RUNX1-RUNX1T1阳性儿童急性髓细胞白血病融合转录本动态监测的临床意义
陆继冉;高超;赵晓曦;李君;侯贝;李静;张瑞东;郑胡镛
【摘 要】Objective To investigate the RUNX1-RUNX1T1 transcript (fusion transcript) dynamics in pediatric acute myeloid leukemia (AML) and their correlation with patients' clinico-biological characteristics and long-term outcomes.Methods In a retrospective cohort,all patients with RUNX1-RUNX1T1-positive AML at Beijing Children's Hospital (our hospital),from October 1st,2006 to March 31st,2015 were enrolled.Patients were divided into high-expression or low-expression groups according to ＞ 104 copies,＞103 copies,＞102 copies,＞10 copies,＞1 copy and ＞0 copy per 104 copies GUS at diagnosis (time point 0,TP0) and following MRD detective time points,after Induction Ⅰ (TP1),Induction Ⅱ (TP2),and after Consolidation Ⅰ (TP3),Consolidation Ⅱ (TP4) and Consolidation Ⅲ (TP5),respectively.The follow-up deadline was December 31st,2017.Chi-square were ud to test the differences of clinical and biological characteristics between the subgroups,Kaplan-Meier method was ud to analy patients' overall survival (OS) and rel
ap free survival (RFS),and Log-rank test for comparing the difference.Cox's proportional hazards regression model was ud to analyze the independent significance for OS and RFS.Results 52 patients were enrolled and 27 of them were male,the median age was 8(2～ 14).Two patients were lost to follow up at TP1.21 patients died during the follow-up,the median follow-up time of other 29 patients were 62.2 (34 ～ 134.3) months.①There were no significant differences in age,gender,WBC,Hb,PLT count,blasts account in the bone marrow,immunophenotype except CD15 (P =0.004) and MRD of TP1～ TP5 between the high-expression patients(17/50) and low-expression patients (33/50).②Univariate analysis showed that RUNX1-RUNX1T1 transcript at TP1 and TP5 were corelated with 5 year OS and RFS,the gender and PLT count at TP0 were corelated with 5 year OS and WBC count at TP0 were corelated with 5 year RFS.Multivariate analysis showed that the RUNX1-RUNX1T1 transcript level ＞ 103 copies per 104 GUS at TP1 was the independent risk factor for poor OS of RUNX1-RUNX1T1+ pediatric AML patients,P=0.036,hazard ratio (HR) was 0.095 and the 95％ confidence interval(CI) was (0.011,0.860).Conclusion The fusion transcript level after the first induction therapy was t
udiabhe independent factor affecting long outcome in RUNX1-RUNX1T1+ pediatric AML.%目的 探讨RUNX1-RUNX1T1+急性髓细胞白血病(AML) RUNX1-RUNX1T1转录本(融合转录本)的动态变化及其对预后的指导作用.方法 回顾性队列研究,纳入2006年10月1日至2015年3月31日在首都医科大学附属北京儿童医院(我院)采用BCH-AML 05方案治疗的全部RUNX1-RUNX1T1+ AML患儿,根据初诊(time point 0,TP0)、诱导Ⅰ后(TP1)、诱导Ⅱ后(TP2)、巩固Ⅰ后(TP3)、巩固Ⅱ后(TP4)和巩固Ⅲ后(TP5)融合转录本的检测情况,相应地分为高表达组和低表达组,分组界值分别为每104 GUS中融合转录本拷贝数104、103、102、10、1和0,随访至2017年12月31日.采用x2检验比较初诊高表达组和低表达组临床和生物学特征的差异;Kaplan-Meier法分析患儿5年总生存(0S)和无复发生存(RFS),通过Log-rank检验比较组间差异,以Cox比例风险回归模型分析影响患儿5年OS和RFS的独立预后因素.结果 符合本文纳入标准的患儿52例,男27例,中位年龄8(2～14)岁;2例TP1时失访,21例在随访中死亡,其余29例中位随访时间62.2(34.0～ 134.3)个月.①初诊高表达组(17/50)和低表达组(33/50)患儿的年龄、性别、WBC、Hb、PLT计数和骨髓幼稚细胞数、除CD15(P=0.004)外的免疫学表型、TP1～TP5的MRD差异均无统计学意义.②单因素分析表明,TP1和TP5融合转录本水平与患儿的5年OS和RFS相关,性别、初诊PLT与5年OS相关,初诊WBC与5年RFS
相关.多因素分析显示,TP1时融合转录本水平＞103拷贝/104 GUS是5年OS的独立不良因素(HR=0.095,95％:CI:0.011 ～ 0.860,P=0.036).结论 RUNX1-RUNX1T1+ AML患儿第1次诱导治疗结束后融合转录本水平是患儿长期预后的独立影响因素.
英语信件格式
【期刊名称】《中国循证儿科杂志》
【年(卷),期】2018(013)002
【总页数】6页(P107-112)
【关键词】急性髓细胞白血病;儿童;RUNX1-RUNX1T1;基因表达;预后
【作 者】陆继冉;高超;赵晓曦;李君;侯贝;李静;张瑞东;郑胡镛
【作者单位】国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点
实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045;国家儿童医学中心,首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心,儿童血液病与肿瘤分子分型北京市重点实验室,儿科学国家重点学科,儿科重大疾病研究教育部重点实验室 北京,100045
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haskell【正文语种】中 文
儿童急性髓细胞白血病(AML)中近一半有染色体易位[1]，其中t(8;21)(q22;q22.1) 约占12%[2]，该易位可形成 RUNX1-RUNX1T1融合基因，多见于FAB分型中的M2型[3]。既往研究认为，AML中 RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性是预后较好的生物学标志，但由于AML存在高度异质性，该融合基因阳性患儿中仍有30%～50%复发[4]。目前已有研究采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术动态监测AML患儿 RUNX1-RUNX1T1转录本(融合转录本)水平，将其作为微小残留病(MRD)而评估治疗反应并预测预后。意大利儿童血液肿瘤协作组(AIEOP)的研究，纳入了49例采用AIEOP AML 2002/01方案治疗的 RUNX1-RUNX1T1+ AML患儿，第2次诱导治疗结束后融合转录本下降水平与累积复发率(CIR)呈负相关[5]；我国Zhang等[6]的研究纳入70例采用DAH方案或AML-99方案诱导治疗的 RUNX1-RUNX1T1+ AML患儿，第1次诱导治疗结束后融合转录本下降>1.8 log水平者预后较好。提示在不同治疗方案背景下，对预后有预测价值的融合转录本的评价时间点和标准可能存在差异。本文对首都医科大学附属北京儿童医院(我院)2006年10月至2015年3月收治的采用BCH-AML 05方案治疗的 RUNX1-RUNX1T1+ AML患儿行融合转录本水平的动态观察并分析影响预后因素。
1 方法
1.1 研究设计 回顾性队列研究。收集采用BCH-AML 05方案治疗 RUNX1-RUNX1T1+AML患儿的连续样本，对不同时间点(TP0～TP5) RUNX1-RUNX1T1融合转录本水平进行定量检测，以2017年12月31日为统一随访终点，分析预后与不同时间点融合转录本水平的相关性。
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1.2 知情同意 本研究行融合转录本水平检测及资料收集均取得患儿监护人的知情同意。
1.3 纳入标准 于2017年11月1日从我院病历查询系统中检索，2006年10月1日至2015年3月31日在我院治疗并经MICM分型确诊伴有 RUNX1-RUNX1T1+的全部AML患儿。同时收集在我院生物样本库中相应患儿骨髓样本。
汽车培训学校1.4 BCH-AML 05方案和危险度分层标准 ①低危组仅限于具有良好染色体核型的患儿，包括t(8；21)、inv16(16号染色体倒位)和t(9；11)；②高危组包括诱导Ⅰ后骨髓幼稚细胞数>20%、核型-5(5号染色体缺失)、核型-7(7号染色体缺失)、t(6；9)、MDS(骨髓增生异常综合征)转为AML、继发AML；③中危组为介于低危和高危之间，无良好核型者。
BCH-AML 05方案见图1，包括2个诱导治疗疗程(诱导Ⅰ、Ⅱ)和3个巩固治疗疗程(巩固Ⅰ、Ⅱ、
Ⅲ)。中枢神经系统白血病(CNSL)的预防采用甲氨蝶呤(MTX)、地塞米松(Dex)、阿糖胞苷(Ara-C)三联鞘注，以上每个疗程各鞘注1次。高危患儿及部分具有同胞全合供者的中危患儿，如完成巩固I并达完全缓解(CR)，行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)。
图1 AML 05方案及 RUNX1-RUNX1T1转录本检测时间点(TP0～TP5)示意图
注 ADE：阿糖胞苷+柔红霉素+依托泊苷；ACE：安丫啶+阿糖胞苷+依托泊苷；MHA：米托蒽醌+大剂量阿糖胞苷；CLASP：阿糖胞苷+左旋门冬酰胺酶；12 g、18 g是指阿糖胞苷的质量。
1.5 资料提取及分组 从病志中采集：①患儿性别、入院年龄、FAB分型等，②初诊WBC、Hb、PLT计数，③诱导Ⅰ后骨髓涂片幼稚细胞数(%)，④初诊时免疫表型(流式细胞术检测)，⑤TP0～TP5融合转录本的检测情况。根据不同时间点融合转录本的水平将患儿分为高表达组和低表达组，分组界值分别为每104 GUS中 RUNX1-RUNX1T1拷贝数104、103、102、10、1和0。
heartbeat什么意思1.6 检测方法
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1.6.1 流式细胞术检测免疫表型 采用直接免疫荧光标记法标记活细胞，B淋巴系列单抗包括CD10、CD19、CD20、CD22、cCD79及细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)等；T淋巴系列单抗包括CD2、CD3、CD5、CD7、cCD3及末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)等；髓系列单抗包括CD11b、CD13 、CD14、CD15、CD33、CD64、CD71、CD117、CD123及髓过氧化物酶(MPO)；非特异性系列单抗包括CD9、CD38、CD34及人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)。所有单抗、仪器和软件均购自美国Becton Dickinson公司。评分标准依据欧洲白血病免疫分型协作组(EGIL)的抗原积分系统[7]，当积分>2.5分或阳性细胞率>20%时，可诊断急性白血病的细胞系来源。
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1.6.2 融合转录本的定量检测 ①提取患儿骨髓标本的单个核细胞，严格按照Trizol试剂盒(Life Technology公司，美国)说明书提取总RNA。采用紫外分光光度计测定吸光度(A)值，A260/280值1.8～2.0为合格的样本，RNA浓度(μg·μL-1)=(A260×40×稀释倍数/1000)。采用随机逆转录引物(Invitrogen公司，美国)，将2 μg RNA逆转录为cDNA，冻存于-20℃冰箱。②每个样本取80 ng cDNA，采用RQ-PCR技术(ABI Prism 7500型荧光定量PCR仪，美国Applied Biosystems公司)定量检测融合转录本水平。反应条件为50℃ 2 min，95℃ 10 min，95℃ 15 s，60℃ 1 min，共50个循环。以β葡萄糖苷酸酶(GUS)基因表达量为内参，
对 RUNX1-RUNX1T1表达水平进行标准化处理。每例标本的 RUNX1-RUNX1T1和GUS均重复检测3次后取均值。检测结果以每104 GUS中含有的 RUNX1-RUNX1T1的拷贝数来表示(104 GUS)。 RUNX1-RUNX1T1和GUS的引物和探针序列参照文献[8, 9]。.
