TAE与TBE的区别及在凝胶电泳的应用

更新时间:2023-06-24 03:57:15 阅读: 评论:0

TAE是Tris-乙酸,缓冲容量小,但是溶解度大,易于储存
TBE是Tris-硼酸,缓冲容量大,但是溶解度小,不易长期储存,易产生沉淀
TAE与TBE的区别
首先要知道 TAE 与 TBE 缓冲溶液的成份如下:干杯的英文
50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)
242 gm      Tris ba
can can
57.1 ml    Acetic acid  100ml
0.5M EDTA
Add ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.
10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)
108 gm    Tris ba
55 gm    Boric acid
9.3 gm    Na4EDTA
Add ddH2O to 1 liter.
The pH is 8.3 and requires no adjustment.
它们的分别有下列几点:
1. TBE 不能太浓 (它只可有 10 times),因为 borate 会很容易沉淀,但一般有少许沉淀是不会有太大问题。
2. TBE 的 buffering capacity 比 TAE 高,用 TBE 来跑出来的 gel,分辨率 (resolution) 会比较高。
3. 因为 TBE 有 borate 离子 (ion),它会影向酵素 (enzyme) 的工作。因此,若要为分离出的 DNA 进行下一步酵素处理,如 cloning 或 restriction cut 的话,就要切记不要让DNA 碰上 borate ion。
4. TAE的 buffer capacity 比较差,gel 一般比较模糊,但它不会对影向酵素
三种缓冲液的配制方法
Tris-乙酸(TAE):50×浓贮存液(每升):
242g Tris 碱
57.1ml 冰乙酸
old women100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸(TPE):10×浓贮存液(每升):
108g Tris 碱
15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml)
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸(TBE):5×浓贮存液(每升):
54g Tris 碱
27.5g 硼酸
20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
默认分类 2007-10-05 20:29:30 阅读11 评论0字号:大中小订阅
电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,使溶液两极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。
股份支付
TPE的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
[转载]实验室常用技术参数资料
记事本_我看世界 2007-10-18 15:47:27 阅读13 评论0字号:大中小订阅[转载]实验室常用技术参数资料(一)
2007-10-16 15:12
一、核酸及蛋白质常用数据1.核苷三磷酸的物理常数
2.常用核酸的长度与分子量
3.常用核酸蛋白换算数据
(1)重量换算
1μg=10-6g  1pg=10-12g
1ng=10-9g  1fg=10-15g
燕麦灵(2)分光光度换算:
1A260双链DNA=50μg/ml
使皮肤美白的方法
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
(3)DNA摩尔换算:
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端奥斯卡 皮斯托瑞斯
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA(钠盐)=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA(钠盐)=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA(钠盐)=3.4×105道尔顿
(4)蛋白摩尔换算:
100pmol分子量100,000蛋白质=10μg
100pmol分子量50,000蛋白质=5μg
100pmol分子量10,000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
(5)蛋白质/DNA换算:
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10,000MW蛋白质=270bp DNA
铍青铜英文30,000MW蛋白质=810bp DNA
50,000MW蛋白质=1.35kb
100,000MW蛋白质=2.7kb DNA
4.常用蛋白质分子量标准参照物
混蛋的英文5.常用DNA分子量标准参照物
panther续上表

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标签:电泳   缓冲液   缓冲   分子   沉淀   质量
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