浓缩）+标准内标法定容到2ml
口译官网5 净化+蒸干+定容到5ml
6 /
林超伦 实战口译7 蒸干+净化+浓缩
Column preclean timer（上样前需要预清洗GPC柱子的时间），时间范围 10～30 c。
样品瓶中抽出≥6400μL
GPC Forerun 大分子出来除去的时间
GPC Main fraction
圣诞英文
三联机
单浓缩和二联机串联在一起，都有方法，序号要一致，而且要在20～40号方法编号之间；开展三联机工作要先进行“联机”，分别在PC和System保存后，关闭“联机”界面，然后，激活“单浓缩”界面，注意“Name”的更改与“联机”状态要完全一致。
样品转移真空度（从瓶子转移到浓缩腔所需抽的真空度）不变
Rinsing cycles of sample bottle(洗样品瓶瓶底的次数)，2次
Rinsing volume for sample vial (每次洗样品瓶的体积)，3000ul
剩余200 ul用定容针滴加，使得定容准确，把液面加到使之与激光位相切
Rinsing of chamber ，清洗浓缩腔和管线，以利于做下一个样品。
方法0可以防止空运行。
V1、Vplus、Vk （由外向里排列）三个阀模块，每一个模块有三根线，可以拔出来做初始化，放置5～10min，最好在主机开的时候拔下来。
oyster检测V1和Vplus 是否正常切换：
不开工作站，主界面----→按 i ----→±／－----→rvice window----→按↓----→切换V1阀----→按3；1～6,5～4,3～2相通。
按↓进入Vplus阀切换检查，提示按4 。
抽样品（浓缩腔vacuum chamber）----→间隔时间（最多一次性打入100ml，样品多，会抽多次进行浓缩，二次间隔的时间Batch interval）
高位激光的清洗
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低位由于有定容要求，所以只能清洗二次。
2ml+清洗体积≤定容体积（5ml，则清洗＜3ml），由于是规定二次洗，所以只需设置这两次体积不超过3ml即可。
转移出来的体积（Filling volume of concentrate）
Column pre-clean Timer 上样前加溶剂冲柱子的时间。
comancheForerun 除杂质的时间，16～20min可以出完；main Fraction 收集时间，从16～32min段收集16min的组分。
GPC Tailing(s)，200s多冲一下柱子；dimentation of sample 样品瓶里是否有沉淀物，针插到瓶底抽样；sample intake volume(从样品瓶内抽出到定量环的体积)
