冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）
Donggan Renyong Kuangquan Yimiaoa（Vero Xibao）
Rabies Vaccine （Vero Cell）For Human U，Freeze-dried
本品系用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，经培养、收货、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜稳定剂冻干制成。用于预防狂犬病。
1 基本要求
生产和检定用设备、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
.1生产用细胞
生产用细胞为Vero细胞。
2.1.1细胞管理及检定
应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各级细胞库细胞代次应不超过批准的限定代次。
取自同批工作细胞库的1支或多支细胞，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。
2.1.2细胞制备
取工作细胞库中的1支或多支细胞，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。将经复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。
2.2毒种
2.2.1名称及来源
生产用毒种为狂犬病病毒固定的CTN-1V株、aGV株或经批准的其他Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。
2.2.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代雌鼠应不超过35代；aGV株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代雌鼠应不超过15代。
2.2.3种子批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种子批至少进行2.2.3.1～2.2.3.4项检定。
2.2.3.1鉴别试验
采用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。将毒种做10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒液分别与狂犬病病毒特异性免疫血清（试验组）和阴性血清（对照组）等量混合，试验组与对照组的每个稀释度分别接种11～13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。中和指数应不低于500。
2.2.3.2病毒滴定
将毒种做10倍系列稀释，每个稀释度脑内接种体重为11～13g小鼠至少6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。病毒滴定度应不低于7.5lgLD50/ml。
2.2.3.3无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
2.2.3.4支原体检查
依法检查（通则3301），应符合规定。
2.2.3.5外源病毒因子检查
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依法检查（通则3302），应符合规定。
2.2.3.6免疫原性检查
用主种子批毒种制备疫苗，腹腔注射体重为12～14g小鼠，每只0.5ml，免疫2次，间隔7天，
考研政治大纲为试验组。未经免疫的同批小鼠为对照组。初免后的第14天，试验组和对照组分别用10倍系列稀释的CVS病毒脑腔攻击，每只注射0.03ml，每个稀释度注射10只小鼠，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。保护指数应不低于100。
2.2.4毒种保存
毒种应于-60℃以下保存。
2.3原液
2.3.1制备细胞
按2.2.2项进行。
2.3.2培养液
培养液为含适量灭能新生牛血清的MEM、199或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定（通则3604）。
2.3.3对照细胞外源因子检查
依法检查（通则3302），应符合规定。
2.3.4病毒接种和培养
细胞培养成致密单层后，将毒种按0.01～0.1MOI接种细胞（同一工作种子批毒种应按同一MOI接种），置适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用灭菌PBS或其他适宜洗液冲洗去除牛血清，加入适量维持液，置33～35℃继续培养。
2.3.5病毒收货
经培养适宜时间，收获病毒液。根据细胞生长情况，可换以维持液继续培养，进行多次病毒收获。检定合格的同一细胞批生产的同一次病毒收获液可合并为单次病毒收获液。
2.3.6单次病毒收获液检定tumblr是什么
按3.1项进行。
2.3.7单次病毒收获液保存
于2～8℃保存不超过30天。
2.3.8单次病毒收获液合并、浓缩
检定合格的同一细胞批生产的单次病毒收获液可进行合并。合并后的病毒液，经超滤或其他适宜方法浓缩至规定的蛋白质含量范围。
2.3.9病毒灭活
于浓缩后的病毒收获液中按1：4000的比例加入β-丙内酯完全水解。病毒灭活到后期，每个病毒灭活容器应理解取样，分别进行病毒灭活验证试验。
2.3.10纯化
灭活后的病毒液采用柱色谱法或其他适宜的方法进行纯化，纯化后加入适量人血白蛋白或其他适宜的稳定剂，即为原液。
2.3.11原液检定
按3.2项进行。
2.4半成品采纳
2.4.1配制
将原液按规定的同一蛋白质含量或抗原含量进行配制，且总蛋白质含量应不高于80μg/剂，加入适宜的稳定剂即为半成品。
2.4.2半成品检定
按3.3项进行。
2.5成品
2.5.1分批
英华兰魔法少儿英语应符合“生物制品分批规程”规定。
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2.5.2分装及冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3规格
按标示量复溶后每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml，狂犬病疫苗效价不低于2.5IU。
2.5.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 面试常见问题及回答检定
3.1单次病毒收获液检定
3.1.1病毒滴定
按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.0lgLD50shootout/ml。
3.1.2无菌检查
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依法检查（通则1101），应符合规定。
3.1.3支原体检查
double bass依法检查（通则3301），应符合规定。
3.2原液检定
3.2.1无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.2.2病毒灭活验证试验
取灭活后病毒液25ml接种于Vero细胞，每3cm2单层细胞接种1ml病毒液，37℃吸附60分钟后加入细胞培养液，培养液与病毒液量比例不超过1：3，每7天传1代，培养21天后收获培养液，混合后取样，脑内接种体重为11～13g小鼠20只，每只0.03ml，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过实验动物总数的20%），观察14天，应全部健存。
