ａｔｅｓｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄａｍａｇｅａｆｔｅｒｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃ ｃｌｕｓｉｏｎ（ＭＣＡＯ）ｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＬｏｎｇａｍｅｔｈ ｏｄ．ＴｈｅｒａｔｓａｆｔｅｒＭＣＡＯｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ：ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ＲｖＤ１ｇｒｏｕｐａｎｄＲｖＤ１＋Ｂｏｃ ２ｇｒｏｕｐ，ａｎｄａｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐｗａｓｓｅｔｕｐａｓｃｏｎｔｒｏｌａｓｗｅｌｌ．Ｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｆａｒｃｔｖｏｌｕｍｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ，ＭＰＯａｃ ｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｒａｔｂｒａｉｎｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ ｃｅｎｃｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＦＰＲ２／Ｉｂａ １，ＣＤ１６／Ｉｂａ １ａｎｄＣＤ２０６／Ｉｂａ １ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕ ｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｏｕｂｌｅｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎｓｏｆＴＮＦ α，ＩＬ １βａｎｄｉＮＯＳｉｎＭ１ａｎｄＴＧＦ β，ＩＬ １０，Ａｒｇ １ｉｎＭ２ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴ ｑＰＣＲ．Ｒｅ ｓｕｌｔｓ ＲｖＤ１ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＰＯ，ａｎｄｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒＦＰＲ２ｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｍｉｃｒｏｇｌｉａ．ＲｖＤ１ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａ ｔｅｄＭ１ｍａｒｋｅｒｓＣＤ１６＋／Ｉｂａ １＋ｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＮＦ α，ＩＬ １β，ｉＮＯＳ，ａｎｄ
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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＲｖＤ１；ＦＰＲ２；ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕ ｓｉｏｎ；ｍｉｃｒｏｇｌｉａ；Ｍ１／Ｍ２ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ；ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ
网络出版时间：２０２１－５－２８１０：４２ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２１０５２７．１４５８．０２２．ｈｔｍｌ
紫云英苷通过ＮＯＸ２／ＲＯＳ／ＮＦ κＢ信号通路抑制哮喘气道炎症
马小斐，刘函晔，王丹丹，宋艺兰，延光海，李良昌
（吉林省过敏性常见疾病免疫与靶向研究重点实验室，延边大学医学院，吉林延吉 １３３００２）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２１．０６．０１１
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２１）０６－０７９７－０６中国图书分类号：
摘要：目的 探究紫云英苷（ａｓｔｒａｇａｌｉｎ，ＡＧ）对哮喘小鼠气道炎症的影响及作用机制。方法 ＳＰＦ级雄性小鼠５０只随机分为正常组、哮喘模型组、紫云英苷低（ＡＧ２５）、中（ＡＧ５０）、高（ＡＧ１００）剂量组。鸡卵白蛋白吸入制备哮喘小鼠模型，收取支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）后，Ｄｉｆｆ Ｑｕｉｋ染色计数细胞数量，ＥＬＩＳＡ检测ＢＡＬＦ中ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３水平。ＨＥ染色观察小鼠肺组织炎症变化。利用ＤＣＦＨ ＤＡ探针检测ＲＯＳ水平，比色法检测ＳＯＤ活性和ＭＤＡ含量。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测肺组织ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３、ＮＯＸ２、ｐ４７ｐｈｏｘ、ｐ ＮＦ κＢｐ６５、ＮＦ κＢｐ６５、ＩκＢα、ｐ ＩκＢα和β ａｃｔｉｎ表达。结果 ＡＧ明显减少ＢＡＬＦ各炎症细胞及总细胞数量，降低ＢＡＬＦ和肺组织ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３含量，减少肺组织炎症细胞浸润。ＡＧ抑制ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达，降低ＲＯＳ水平和ＭＤＡ水平，提高ＳＯＤ活性，抑制ＩκＢα和ＮＦ κＢｐ６５磷酸化。结论 ＡＧ通过ＮＯＸ２／ＲＯＳ／ＮＦ ｋＢ信号通路调节氧化应激反应减轻哮喘气道炎症。
收稿日期：２０２１－０２－０５，修回日期：２０２１－０３－２９
十佳少先队员演讲稿基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８２０６０００８）
作者简介：马小斐（１９９３－），女，硕士生，研究方向：过敏性疾病研究，Ｅ ｍａｉｌ：２２７５１４１３６９＠ｑｑ．ｃｏｍ；
刘函晔（１９９５－），女，博士生，研究方向：过敏性疾病研
究，共同第一作者，Ｅ ｍａｉｌ：４４５０７５４３９＠ｑｑ．ｃｏｍ；
李良昌（１９７８－），男，博士，副教授，研究方向：过敏性疾
病研究，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｃｌｅｅ＠ｙｂｕ．ｅｄｕ．ｃｎ关键词：紫云英苷；哮喘；氧化应激；ＮＯＸ２；ＲＯＳ；ＮＦ κＢ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
劳改营 哮喘（ａｓｔｈｍａ）是一种慢性炎症性疾病。Ｔｈ２类细胞因子如白介素（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ）４、５和１３等促进ＩｇＥ生成和炎症细胞浸润导致过敏性哮喘的发生。哮喘的治疗通常使用皮质类固醇药物，长期激素类药物的应用会导致一系列不良反应，因此需要寻找更安全有效的哮喘治疗药物。
紫云英苷（ａｓｔｒａｇａｌｉｎ，ＡＧ）是百蕊草、黄芪等多种传统药用植物的生物活性成分，近年来研究表明其具有明显的抗炎作用。在脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａ ｒｉｄｅ，ＬＰＳ）诱导的急性肺损伤模型小鼠中发现紫云英苷能明显降低ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＩＬ ６的水平［１］，减轻氧化应激并抑制卡拉胶诱导的足肿胀模型小鼠炎症反应［２］，抑制ＬＰＳ诱导巨噬细胞的核转录因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦ κＢ）激活和炎症介质释放［３］，也有研究报道紫云英苷通过降低细胞因子信号抑制物 ３（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３，ＳＯＣＳ ３）抑制Ｔｈ２细胞因子介导的哮喘气道炎症［４］。虽然紫云英苷抗哮喘等炎症的作用已经被证实，但从氧化应激方面探讨其抗哮喘作用的研究却没有被深
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）：７９７－８０２
入阐述。本论文旨在确定紫云英苷通过ＮＯＸ２／ＲＯＳ／ＮＦ κＢ抑制哮喘氧化应激和气道炎症。
１ 材料与方法
篮球学校１．１ 实验材料、试剂
１．１．１实验动物 清洁级ＢＡＬＢ／ｃ小鼠５０只，♂，６－８周龄，购自延边大学实验动物中心，合格证号为：ＳＣＸＫ（吉）２０１７ ０００３。正常饮食，室温下饲养。一切动物实验均通过延边大学医学院医学伦理审查，遵循相关动物保护法。
１．１．２ 实验试剂 紫云英苷（ＭＣＥ公司，货号：ＨＹ Ｎ００１５），ＯＶＡ（美国Ｓｉｇｍａ，货号：Ａ３７８２），氢氧化铝凝胶（美国Ｓｉｇｍａ，货号：１０１７５０２）；活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）检测ＤＣＦＨ ＤＡ探针（碧云天公司，货号：Ｓ００３３Ｓ）；超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓ ｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）检测试剂盒（南京建成公司，货号：Ａ００１ ３ ２），丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）检测试剂盒（南京建成公司，货号：Ａ００３ １ ２）；ＩＬ ４（货号：ＢＭＳ６１３）、Ｉ
Ｌ ５（货号：ＢＭＳ６１０）、ＩＬ １３（货号：ＢＭＳ６０１５）的ＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，美国）；ＩＬ ４（ｓｃ ５３０８４）、ＩＬ ５（ｓｃ ３９８３３４）、ｐ４７ｐｈｏｘ（ｓｃ １７８４５）、ｐ ＩκＢα（ｓｃ ８４０４）、ｐ ＮＦ κＢｐ６５（ｓｃ １６６７４８）抗体（ＳａｎｔＣｒｕｚ，美国）；ＮＡＤＰＨ氧化酶２（ＮＯＸ２）（ａｂ１２９０６８）、ＩＬ １３（ａｂ１０８５０１）、ＩκＢα（ａｂ３２５１８）、ＮＦ κＢｐ６５（ａｂ１６５０２）和β ａｃｔｉｎ（ａｂ８２２６）抗体（ａｂ ｃａｍ，英国）。
１．２ 实验方法
１．２．１ 小鼠哮喘模型制备 小鼠分５组：正常（Ｎｏｒｍａｌ），哮喘（Ｍｏｄｅｌ），紫云英苷低（ＡＧ２５），中（ＡＧ５０）和高（ＡＧ１００）剂量组，每组１０只。每组小鼠在ｄ１和ｄ１４腹腔注射ＯＶＡ（１０μｇ）和氢氧化铝（１ｍｇ）悬浊液２００μＬ致敏，在ｄ２１－２３，模型小鼠用ＯＶＡ（０ １ｇ）生理盐水混合液１０ｍＬ雾化吸入，吸入时间持续３０ｍｉｎ，正常小鼠用生理盐水代替。紫云英苷组在激发前１ｈ分别按２５，５０和１００ｍｇ·ｋｇ－１灌胃治疗。
１．２．２ 收集实验 最后一次激发２４ｈ后处死小鼠，暴露气管，将１ｍＬ生理盐水注入气管后回抽获取支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ），离心取上清用于ＥＬＩＳＡ检测，沉淀再悬浮，取２００μＬ甩片后Ｄｉｆｆ Ｑｕｉｋ染色。小鼠左肺上叶固定后石蜡包埋。其余肺叶提取蛋白。
１．２．３ ＢＡＬＦ中细胞因子测定 ＥＬＩＳＡ法检测ＢＡＬＦ中ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３等细胞因子的水平。实验操作参照说明书。
１．２．４ 小鼠肺切片ＨＥ染色 石蜡包埋的肺组织５μｍ连续切片，脱蜡后ＨＥ染色，观察小鼠肺部炎症变化。
１．２．５ ＲＯＳ、ＭＤＡ和ＳＯＤ含量检测 ５００ｍｇ右肺组织匀浆后制备细胞悬液，按照说明书装载ＤＣＦＨ ＤＡ探针，流式细胞仪上机检测ＲＯＳ水平。实验操作参照说明书。比色法检测ＭＤＡ和ＳＯＤ水平。１．２．６ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 肺组织加适量的ＲＩＰＡ裂解液进行裂解，放置冰上后每１０ｍｉｎ震荡１次，３０ｍｉｎ后１００００ｇ离心取上清，测定蛋白浓度后上样。１１０Ｖ恒压分离蛋白，３００ｍＡ恒流电转至ＰＶＤＦ膜上。５％脱脂奶粉封闭ＰＶＤＦ膜，ＴＢＳＴ洗膜后加入ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３、ＮＯＸ２、ｐ４７ｐｈｏｘ、ＩκＢα、ＮＦ κＢｐ６５和β ａｃｔｉｎ一抗（１∶１０００稀释）４℃过夜。ｄ２，ＴＢＳＴ洗膜后用ＨＲＰ标记的二抗室温孵育２ｈ。ＥＣＬ发光后ＡＩ６００凝胶成像仪进行摄像分析。
１．３ 统计学处理 采用ＳＰＳＳ１７ ０统计软件进行分析，计量资料以珋ｘ±ｓ表示，多组计量资料采用单因素方差分析（Ｏｎｅ ｗａｙＡＮＯＶＡ），组间两两比较采用ＬＳＤ法。
２ 结果
２．１ 紫云英苷对哮喘小鼠ＢＡＬＦ中炎症细胞的影响 对各组小鼠ＢＡＬＦ炎症细胞进行计数，结果表明：与正常组小鼠相比，模型组小鼠炎性细胞总数，嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量明显升高（Ｐ＜０ ０５），紫云英苷中、高剂量组能降低哮喘小鼠炎症细胞和细胞总数（Ｐ＜０ ０５），而且随着紫云英苷剂量的增加，细胞总数，嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量明显下降，见Ｔａｂ１。
Ｔａｂ１ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｉｎｏｎｃｅｌｌｎｕｍｂｅｒｓａｎｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｉｎＢＡＬＦｏｆａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０，×１０７·Ｌ－１）
ＧｒｏｕｐＴｏｔａｌｃｅｌｌｓＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓＮｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓＥｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ
Ｎｏｒｍａｌ７．５９±１．１２０．２９±０．０８０．４２±０．０９１．０２±０．１９
Ｍｏｄｅｌ２５．８９±５．６９ ３．６９±０．９２ ２．３９±０．５４ １９．５２．４２±４．３６ ＡＧ２５ｍｇ·ｋｇ－１２３．５７±４．３８３．２６±０．８５２．１２±０．３９１７．９５±３．１９
ＡＧ５０ｍｇ·ｋｇ－１１４．２６±３．２５＃１．９５±０．３５＃１．３５±０．２５＃１０．１２±２．８６＃
ＡＧ１００ｍｇ·ｋｇ－１１０．３３±２．１１＃１．５４±０．４２＃１．１８±０．１５＃７．１６±１．１８＃
Ｐ＜０ ０５ｖｓｎｏｒｍａｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓｍｏｄｅｌ
２．２ 紫云英苷对哮喘小鼠ＢＡＬＦ和肺组织中ＩＬ ４，ＩＬ ５和ＩＬ １３影响 ＥＬＩＳＡ结果可见：与正常组相比，模型组小鼠ＢＡＬＦ中ＩＬ ４，ＩＬ ５和ＩＬ １３含量明显增加，差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）；紫云英苷中、高剂量能够降低哮喘小鼠ＩＬ ４，ＩＬ ５和ＩＬ １３水平，差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），见Ｔａｂ２。并且ＥＬＩＳＡ结果与Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果一致，见Ｆｉｇ１。提示紫云英苷能够改善ＯＶＡ诱导的哮喘小鼠Ｔｈ２炎症反应。
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Ｆｉｇ１ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｉｎｏｎＩＬ ４，ＩＬ ５ａｎｄＩＬ １３
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｏｆａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ
icsonＰ＜０ ０５ｖｓｎｏｒｍａｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓｍｏｄｅｌ．
Ｔａｂ２ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｉｎｏｎＩＬ ４，ＩＬ ５ａｎｄＩＬ １３ｌｅｖｅｌｓ
ｉｎＢＡＬＦｏｆａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０，ｎｇ·Ｌ－１）Ｇｒｏｕｐresistant
ＩＬ ４ＩＬ ５ＩＬ １３Ｎｏｒｍａｌ
６９．９５±８．９７７０．２１±９．５６５７．６９±７．５４
Ｍｏｄｅｌ３９８．５６±２９．６５ ３６８．９７±３８．５１ ２０８．６９±２９．４６ ＡＧ２５ｍｇ·ｋｇ
－１３６９．５８±３１．２５３２８．４１±４１．２５１８８．７４±２４．６９
ＡＧ５０ｍｇ·ｋｇ－１１６８．５４±１９．５６＃１５８．６２±２５．２６＃１０６．５２±１７．３６
＃ＡＧ１００ｍｇ·ｋｇ－１１３６．５７±１２．５６＃１１５．４３±２４．３６＃８９．２４±１４．６２＃ Ｐ＜０ ０５ｖｓｎｏｒｍａｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓｍｏｄｅｌ
２．３ 紫云英苷对哮喘小鼠肺部炎症的影响 正常
组小鼠气道上皮排列整齐，气道周围未见炎症细胞
聚集。但模型组小鼠气道上皮排列不规则，可见上
皮细胞的肿胀和脱落，气道周围可见大量的炎症细
胞。而紫云英苷中、高剂量组能减少气道周围炎细
胞数量，保持气道上皮完整，见Ｆｉｇ２。２．４ 紫云英苷对哮喘小鼠肺部氧化应激的影响 与正常组相比，模型组小鼠肺部ＲＯＳ和ＭＤＡ水平升高，而抗氧化酶ＳＯＤ的活性明显下降（Ｐ＜０ ０５）；紫云英苷中、高剂量组能够有效降低ＲＯＳ和ＭＤＡ的水平，提高ＳＯＤ的活性（Ｐ＜０ ０５）。提示紫云英苷能改善哮喘小鼠肺部氧化应激，见Ｆｉｇ３。２．５ 紫云英苷对ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达的影响 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达，与正常组相比，模型组肺组织中ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达水平升高，差异有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）。中、高剂量紫云英苷处理后ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达明显降低，与模型组相比差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），见Ｆｉｇ４。２．６ 紫云英苷对ＩκＢα表达的影响 与正常组相比，模型组肺组织中ＩκＢα磷酸化水平升高，总ＩκＢα表达水平降低，差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）。而中、高剂量紫云英苷能抑制ＩκＢ磷酸化，提高总ＩκＢα，与模型组相比差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），见Ｆｉｇ５。２．７ 紫云英苷对ＮＦ κＢｐ６５磷酸化的影响 与正常组比较，
模型组肺组织中ＮＦ κＢｐ６５磷酸化水平升高，差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５）。而中、高剂量紫云英苷能有效抑制ＮＦ κＢｐ６５磷酸化，与模型组比较差异具有统计学意义（Ｐ＜０ ０５），见Ｆｉｇ６。３ 讨论 哮喘是以气道炎症为特征的过敏性疾病，在其发病机制中Ｔｈ２细胞介导的Ⅰ型过敏起关键作用［５］。Ｔｈ２细胞因子ＩＬ ４和ＩＬ １３能促进ＩｇＥ产生，诱导气道高反应性；ＩＬ ５对嗜酸性粒细胞有明显的增殖和趋化作用［６］。调控Ｔｈ２细胞因子水平可能是防治哮喘的有效手段。在确定紫云英苷对哮喘炎症的影响实验中，发现紫云英苷明显降低哮喘模型小鼠ＢＡＬＦ嗜酸性粒细胞等炎症细胞数量；肺组织ＨＥ染色结果发现，紫云英苷能够减轻支气管及周围组织炎症细胞浸润。进一步观察紫云英苷对Ｔｈ２细胞因子的影响，发现紫云英苷明显降低ＢＡＬＦ和肺组织中ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３的水平。这些结果提示，紫云英苷可能通过降低Ｔｈ２细胞因子水平影响哮喘
气道炎症。
Ｆｉｇ２ Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｉｎｏｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ（ｂａｒ＝１００μｍ）
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９９７·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）
Ｆｉｇ６ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｉｎｏｎＮＦ κＢｐ６５ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ
ｉｎｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｏｆａｓｔｈｍａｔｉｃｍｉｃｅ
Ｐ＜０ ０５ｖｓｎｏｒｍａｌ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓｍｏｄｅｌ．
ＲＯＳ是氧化应激的重要的组成部分，参与机体的氧化平衡。ＮＯＸ是除线粒体内膜呼吸链的另一个ＲＯＳ重要来源。ＮＯＸ２（ｇｐ９１ｐｈｏｘ）是ＮＯＸ家族中的一个重要亚型，其组分中结构亚基ｐ２２ｐｈｏｘ和催化亚基ＮＯＸ２形成的二聚体（即细胞色素ｂ５５８），定位在细胞膜上。ｐ４７ｐｈｏｘ、ｐ６７ｐｈｏｘ和ｐ４０ｐｈｏｘ亚基构成的复合体定位在胞质。信号级联触发后，ｐ４７ｐｈｏｘ激活使胞质复合体转移至细胞膜，并与细胞色素ｂ５５８结合形成有活性ＮＯＸ２，催化生成ＲＯＳ［７］。产生的ＲＯＳ可被ＳＯＤ等抗氧化系统清除。但病理条件下，抗氧化系统难以清除过多产生的ＲＯＳ，引起脂质过氧化等一系列病理反应。研究表明，哮喘存在ＲＯＳ的过量产生，过量产生ＲＯＳ能够激活炎症细胞并促使气道上皮释放促炎细胞因子，加剧气道对过敏原的反应［８］。也有研究显示哮喘患者肺内ＲＯＳ明显增加，并且增加的ＲＯＳ破坏肺泡上皮和血管内皮的屏障功能，参与气道炎症和气道重塑［９］。敲除ＮＯＸ２明显促进ｎａｉｖｅＣＤ４Ｔ向Ｔｈ２细胞分化［１０］，并且在ＮＯＸ－／－哮喘小鼠中，Ｔｈ２细胞因子诱导的炎症明显加重［１０
－１１］。本研究发现，紫云英苷能明显提高ＮＯＸ２和ｐ４７ｐｈｏｘ表达，降低哮喘小鼠肺部ＲＯＳ和ＭＤＡ水平，提高ＳＯＤ活性。暗示紫云英苷通过抑制ＮＯＸ２ ＲＯＳ途径改善哮喘小鼠肺部氧化应激。
ＮＦ κＢ／Ｒｅｌ家族复合物是一种氧化还原敏感的转录因子［１２］。ＮＦ κＢ通常以ｐ５０和ｐ６５／ＲｅｌＡ亚基的异二聚体形式存在。正常情况下，ＮＦ κＢ与抑制性κＢ（ＩκＢ）结合并以非ＤＮＡ结合形式定位在细胞质。各种ＮＦ κＢ活化诱导剂刺激细胞后，ＩκＢα丝氨酸残基迅速磷酸化，磷酸化的ＩκＢα被Ｅ３泛素连接酶泛素化，随后被２６Ｓ蛋白酶体降解［１１］。ＮＦ κＢ从与ＩκＢα组成的聚合体中释放，核转移位点暴露，ＮＦ κＢ转移至细胞核并与基因启动子中的κＢ元件结合激活靶基因如ＩＬ ４、ＩＬ ５、ＩＬ １３等，发挥其炎症调控作用［１３］。研究表明，灌服抗氧化剂ＯＴＣ可显著减少ＮＦ κＢ向胞核的移位，降低粘附分子、趋化因子和细胞因子的表达［１４］。也有研究表明，ＲＯＳ能够促进ＩκＢα酪氨酸磷酸化（Ｔｙｒ４２）和ＰＥＳＴ结构域磷酸化，诱导ＮＦ κＢｐ６５（Ｓｅｒ５２９）磷酸化促使ＮＦ κＢ核转位，激活ＮＦ κＢ。本研究中也证明了紫云英苷降低ＲＯＳ水平的同时，也能够明显抑制ＮＦ κＢ的活化。综上所述，紫云英苷可能通过抑制ＮＯＸ２／ＲＯＳ／ＮＦ κＢ信号通路减轻哮喘气道炎症。
参考文献：
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ｉｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．ＡｒｃｈＰｈａｒｍＲｅｓ，２０１１，３４（１２）：２１０１－７．［４］ ＬｉｕＪ，ＣｈｅｎｇＹ，ＺｈａｎｇＸ，ｅｔａｌ．Ａｓｔｒａｇａｌｉｎａ
ｔｔｅｎｕａｔｅｓａｌｌｅｒｇｉｃｉｎ ｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｍｕｒｉｎｅａｓｔｈｍａｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１５，
３８（５）：２００７－１６．
最有效的快速美白方法［５］ 王重阳，姜京植，李俊峰，等．隐丹参酮通过ＴＷＥＡＫ／Ｆｎ１４和ＴＧＦ β１／Ｓｍａｄｓ信号通路缓解ＯＶＡ诱导哮喘小鼠气道炎症
［Ｊ］．中国药理学通报，２０１９，３５（８）：１１４９－５４．
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上海教练ＴＷＥＡＫ／Ｆｎ１４ａｎｄＴＧＦ β１／Ｓｍａｄｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）
