网络出版时间：2013-02-26 15:08
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不同血液病患者巨细胞病毒抗体滴度比较
杨海青1，朱剑梅1，杨银忠2，何英1，周凤琴1，邱发麒1，邓成莲1，王明皓3，
蒋能刚4，游传容1
pig1. 四川省医学科学院/四川省人民医院城东病区内一科，四川省成都市龙泉驿区洪河北路，610101；
2. 四
川省医学科学院/四川省人民医院检验科，四川省成都市一环路西二段32号，610072；3.四川大学华西医院
检验科，四川省成都市国学巷37号，610041；4. 四川大学华西医院急诊科，四川省成都市国学巷37号，
miche610041
摘要：人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）是常见的机会性感染病
毒，在健康人群中不致病，但机体免疫系统下降时可导致严重的HCMV疾病。
目前研究多集中于新生儿和器官移植病人的研究，少有血液疾病HCMV感染的
报道。本研究集中于7种血液疾病51例患者，检测其体内抗HCMV-IgG和IgM
抗体滴度。结果表明在三种血液肿瘤（急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血
病、慢性粒细胞白血病）中抗体滴度最高，而在其余三种非肿瘤血液疾病中抗体
滴度相对较低，表明血液肿瘤对免疫系统的损害高于非肿瘤血液疾病。
关键词：人巨细胞病毒抗HCMV-IgG/IgM抗体抗体滴度血液疾病
Abstract: Human cytomegalovirus (HCMV) is a common opportunistic pathogen.
HCMV is asymptomatic in common persons and could reactive in
immunosuppression groups. Current rearches focus on new born babies and organ
transplantation patients. Seldom results have been reported about the HCMV infection
status in different blood dia. In this study, anti-HCMV-IgG and IgM antibody
titers of 51 clinical samples from ven different blood dias, including Aplastic
Anemia (AA), Myelodysplastic Syndrome (MDS), Chronic Lymphocytic Leukemia
(CLL), Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL), Chronic Myeloid Leukemia (CML),
少儿英语学习Iron Deficiency Anemia (IDA) and Pancytopenia (PA) were detected. The results
showed that IgG and IgM titires were higher in three blood tumors (ALL, CLL and
CML) than in other non-tumor blood dias (AA, MDS, IDA and PA). Our study
demonstrated that tumor damaged the immune function more riously than non-tumor blood dias.
Key words: Human cytomegalovirus anti-HCMV-IgG/IgM antibody antibody titire blood dia
前言
人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）是常见的一种机会性感染病毒，在人群中的感染可达90%，但绝大多数是健康带毒状态，即血液中可检测到抗HCMV抗体，但机体不出现发病症状（1）。HCMV感染后可导致细胞病变，如细胞体积增大（巨细胞），细胞质和细胞核内出现包涵体（2）。在新生儿、器官移植、肿瘤、艾滋病等免疫低下人群中，HCMV疾病的发病率和病死率都很高，是器官移植失败和受者死亡的重要原因（3）。因此在这些病人中，HCMV 活动性感染的诊断成为关键，可为抗病毒治疗及预后提供可靠证据。常用HCMV 的诊断方法有定量PCR法、pp65抗原测定法和HCMV抗体滴度法（4）。其中定量PCR法和pp65抗原测定法方法较复杂，时间太长且需要特殊仪器，因而使用受到限制。血浆抗HCMV-IgG和IgM检测方法相对较简单且快速，可用于常规临床诊断。
国内外目前对HCMV的研究多集中于新生儿和器官移植受者，对血液病中HCMV活动性感染的报道较少。本研究收集了6种血液病：再生障碍性贫血（Aplastic Anemia，AA）、骨髓增生异常（Myelodysplastic Syndrome，MDS）、慢性淋巴细胞白血病（Chronic Lymphocytic Leukemia，CLL）、急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia，ALL）、慢性粒细胞白血病（Chronic Myeloid Leukemia，CML）、缺铁性贫血（Iron Deficiency Anemia，IDA）、全血减少（Pancytopenia，PA）共51例病人，另有9例正常健康人群为对照，采用ELSA 方法对患者体内的抗HCMV-IgM和-IgG抗体进行定量检测，以分析不同血液病种类与HCMV感染后抗体滴度的关系。
材料与方法：
1．病人血浆收集：抽取病人抗凝血1ml，离心分离血浆（1500rpm，5min），小
心收集病人血浆后于4℃保存，所收集病例包括再生障碍性贫血12例，全血减少8例，急性淋巴细胞白血病4例，慢性淋巴细胞白血病3例，慢性粒细胞白血病6例，骨髓增生异常5例，缺铁性贫血4例，正常健康人对照9例。
breasts2．血浆抗HCMV-IgG 和-IgM 检测：检测试剂盒购自上海研吉生物有限公司（抗
rootbeerHCMV-IgG 和-IgM 货号分别为DRE81406和DRE81405），检测步骤：（1）标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔12孔，浓度依次由低到高或者由高到低，每孔加标准50ul ，每个浓度做两个平行孔；（2）加样：分别设
空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加抗体40μl ，然后再加待测样品10μl 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟；（4）配液：将30（48T 的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20倍）倍稀释后备用；（5）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干；（6）加酶：每孔加入酶标试剂50μl ，
空白孔除外；（7）温育：操作同（3）；（8）洗涤：操作同（5）；（9）显色：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟；（10）终止：每孔加终止液50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）；（11）测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
3．数据分析：用EXCEL 将数据导出后分组，并用Prism 软件绘制数据分析图。
结果
1．标准曲线分析other than
标准品 标准曲线
490n m 酶标仪吸收峰值（O D ） 图1. ELISA 标准曲线建立sorry ems to be the hardest word
在检测病人HCMV 抗体滴度之前，需要用ELISA 试剂盒的标准品建立标准曲线，以确保实验结果的可
靠性。本实验用HCMV 标准品进行倍比稀释，其浓度分别为120ng/L ，80 ng/L ，40 ng/L ，20 ng/L ，10 ng/L 。根据酶标仪读数建立标准曲线，结果表明样品实际浓度基本位于标准曲线范围，表明该方法可靠。dis
2
．不同血液病人中抗HCMV-IgG 抗体检测
HCMV-IgG 抗体检测发现，抗体滴度最高的是三种血液肿瘤疾病（ALL ，CLL ，CML ），其中CLL 的平均抗体滴度最高，最高值可达502ng/L ；其次是急性淋巴细胞白血病，最高值为354ng/L ，表明在这三类病人中，HCMV 的活动性感染较高。在其余几类血液疾病患者中，HCMV-IgG 的滴度相对较低，基本与正常健康人群对照相当（图2）。
3．不同血液病人中抗HCMV-IgM 抗体检测
血浆抗H C M V -I g G 抗体滴度（n g ） 图2. 血液病人抗HCMV-IgG 检测结果 AA-再生障碍性贫血；PA-全血减少；ALL-急性淋巴细胞白血病；CLL-慢性淋巴细胞白血病；CML-慢性粒细胞白血病；MDS-骨髓增生异常；IDA-缺铁性贫血；NL-正常健康人
活动性HCMV 感染中，抗体通常有IgG 和IgM 两种。HCMV-IgM 抗体检测发现血液肿瘤患者抗体滴度仍高于其余血液病患者，其中CLL 患者中抗体滴度仍然最高，最高值达507ng/L 。ALL 和CML 的抗体滴度也高于其余血液病患者。与HCMV-IgG 相比，部分非血液肿瘤患者中IgM 滴度明显高于正常健康对照组，包括全血减少患者和缺铁性贫血患者（图3）。
讨论
人巨细胞病毒是最常见机会性感染之一。感染健康人体后以潜伏状态存在于单核细胞中，在免疫功能
低下时可再次活化并导致HCMV 疾病（5）。在国内外的大多数研究中，对HCMV 致病的研究多集中于新生儿及器官移植病人，但实际上多数血液病同样会对机体的免疫系统造成损害，导致机体免疫功能下降，从而诱发HCMV 的再次活化（6）。本研究集中研究6种血液病患者中HCMV 的感染状况，比较不同血液病中HCMV 感染的强弱。
活动性HCMV 感染多伴有抗HCMV 抗体，抗体滴度的高低直接与感染的严重程度相关，与HCMV 感染相关的抗体多为IgG 和IgM 。本研究对6种血液病，血浆抗H C M V -I g M 抗体滴度（n g ） 图3. 血液病人抗HCMV-IgM 检测结果
AA-再生障碍性贫血；PA-全血减少；ALL-急性
淋巴细胞白血病；CLL-慢性淋巴细胞白血病；
CML-慢性粒细胞白血病；MDS-骨髓增生异常；
IDA-缺铁性贫血；NL-正常健康人
共51例患者进行HCMV-IgG和-IgM抗体检测，发现3种血液肿瘤患者（CLL，ALL，CML）中，无论IgG还是IgM均高于其余非血液肿瘤患者和正常健康人群，表明在这些病人中HCMV活化状态最高。HCMV活化状态与机体免疫系统的下降呈正相关关系。因此本实验证实血液肿瘤患者免疫状态低于非
血液肿瘤患者，因而更易诱发HCMV感染及其他机会性病原体感染。
参考文献
1.Revello MG, Gerna G. Human cytomegalovirus tropism for endothelial/epithelial
cells: scientific background and clinical implications[J]. Rev Med Virol, 2010, 20(3): 136-155.
2.V anarsdall AL, Ryckman BJ, Cha MC, et al. Human cytomegalovirus
glycoprotein gB and gH/gL mediate epithelial cell-cell fusion when expresd either in cis or in trans[J]. J Virol., 2008, 82(23): 11837-11850.
3. Tuthill M, Chen F, Paston S, et al. The prevention and treatment oftall怎么读
cytomegalovirus infection in haematopoietic stem cell transplantation[J]. Cancer Immunol Immunother, 2009, 58(9): 1481-1488.
4.李长贵，王剑锋，英志芳，等. 以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗
体建立检测感染性病毒颗粒方法[J]. 中国生物工程杂志，2005，25（10）：47-49.
5.Wang W, Y u P, Zhang P, et al. The infection of human primary cells and cell lines
exceptby human cytomegalovirus: new tropism and new rervoirs for HCMV[J].
Virus rearch, 131(2): 160-169
6.Capris S, Gentile G, Capobianchi A, et al. Prospective cytomegalovirus
monitoring during first-line chemotherapy in patients with acute myeloid leukemia[J]. J Med Virol, 2010, 82(7): 1201-1207
