㊀Ｇｕｉｈａｉａ㊀Ｎｏｖ．２０１７，３７（１１）：１４４７－１４５４
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１１９３１／ｇｕｉｈａｉａ．ｇｘｚｗ２０１７０６０１０
引文格式：陈灼娟．枇杷属内栽培种和部分野生种ＩＴＳ序列分析［Ｊ］．广西植物，２０１７，３７（１１）：１４４７－１４５４
ＣＨＥＮＺＪ．ＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍｃｕｌｔｉｖａｒｓａｎｄｓｏｍｅｗｉｌｄｓｐｅｃｉｅｓｏｆｇｅｎｕｓＥｒｉｏｂｏｔｒｙａ［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ，２０１７，３７（１１）：１４４７－１４５４枇杷属内栽培种和部分野生种ＩＴＳ序列分析
陈灼娟
（福州大学至诚学院生物工程系，福州３５０００２）
摘㊀要：对不同栽培区的２５种普通枇杷品种以及７种枇杷属野生种的ＩＴＳ序列进行扩增并测序，采用邻接法和最大简约法进行系统发育树的构建并对枇杷属内不同种间的遗传关系进行了分析㊂结果表明：枇杷属植物ＩＴＳ序列ＩＴＳ１＋５．８ＳｒＤＮＡ＋ＩＴＳ２总长度为５９２ｂｐ或５９４ｂｐ，长度变化发生在ＩＴＳ２㊂所有样本的ＩＴＳ１和５．８ＳｒＤＮＡ长度一样，都是２２３ｂｐ和１６８ｂｐ；而ＩＴＳ２为２０１ｂｐ或２０３ｂｐ㊂５种枇杷属野生种的ＩＴＳ序列长度为５９４ｂｐ，包括栎叶枇杷㊁大渡河枇杷㊁南亚枇杷㊁南亚枇杷窄叶变种和大瑶山枇杷；其余２种枇杷属野生种（麻栗坡枇杷㊁小叶枇杷）和普通枇杷栽培种的ＩＴＳ序列长度都为５９２ｂｐ㊂所有样本ＩＴＳ序列的ＧＣ含量为６４．２％ ６４．５％，其中ＩＴＳ１为６４．１％ ６５．５％，ＩＴＳ２为６８．１％ ７２．６％㊂对所有样本的ＩＴＳ序列比对产生４４个可变位点，其中３８个为简约信息位点，其中１１个位于ＩＴＳ１，５个位于５．８ＳｒＤＮＡ，２２个位于ＩＴＳ２㊂最大的种间序列差异为７．７％，最小的种间差异发生在麻栗坡枇杷和小叶枇杷之间，仅为０．２％㊂普通枇杷种内的ＩＴＳ序列差异很低，２５种普通枇杷栽培种之间的序列差异为０ １．５％㊂所研究的枇杷属植物可分为３个分支㊂分支Ⅰ包括所有普通枇杷品种，分支Ⅱ包含５种野生枇杷种，包括栎叶枇杷㊁大渡河枇杷㊁南亚枇杷㊁南亚枇杷窄叶变种和大瑶山枇杷；分支Ⅲ由２个野生枇杷种（麻栗坡枇杷㊁小叶枇杷）组成㊂该研究结果表明ＩＴＳ序列对枇杷种间鉴定和系统发育分析具有一定意义，但对普通枇杷栽培种间的鉴定作用不大㊂voshon
关键词：枇杷属，ＩＴＳ序列，变异位点，系统发育
中图分类号：Ｑ７８１，Ｑ９４９㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀文章编号：１０００⁃３１４２（２０１７）１１⁃１４４７⁃０８
ＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍｃｕｌｔｉｖａｒｓａｎｄｓｏｍｅｗｉｌｄ
ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｇｅｎｕｓＥｒｉｏｂｏｔｒｙａ
ＣＨＥＮＺｈｕｏ⁃Ｊｕａｎ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｉｃｈｅｎｇＣｏｌｌｅｇｅ，ＦｕｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ１，５．８ＳｒＤＮＡａｎｄＩＴＳ２）ｒｅｇｉｏｎｓｏｆｓｅｖｅｎｗｉｌｄＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｔｗｅｎｔｙ⁃ｆｉｖｅｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．ＴｈｅｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｔｈｅＮｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｏｆ
收稿日期：２０１７⁃０７⁃２６㊀㊀修回日期：２０１７⁃０８⁃２０
基金项目：福建省教育厅中青年教育科研项目（ＪＡＴ１６０６６３）［ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＹｏｕｔｈＥｄｕｃａｔｉｏｎＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒａｍｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（ＪＡＴ１６０６６３）］㊂
作者简介：陈灼娟（１９８３－），女，福建福州人，硕士，讲师，主要研究方向为生物化学与分子生物学，（Ｅ⁃ｍａｉｌ）２８２７１４５０６＠ｑｑ．ｃｏｍ㊂
ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｉｎｔｈｉｓｗｏｒｋ．ＴｈｅｓｉｚｅｏｆｔｈｅＩＴＳ１＋５．８ＳｒＤＮＡ＋ＩＴＳ２ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗａｓ５９２ｂｐｏｒ５９４ｂｐ．Ｔｈｅｌｅｎｇｔｈｖａｒｉａ⁃ｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｉｎＩＴＳ２．ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＩＴＳ１ａｎｄ５．８ＳｒＤＮＡｆｏｒａｌｌｓａｍｐｌｅｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｃａｌ，ｗｉｔｈａｖａｌｕｅｏｆ２２３ｂｐａｎｄ１６８ｂｐ．ＷｈｉｌｅＩＴＳ２ｗａｓ２０１ｂｐｏｒ２０３ｂｐ．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄａｔａｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｆｉｖｅｗｉｌｄＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｐｌａｎｔｓ（Ｅ．ｐｒｉ⁃ｎｏｉｄｅｓ，Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓｖａｒ．ｄａｄｕｈｅｅｎｓｉｓ，Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ，Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓｆ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ，Ｅ．ｄａｙａｏｓｈａｎｅｎｓｉｓ）ｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓａｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅｌｅｎｇｔｈｏｆ
５９４ｂｐ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｏｔｈｅｒｓｗｅｒｅ５９２ｂｐ．ＶａｒｉａｔｉｏｎｏｆＧＣｃｏｎｔｅｎｔｓｈａｓｂｅｅｎａｌｓｏｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｓｃｏｒｅｄａｓ６４．１％－６５．５％ａｎｄ６８．１％－７２．６％ｆｏｒＩＴＳ１ａｎｄＩＴＳ２．ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆａｌｌｔｈｅＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍＥｒｉｏｂｏｔ⁃ｒｙａｐｌａｎｔｓｐｒｏｄｕｃｅｄ４４ｖａｒｉａｂｌｅｓｉｔｅｓｗｉｔｈ３８ｐａｒｓｉｍｏｎｙｏｆｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅｓｉｔｅｓ（１１ｉｎＩＴＳ１，５ｉｎ５．８ＳｒＤＮＡａｎｄ２２ｉｎＩＴＳ２）．Ｔｈｅｇｒｅａｔｅｓｔｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅｗａｓ７．７％．Ｔｈｅｌｏｗｅｓｔｖａｌｕｅ（０．２％）ｏｃｃｕｒｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎＥ．ｍａｌｉ⁃ｐｏｅｎｓｉｓａｎｄＥ．ｓｅｇｕｉｎｉｉｓｈｏｗｅｄｔｈｅｓｉｍｉｌａｒＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｔｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅａｍｏｎｇｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉ⁃ｖａｒｓｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓｖｅｒｙｌｏｗ．Ｔｈｅｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｖａｒｉａｂｉｌｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｗｅｎｔｙ⁃ｆｉｖｅｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｅｒｅ０－１．５％．Ａｌｌｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｓ，ｂｙｔｈｅＮｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙｍｅｔｈｏｄ，ｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅｓｅＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｐｌａｎｔｓｃｏｕｌｄｂｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｍａｊｏｒｃｌａｄｅｓ．ＣｌａｄｅⅠｃｏｎｔａｉｎｅｄａｌｌｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉｖ
ａｒｓ．ＣｌａｄｅⅡｃｏｎｔａｉｎｅｄｆｉｖｅｗｉｌｄｓｐｅｃｉｅｓｏｆＥｒｉｏｂｏｔｒｙａ（Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓ，Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓｖａｒ．ｄａｄｕｈｅｅｎｓｉｓ，Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎ⁃ｓｉｓ，Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓｆ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ，Ｅ．ｄａｙａｏｓｈａｎｅｎｓｉｓ）．ＣｌａｄｅⅢｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆＥ．ｍａｌｉｐｏｅｎｓｉｓａｎｄＥ．ｓｅｇｕｉｎｉｌｆｏｒｍｅｄａｂａｓｅｌｃｌａｄｅ．ＩＴＳｄａｔａｆａｉｌｅｄｔｏｒｅｓｏｌｖｅｉｎｔｅｒｎａｌｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｔｈｅＣｌａｄｅⅠ，ａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｌａｄｅｓｉｎｃｅａｌｌｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉｖａｒｓａｎａｌｙｓｅｄｗｅｒｅｉｎｔｈｉｓｃｌａｄｅ．ＯｕｒｒｅｓｕｌｔｓｓｔｒｏｎｇｌｙｓｕｐｐｏｒｔｅｄｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｓｐｅｃｉｅｓ，ｂｕｔｕｓｅＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｖａｒｉｅｔｙｏｆｌｏｑｕａｔ（Ｅ．ｊａｐｏｎｉｃａ）ｃｕｌｔｉｖａｒｓｄｉｄｎｏｔａｐｐｅａｒｔｏｈｅｌｐ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ，ＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｖａｒｉａｔｉｏｎｐｏｉｎｔ，ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ
㊀㊀枇杷属（ＥｒｉｏｂｏｔｒｙａＬｉｎｄｌ．）属于蔷薇科（Ｒｏｓａ⁃ｃｅａｅ）苹果亚科（Ｍａｌｏｉｄｅａｅ），有２７ ３０种，主要分布在东亚和东南亚地区㊂普通枇杷（Ｅｒｉｏｂｏｔｒ
2012奥斯卡
ｙａｊａ⁃ｐｏｎｉｃａ）由于其可食性而广为人知㊂在中国，关于枇杷的记载可追溯到２０００年前，中国拥有丰富的枇杷种质资源，种类多㊁分布广㊂在古代，枇杷就被引种到国外，现在枇杷已在世界其他地区普遍种植（Ｓｏｒｉａｎｏｅｔａｌ，２００５）㊂为理解枇杷属植物的分布和分类情况，学术界进行了大量的研究工作㊂在中国有大量的野生枇杷种质资源，并不断有新的枇杷种被发现（Ｌｉｎ，１９９９）㊂但由于对野生枇杷的研究较少以及缺乏快速有效的鉴定工具，造成枇杷属内种类的一些混乱（杨向晖等，２００５）；而普通枇杷由于长期以来不同区域间经常相互引种栽培，果农自行定名推广，导致枇杷品种出现同物异名和同名异物的混乱现象㊂所以，枇杷属内植物的遗传评价和物种鉴定对于资源的保护和利用尤为重要㊂
传统的系统发育分析基于形态学特征进行，随着分子生物学的发展，一些生物学标志如同工酶（方德秋和章恢志，１９８９）㊁等位酶（蔡礼鸿等，２００５）㊁ＲＡＰＤ（Ｖｉｌａｎｏｖａｅｔａｌ，２００１）㊁ＡＦＬＰ（吴锦程等，２００６）㊁ＳＳＲ（Ｓｏｒｉａｎｏｅｔａｌ，２００５）等已被用于枇
杷遗传多样性和种质鉴定研究中㊂ＩＴＳ序列具有
进化速率快㊁稳定性好和测序方便的优点，成为研
究植物系统发育及分子进化的有效工具和重要标
记，被广泛应用于植物属间㊁种间以及种内各栽培
种间分类研究（Ａｌｖａｒｅｚ＆Ｗｅｎｄｅｌ，２００３）㊂本研究
英语演讲稿范文测定了２５种普通枇杷栽培种及７种枇杷属野生种艾薇儿的婚礼
的ＩＴＳ序列，并进行枇杷属系统发育分析，研究枇
杷属内分类学关系，为枇杷属物种多样性保护㊁种
质鉴别和栽培育种提供分子生物学工具和依据㊂１㊀材料与方法
１．１材料
植物材料均采自国家果树种质福州枇杷资源
圃，包括２５种普通枇杷栽培种，代表国内外不同
的枇杷栽培区，还采集了７种枇杷属野生种，采集
时均采集树上嫩叶，并立即保存于液氮中备用，品
８４４１广㊀西㊀植㊀物３７卷
四级评分标准细则
种名称㊁原产地详见表１㊂本研究选取了与枇杷属亲缘关系近的苹果属的Ｍａｌｕｓｆｕｓｃａ（ＧｅｎＢａｎｋＮｏ：ＡＦ１８６５１４）和李属的Ｐｙｒｕｓｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ（ＧｅｎＢａｎｋＮｏ：ＥＵ１５００５８）作为外类群㊂
ＯＭＥＧＡＥ．Ｚ．Ｎ．ＡＨＰｐｌａｎｔＤＮＡＫｉｔ㊁ＯＭＥＧＡＥ．Ｚ．Ｎ．ＡＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ购自福州博鸿生物科技有限公司；即用ＰＣＲ扩增试剂盒及部分药品购自上海生工生物工程有限公司，引物由上海生工生物工程有限公司合成㊂ＩＴＳ引物采用Ｗｈｉｔｅｅｔａｌ（１９９０）设计的通用引物ＩＴＳ１和ＩＴＳ４，引物ＩＴＳ１和引物ＩＴＳ４分别位于１８Ｓ和２８ＳｒＤＮＡ片段上，可扩增全长ＩＴＳ１㊁５．８ＳｒＤＮＡ和ＩＴＳ２序列㊂１．２方法
１．２．１枇杷叶基因组ＤＮＡ的提取和检测㊀液氮中研磨枇杷叶至粉末，应用Ｅ．Ｚ．Ｎ．ＡＨＰｐｌａｎｔＤＮＡＫｉｔ进行ＤＮＡ提取，具体操作参照试剂盒说明书㊂提取到的ＤＮＡ用１％琼脂糖凝胶电泳进行检测㊂１．２．２ＰＣＲ扩增㊀ＰＣＲ扩增应用上海生工即用ＰＣＲ试剂盒进行，反应体系包含２５μＬ２ˑＰＣＲＭａｓｔｅｒ（含ＭｇＣｌ２）㊁１μＬＰｒｉｍｅｒＩＴＳ⁃１（２０μｍｏｌ㊃Ｌ⁃１）㊁１μＬＰｒｉｍｅｒＩＴＳ⁃４（２０μｍｏｌ㊃Ｌ⁃１）㊁５０ｎｇ枇杷叶基因组ＤＮＡ㊂反应程序为９４ħ预变性１０ｍｉｎ；９４ħ变性１ｍｉｎ㊁５５ħ退火３０ｓ㊁７２ħ延伸１ｍ
ｉｎ，３０ｃｙｃｌｅｓ；最后７２ħ延伸１０ｍｉｎ㊂ＰＣＲ产物用１．５％琼脂糖凝胶电泳检测㊂
１．２．３ＰＣＲ产物回收与测序㊀ＰＣＲ产物使用ＯＭＥＧＡＥ．Ｚ．Ｎ．ＡＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ进行回收纯化，回收产物直接测序，测序工作委托上海生工生物工程有限公司进行㊂
１．２．４数据分析㊀ＩＴＳ１㊁５．８Ｓ和ＩＴＳ２的边界由已知ＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａＩＴＳ序列（ＧｅｎＢａｎｋＮｏ：Ｕ１６１９２）和近缘种已经发表的ＩＴＳ序列来界定，利用ＣＬＵＳＴＡＬＸｖ．１．８１（Ｔｈｏｍｐｓｏｎｅｔａｌ，１９９７）进行序列排列，并进行手工校正㊂利用ＭＥＧＡｖ．４．０．２（Ｔａｍｕｒａｅｔａｌ，２００７）对ＩＴＳ１㊁５．８Ｓ和ＩＴＳ２三个区域ＧＣ含量和核苷酸替代率进行计算，并根据Ｋｉｍｕｒａ二参数模型构建邻接树㊂此外，还利用ＰＡＵＰ４．０ｂｅｔａ１０ｗｉｎ（Ｓｗａｆｆｏｒｄ，２００２）软件对所有序列进行最大简约树的构建，所有特征状态指定为无序（ｒａｎｄｏｍ），空位作缺失（ｍｉｓｓｉｎｇ）状态分析㊂最大简约树的构建使用启发式（ｈｅｕｒｉｓｔｉｃ）搜索（１００随机添加序列重复），树二等分再连接分支交换（ＴＢＲ），各种核苷酸替代同等加权，使用自展法（ｂｏｏｔｓｔｒａｐ）检验ＭＰ树可靠性（重复１０００次）㊂２㊀结果与分析
２．１序列长度和ＧＣ含量
本研究中所有样品ＩＴＳ序列已提交至ＧｅｎＢａｎｋ，详见表１㊂通过对序列长度和ＧＣ含量分析发现，所研究枇杷属植物整个ＩＴＳ序列包括ＩＴＳ１㊁５．８ＳｒＤＮＡ和ＩＴＳ２长度为５９２ｂｐ或５９４ｂｐ（表２）㊂其中，来自５种野生枇杷：南亚枇杷（Ｅｒｉ⁃ｏｂｏｔｒｙａｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ）㊁南亚枇杷窄叶变种（Ｅ．ｂｅｎｇａ⁃ｌｅｎｓｉｓｆ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）㊁栎叶枇杷（Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓ）㊁大渡河枇杷（Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓｖａｒ．ｄａｄｕｈｅｅｎｓｉｓ）㊁大瑶山枇杷（Ｅ．ｄａｙａｏｓｈａｎｅｎｓｉｓ）的ＩＴＳ序列长度都为５９４ｂｐ㊂其余２种野生枇杷：麻栗坡枇杷（Ｅ．ｍａｌｉｐｏｅｎｓｉｓ）和小叶枇杷（Ｅ．ｓｅｇｕｉｎｉｉ）及２５种普通枇杷（Ｅ．ｊａｐｏｎｉ⁃ｃａ）栽培种的ＩＴＳ序列长度都为５９２ｂｐ㊂长度变异区域发生在ＩＴＳ２区，变异发现为一个ＧＣ的插入（图１）㊂所研究的枇杷属植物的ＩＴＳ序列ＧＣ含量在６４．２％ ６４．５％之间，其中ＩＴＳ１为６４．１％ ６５．５％，ＩＴＳ２为６８．１％ ７２．６％㊂
２．２序列差异性
本研究所采集的枇杷属植物的ＩＴＳ序列比对发现存在４４个变异位点，信息位点为３８个，其中１１个位于ＩＴＳ１，５个在５．８Ｓ，２２个位于ＩＴＳ２㊂种间最大的序列差异为７．７％，最小的差异是在麻栗坡枇杷和小叶枇杷之间，仅有０．２％㊂栎叶枇杷和大渡河枇杷序列同源率为９９．３％，南亚枇杷和南亚枇杷窄叶变种序列同源率为９９．２％，序列数据差异与其品种分类一致㊂
研究发现在普通枇杷各品种间的ＩＴＳ序列差异较小，差异值在０ １．５％之间；差异位点发生在ＩＴＳ２，大部分栽培种表现为相同的ＩＴＳ序列，表明ＩＴＳ序列在普通枇杷种内具有高度保守性㊂２．３ＩＴＳ序列的系统发育分析
本研究基于ＩＴＳ序列构建了枇杷属内系统发育树㊂邻接树应用Ｋｉｍｕｒａ二参数法构建（图２）㊂在
９４４１
１１期陈灼娟：枇杷属内栽培种和部分野生种ＩＴＳ序列分析
表１㊀所研究枇杷品种和枇杷属其他种类的来源地及ＧｅｎＢａｎｋ登录号
Ｔａｂｌｅ１㊀ＯｒｉｇｉｎａｎｄａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｃｕｌｔｉｖａｒｓａｎｄｓｐｅｃｉｅｓｏｆＥｒｉｏｂｏｔｒｙａａｎｄｏｕｔｇｒｏｕｐ
品种或种类
Ｃｕｌｔｉｖａｒｏｒｓｐｅｃｉｅｓ来源地
Ｏｒｉｇｉｎ登录号Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒ
解放钟 Ｊｉｅｆａｎｇｚｈｏｎｇ 中国福建ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２３
太城白密 Ｔａｉｃｈｅｎｇｂａｉｍｉ 中国福建ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７３１
石榴本 Ｓｈｉｌｉｕｂｅｎ 中国福建ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７３０
龙才白 Ｌｏｎｇｃａｉｂａｉ 中国福建ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２５
坑本 Ｋｅｎｇｂｅｎ 中国福建ＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２４
夹脚 Ｊｉａｊｉａｏ 中国浙江ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２２
单边种 Ｄａｎｂｉａｎｚｈｏｎｇ 中国浙江ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１５
白玉 Ｂａｉｙｕ 中国江苏ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１３
冠玉 Ｇｕａｎｙｕ 中国江苏ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１９
长柄扁核 Ｃｈａｎｇｂｉｎｇｂｉａｎｈｅ 中国安徽ＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１４
短柄扁核 Ｄｕａｎｂｉｎｇｂｉａｎｈｅ 中国安徽ＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１８
华宝３号 Ｈｕａｂａｏ⁃３ 中国湖北ＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２１
珠珞红砂 Ｚｈｕｌｕｏｈｏｎｇｓｈａ 中国江西ＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７３７
杨梅洲２号 Ｙａｎｇｍｅｉｚｈｏｕ⁃２ 中国江西ＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７３５
大乌脐 Ｄａｗｕｑｉ 中国广东ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１６
木罗枇杷 Ｍｕｌｕｏｐｉｐａ 中国广东ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２８
俨糖枇杷 Ｙａｎｔａｎｇｐｉｐａ 中国广西Ｇｕａｎｇｘｉ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７３６
大五星 Ｄａｗｕｘｉｎｇ 中国四川ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７１７
bazaar龙泉７７⁃２ Ｌｏｎｇｑｕａｎ７７⁃２ 中国四川ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２６
贵州野生 Ｇｕｉｚｈｏｕｙｅｓｈｅｎｇ 中国贵州ＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４９７２０
田中 Ｔａｎａｋａ 日本ＪａｐａｎＦＪ４４９７３２
茂木 Ｍｏｇｉ 日本ＪａｐａｎＦＪ４４９７２７
森尾早生 Ｍｏｒｉｏｗａｓｅ 日本ＪａｐａｎＦＪ４４９７２９
西班牙２号 Ｕｌｌｅｒａ 西班牙ＳｐａｉｎＦＪ４４９７３３
西班牙４号 Ｂｉａｎｃｏ 西班牙ＳｐａｉｎＦＪ４４９７３４
栎叶枇杷Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｐｒｉｎｏｉｄｅｓ中国四川ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ４４０３３６
南亚枇杷Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ中国云南ＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０３
南亚枇杷窄叶变种Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓｆ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ中国云南ＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０６
麻栗坡枇杷Ｅ．ｍａｌｉｐｏｅｎｓｉｓ中国云南ＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０８
小叶枇杷Ｅ．ｓｅｇｕｉｎｉｉ中国云南ＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０７
大瑶山枇杷Ｅ．ｄａｙａｏｓｈａｎｅｎｓｉｓ中国广西Ｇｕａｎｇｘｉ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０４
大渡河枇杷Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓｖａｒ．ｄａｄｕｈｅｅｎｓｉｓ中国四川ＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｈｉｎａＦＪ５７１５０５０５４１广㊀西㊀植㊀物３７卷
表２㊀枇杷属植物ＩＴＳ序列的长度和ＧＣ含量
Ｔａｂｌｅ２㊀ＬｅｎｇｔｈａｎｄＧＣｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｐｌａｎｔｓ
品种或种类Ｃｕｌｔｉｖａｒｏｒｓｐｅｃｉｅｓ
英语 单词长度
Ｌｅｎｇｔｈ
ＩＴＳＩＴＳ１ＩＴＳ２
ＧＣ含量
ＧＣｃｏｎｔｅｎｔｓ
ＩＴＳＩＴＳ１ＩＴＳ２
品种或种类
Ｃｕｌｔｉｖａｒｏｒｓｐｅｃｉｅｓ
长度
Ｌｅｎｇｔｈ
ＩＴＳＩＴＳ１ＩＴＳ２
ＧＣ含量
ＧＣｃｏｎｔｅｎｔｓ
ＩＴＳＩＴＳ１ＩＴＳ２
解放钟
Ｊｉｅｆａｎｇｚｈｏｎｇ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１俨糖枇杷
Ｙａｎｔａｎｇｐｉｐａ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．６
太城白密
Ｔａｉｃｈｅｎｇｂａｉｍｉ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１大五星
Ｄａｗｕｘｉｎｇ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１
石榴本
Ｓｈｉｌｉｕｂｅｎ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１龙泉７７⁃２
Ｌｏｎｇｑｕａｎ７７⁃２ ５９２２２３２０１６４．５６４．６６９．１
hollande
龙才白
Ｌｏｎｇｃａｉｂａｉ ５９２２２３２０１６４．３６４．６６８．６贵州野生
Ｇｕｉｚｈｏｕｙｅｓｈｅｎｇ ５９２２２３２０１６４．５６５．０６８．１
坑本
Ｋｅｎｇｂｅｎ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１田中 Ｔａｎａｋａ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．６
夹脚
Ｊｉａｊｉａｏ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１茂木 Ｍｏｇｉ ５９２２２３２０１６４．３６４．６６８．６
单边种
Ｄａｎｂｉａｎｚｈｏｎｇ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１森尾早生
Ｍｏｒｉｏｗａｓｅ ５９２２２３２０１６４．３６４．６６８．１
白玉
Ｂａｉｙｕ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１西班牙２号
Ｕｌｌｅｒａ⁃２ ５９２２２３２０１６４．３６４．６６８．６
冠玉
Ｇｕａｎｙｕ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１西班牙４号
Ｂｉａｎｃｏ⁃４ ５９２２２３２０１６４．５６４．６６９．１
长柄扁核
雅思官网登陆Ｃｈａｎｇｂｉｎｇｂｉａｎｈｅ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．６栎叶枇杷
Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｐｒｉｎｏｉｄｅｓ
５９４２２３２０３６４．８６４．１７０．０
短柄扁核
Ｄｕａｎｂｉｎｇｂｉａｎｈｅ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１南亚枇杷
Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ
５９４２２３２０３６４．８６４．１７０．０
华宝３号
Ｈｕａｂａｏ⁃３ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１南亚枇杷窄叶变种
Ｅ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓｆ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ
５９４２２３２０３６４．６６４．５６９．５
珠珞红砂
Ｚｈｕｌｕｏｈｏｎｇｓｈａ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１麻栗坡枇杷
Ｅ．ｍａｌｉｐｏｅｎｓｉｓ
５９２２２３２０１６６．１６５．５７２．１
杨梅洲２号
Ｙａｎｇｍｅｉｚｈｏｕ⁃２ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１小叶枇杷
Ｅ．ｓｅｇｕｉｎｉｉ
５９２２２３２０１６６．２６５．５７２．６
大乌脐
Ｄａｗｕｑｉ ５９２２２３２０１６４．２６４．６６８．１大瑶山枇杷
Ｅ．ｄａｙａｏｓｈａｎｅｎｓｉｓ
５９４２２３２０３６４．３６４．５６８．５
木罗枇杷
Ｍｕｌｕｏｐｉｐａ ５９２２２３２０１６４．３６４．６６８．６大渡河枇杷
多媒体与英语教学Ｅ．ｐｒｉｎｏｉｄｅｓｖａｒ．ｄａｄｕｈｅｅｎｓｉｓ
５９４２２３２０３６４．７６４．５６９．５
应用最大简约法构建系统树过程中，启发性搜索（ｈｅｕｒｉｓｔｉｃｓｅａｒｃｈｅｓ）产生９５棵最大简约树，其一致性指数（ＣＩ）为０．８８４２，保留指数（ＲＩ）为０．９３８９（图３）㊂这两种方法构建的系统树都把本研究所采集的样品分为３个分支㊂第一个分支（ＣｌａｄｅⅠ）包含了所有的普通枇杷品种，包括栽培种和一些野生种，处于该分支基部的是栽培种贵州野生，由于普通枇杷种内ＩＴＳ序列差异较小，故系统树并没有将这些品种完全分开㊂第二分支（ＣｌａｄｅⅡ）包含栎叶枇杷㊁大渡河枇杷㊁南亚枇杷㊁南亚枇杷窄叶变种和大瑶山枇杷，这５种枇杷都是枇杷属内的野生种㊂第三分支（ＣｌａｄｅⅢ）中包含麻栗坡枇杷和小叶枇杷，这个分支处于整个系统树的基部㊂
３㊀讨论
３．１ＩＴＳ的进化
枇杷属植物的ＩＴＳ１序列长度为２２３ｂｐ，ＩＴＳ２比ＩＴＳ１短２０ｂｐ或２２ｂｐ㊂得到的枇杷属植物ＩＴＳ序列的总长与其他被子植物特别是蔷薇科植物相近（ＩＴＳ１：１８７ ２９８ｂｐ，ＩＴＳ２：１８７ ２５２ｂｐ）（Ｃａｍｐｂｅｌｌｅｔａｌ，１９９５）㊂枇杷属ＩＴＳ序列比对的结果显示长度变异发生在ＩＴＳ２，表现为１个ＧＣ的插
１５４１
１１期陈灼娟：枇杷属内栽培种和部分野生种ＩＴＳ序列分析
