第一章 绪论
法医物证学:法医物证学是应用多种学科的理论知识和技术研究并解决涉及法
律方面有关生物性检材的检验与鉴定的一门学科。应用的学科包括:医学、生物
学、遗传学、免疫学、血型血清学、生物化学及分子生物学等。
法医物证学:是以法医物证为研究对象,以提供科学证据为目的,研究应用生
命科学技术解决案件中与人体有关的生物检材鉴定的一门学科。法医物证学是法
医学的分支学科,其研究内容属于法医学中的物证检验部分,是法医学研究的主
要内容之一。
法医物证是一门应用科学,研究的方法涉及多种学科包括:①化学,②物理学,
③电子计算机,④形态学,⑤免疫血清学,⑥生物化学,⑦分子生物学,⑧遗传
学等方法。
法医物证的特点:①法医物证的稳定性受环境条件的影响;②法医物证属于
“科学证据”。
第二章 法医物证分析的遗传学基础
1、 何谓遗传标记
个体的单位遗传性状作为标志用于法医物证分析时,这种遗传性状就成为遗传标
记GM。
2、 何谓基因、基因型和表型
1) 基因型:是指个体一个或多个基因座上等位基因的组合,是生物体可见性
状的实际基因组成。
2) 表型:是指生物体某特定基因所表现的性状。表型由基因型决定。
3、 Hardy-Weinberg平衡定律的前提条件和意义
1) 前提条件:体无限大、随机婚配、没有突变、没有大规模的迁移和没有选择
因素的影响。
2) 结论:体中的基因频率和基因型频率在逐代传递中保持不变。
3) 意义:
4) 反映基因频率和基因型频率的关系(纯合子基因型频率=基因频率的平方,杂
合子=该两基因频率乘积的二倍)
5) 体样本的检验
4、 非父排除概率(P23)
PE是指孩子的非亲生父亲的男子,能够被某个遗传标记系统排除的概率。
PE用于评估某一遗传标记系统在亲权鉴定案件中的实用价值。
5、 何谓个人识别概率(P22)
个人识别概率(DP)是指在体中随机抽取两个体,两者的遗传标记表型不相同
的概率。
DP是评价该遗产标记系统识别无关个体效能大小的指标,DP越高,效能越强。
第三章 DA多态性的分子基础
1、 何谓DA多态性(P37)
1) 在基因组DA中,由不同碱基结构的等位基因所形成的多态性叫做DA多
态性。
2) 按照DA遗传标记的结构特征,DA多态性可分为长度多态性和序列多态
性。
2、 何谓VTR(P37)
小卫星DA中的可变数目串联重复序列称为VTR。
3、 何谓STR
微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列,STR。
第四章 DA长度多态性
1、 RFLP
2、 Amp-FLR
3、 DA指纹图谱的基本特征
1) 遗传方式:孟德尔规律、所有片段独立遗传
2) 个体的组织同一性:稳定一致
3) 体遗传学特征:
4) 突变率:配子细胞形成时重排、重组与交换
4、 DA纹印图谱的基本特征
1) 高多态性
2) 遗传规律:共显性
3) 个体组织同一性:一致
4) 体遗传学特征:
5) 高突变率:配子细胞形成时重排、重组、交换
5、 何谓扩增片段长度多态性分析
Amp-FLR:采用PCR技术扩增VTR或STR基因座等位基因进行DA长度多态性分
析的方法。
6、 RFLP与Amp-FLP技术有何异同(P74)
7、 STR分型用于法医物证鉴定的主要优点
1) 高灵敏度:适用于微量降解检材
2) 高鉴别能力:节约检材、试剂和提高效率
3) 标准化分型:实现数字化结果,利于实验室间数据交换,建立数据库
8、 何谓miniSTRminiSTR分型有何法医学应用价值
1) miniSTR:通过重新设计引物,使其结合在更靠近核心重复区的侧翼序列,从
而降低扩增产物的大小,进一步提高灵敏度和分型成功率,这种技术称为短片
段STR分型或miniSTR分型。
2) miniSTR法医学应用价值:
➢ STR基因座的扩增片段较短,灵敏度更高,尤其适用于微量或降解生物检
材的DA分型;
➢ 等位基因片段长度范围较窄,不易发生因小等位基因的优势扩增而造成的
等位基因丢失现象;
➢ 可对多个STR基因座进行复合扩增,从而节约检材、降低成本,提高单次
检测的信息量
9、 何谓多基因座复合扩增
1) 在一个PCR体系中同时扩增多个靶基因座的方法叫做复合扩增。
2) 复合扩增可提高单次检测的信息量,提高个人识别率,也可降低成本和检
材的消耗。
10、 Y-STR有何法医学应用特点
1) Y染体为男性特有
2) Y-STR呈父系遗传特征
3) 单倍体遗传:在减数分裂过程中,Y-特异性区不发生重组,所有Y-STR基因座
均呈连锁遗传,等位基因频率不能以相乘方法计算
4) GD=PE
5) 结果不具有唯一性,不能认定
11、 Amelogenin基因(名解)
牙釉基因(AMG):位于X染体Xp22,编码牙原基质牙釉质蛋白,故命名牙釉基
因。在人Y染体中心粒附近有一类牙釉基因(AMGL),与牙釉基因的碱基序列有
90%同源性。用一对特异性引物可同时扩增AMG和AMGL序列片段,X特异性片段长
度为977bp,Y为788bp。扩增后,男性可获得两条带,女性只观察到一条带。
但是其扩增产物较长,不适合腐败血痕、过于陈旧血痕的性别鉴定。
第五章 STR自动分型
1、 简述STR自动分型技术的主要步骤
1) DA自动化提取
2) PCR多荧光标记STR复合扩增
3) PCR产物电泳前处理
4) 自动毛细管电泳结合激光诱导的荧光检测
5) 自动数据采集并分型
2、 何谓off-ladder
1) 在STR分型图谱中,常会遇到部分样本的少量片段峰未被程序化数字命名,
在分型图谱中被标识为off-ladder
2) 漂移作用和新等位基因都可标识为off-ladder
3、 何谓LC
LC:基因组含量小于100pg的样本称为低拷贝DA(low copy number)。
第六章 DA序列多态性
DA多态性(DA polymorphisms):基因水平上的多样性来自基因的突变,
当基因突变以等位基因形式在体中得以保留,并能够从亲代遗传给子代,可形
成个体间的遗传差异。不同个体间的遗传差异形式是不同的等位基因组成。等位
基因之间的差异可以是点突变引起的序列不同,也可以是因为碱基的插入或缺失
引起的片段长度不同,都能构成具有个体特征的DA遗传标记。DA遗传标记可
以出现在编码区,也可以存在于非编码区。在基因组DA中,这种由不同碱基结
构的等位基因所形成的多态性叫做DA多态性。
DA长度多态性(DA length polymorphisms):是指同一基因座上各等位基
因之间的DA片段长度差异构成的多态性。DA长度多态性靶序列主要是指可变数
目串联重复序列(VTR),VTR既存在于小卫星DA中,也存在于微卫星DA中。
由于命名习惯和为了便于区分,通常小卫星DA中的可变数目串联重复序列称为
VTR,而把微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列(STR)。
DA序列多态性(sequence polymorphisms):是指一个基因座上,因不同个
体DA序列有一个或多个碱基的差异而构成的多态性。可以理解为该基因座上所
有等位基因DA长度相同,但是它们之间的序列存在差异。在基因组DA中,无
论是编码区或者非编码区,单碱基替换是最基础的突变形式。在人类基因组范围
内,如果任何单碱基突变使特定核苷酸位置上出现两种碱基,其中最少的一种在
体中的频率不少于1%,就形成单核苷酸多态性(single nucleotide
polymorphisms,SPs)。
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,
RFLP):RFLP分析是一种传统的分子生物学检测技术,广泛应用于突变分析、基因
诊断、基因定位等各个方面。法医物证鉴定应用RFLP技术主要是对人类基因组中
的VTR基因座进行分型,其技术核心是DA分子杂交,决定RFLP分析图谱个体
特异性的因素是限制性核酸内切酶的特异性和探针的特异性。检测所用的探针多
是由人类基因组DA中筛选出的小卫星序列,选择特异性不同的探针,在不同的
杂交条件下,可以只检出单个VTR基因座,也可同时检出多个VTR基因座,前
者称为DA纹印,后者称之为DA指纹,检测所用的相应探针分别被称为单基因
探针(single-locus probe)和多基因探针(multi-locus probe)。
Southern印迹杂交:是进行基因组DA特定序列定位的通用方法。一般利用
琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DA片段,将胶上的DA变性并在原
位将单链DA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固
定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显,从而检
测特定DA分子的含量。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定
的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸
分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的
结果,便可绘制出DA分子的限制图谱。Southern印迹杂交(Southern blot)是
研究DA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DA图谱分析及PCR产物分析等方面有
重要价值。Southern印迹杂交的基本方法是将DA标本用限制性内切酶消化后,
经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段,然后经碱变性,Tris缓冲液中和和高盐下通
过毛吸作用将DA从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。
凝胶中DA片段的相对位置在DA片段转移到滤膜的过程中继续保持着,附着在
滤膜上的DA与32P标记的探针杂交,利用放射自显影术确立探针互补的每一条
DA带的位置,从而可以确定在众多消化产物中含某一特定序列的DA片段的位置
和大小。(琼脂糖凝胶电泳→硝酸纤维素膜吸印)。
限制性内切酶常见的有那些
限制性内切酶(restriction endonuclease):一种在特殊核甘酸序列处水解
双链DA的内切酶。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DA的甲基化,又催化非甲
基化的DA的水解;而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DA的水解。
合成引物的要点,PCR的反应组成:
标准的PCR反应体系
10×扩增缓冲液 10μl
4种dTP混合物 200μl
引物 10~100μl
模板DA ~2μg
Taq DA聚合酶 μl
Mg2+ L
加双或三蒸水 100 μl
PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:① 模板DA,②寡核苷酸
引物,③dTP,④反应缓冲液,⑤TaqDA聚合酶。
PCR基本原理:
PCR技术是模拟生物体内DA的半保留复制,在体外合成DA链的方法,在模
板、DA、引物、dTP、Taq酶存在的条件下经过:“高温变性→低温退火→中温延
伸”三步循环,获得大量扩增片段。
合成引物的要点:
引物合成是通过测定引物的OD值,溶解引物,最终合成引物的一个完善的过
程。目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DA片段,
具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DA
固定在固相载体上完成DA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向
5′端合成的,相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。
第一步,是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯
乙酸反应,脱去其5′-羟基的保护基团DMT,获得游离的5′-羟基。
第二步,合成DA的原料,亚磷酰胺保护核苷酸单体,与活化剂四氮唑混合,
得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3′端被活化,5′-羟基仍然被DMT保护,与溶
液中游离的5′-羟基发生缩合反应。
第三步,带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5′-羟基没有参加反
应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在
纯化时分离掉。
第四步,在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。
经过以上四个步骤,一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三
脱去它的5′-羟基上的保护基团DMT,重复以上步骤,直到所有要求合成
的碱基被接上去。
常染体STR与性染体STR有什么不同
常染体STR:短串联重复序列(STR)是广泛存在于人类基因组中的一类具有
长度多态性的DA序列。它由2~6 个碱基对构成核心序列,呈串联重复排列,其长
度多态性主要由核心序列拷贝数目的变化而产生。一般认为,人类基因组平均每
6~10kb就有1个STR基因座,为法医个人识别和亲子鉴定提供了高信息基因座的
丰富来源。与限制性片段长度多态性产生的DA 指纹相比,用聚合酶链反应技术
(PCR)扩增STR 基因座产生的DA纹印具有更高的灵敏度。STR扩增片段较短
(100~300bp),对于常见含部分降解 DA的陈旧斑痕,PCR扩增STR比DA指纹分
析更容易成功。
性染体STR:人类Y染体属于近端着丝粒染体,由长臂Yq和微小的短
臂Yp组成,DA长度约60Mb。Y-DA中大致有五类多态性遗传标记:卫星DA、
小卫星DA、微卫星DA、插入或缺失及SP。Y染体STR基因座(Y-STR)是其
中一种重要的遗传标记。与常染体STR基因座相比,大多数Y-STR基因座具有
复杂的串联重复结构:一个基因座内常含有两种以上不同的重复单位,恒定重复
序列和可变重复序列同时存在。与常染体STR基因座比较,Y-STR分型的法医学
应用具有以下特点:①Y染体为男性所特有,②Y-STR呈父系遗传特征,只能有
父亲传递给儿子,③在减数分裂过程中,Y-特异性区不发生重组,④评估Y-STR
鉴别能力的指标是遗传差异度,⑤和mtDA一样,Y-STR分型结果不具有唯一性,
其法医学应用价值在于排除,而不能认定。X-STR基因座具有伴性遗传的特征,
X-STR的遗传特征既不同于常染体,也不同于Y染体,表现为性连锁特征。进
行分型检测时,男性个体X-STR显现一条片段,女性杂合子则显示两条等位基因
片段。
低拷贝DA(low copy number,LC):是指基因组含量小于100pg的样本。
PCR循环测序的基本原理:PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DA,应用PCR
技术测定DA序列分为两个步骤:先利用PCR扩增靶序列片段,制备测序模板,
然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DA的特性并结合
双脱氧核苷酸终止法,使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加,
因此称为循环测序。每个测序循环包括:①PCR扩增制备的模板DA变性成单链形
式;②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;③退火后的引物在耐热DA
聚合酶催化下发生链延伸终止反应。本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的
双链的产物,在下一轮测序循环中,再次被变性,释放出模板链,作为又一轮引
发反应的模板,同时积累下一轮循环产生的链终止产物。上述循环步骤重复20~40
次,使链终止产物以线性方式获得扩增。
DA自动测序技术:DA自动测序技术是以4种荧光染料基团分别作为4种
ddTP终止链的标记物,于20世纪80年代末期建立的一种高效、快速、自动化的
序列测定技术。4种荧光染料分别作为测序反应中4种ddTP终止链的标记物,即
4种被双脱氧核苷酸终止的DA片段分别带上4种不同的颜。这些DA片段的混
合物同时加在一个样品槽中电泳展开,相互间仅差1个碱基的DA片段形成一条
具有4种颜的阶梯分布图像。阶梯中的每- DA片段由标记在该片段上的特征性
荧光基团发出的荧光所指示。
荧光染料基团作为标记物的基本要求是经过激光诱发的吸收光谱波长在可见
光波长范围内,不影响延伸反应,不影响标记后DA片段的电泳性质。其次要求4
种荧光的吸收和激发光波长要有足够的差异,便于检测。荧光染料的掺入的方式
有两种:一种是将荧光染料预先标记在测序反应通用引物的5’端。4种荧光标记
形成4种标记引物,测序反应分4个反应管进行,特定的荧光染料与相应的ddTP
是对应关系,例如荧光示踪染料JOE标记的通用引物总是与ddATP加在同一个反
应管内,因此由ddATP终止的所有延伸链都带有JOE。这种方式被称为
Dye-Primers。另一种是将荧光染料基团连在ddTP上,4种荧光染料分别与4种
ddTP底物连接,反应产生的4组DA片段分别由特定ddTP所终止,并且标记有
4种不同的荧光发基团,A、C、G和T分别携带有绿、红、蓝、黄4种荧光。这
种方式被称为Dye-Terminators。两种方式各有特点,不过前者要求A,G,C,T
分4个反应进行,而后者的4组反应可以在同一管中完成。上述两种方法都能确
定4种荧光与4种ddTP所终止的DA片段之间的对应关系,这是后来从电泳中
检测标记物信号以及最终读序的基础。
自动测序仪器无论是变性PAG平板凝胶电泳还是毛细管电泳,都配置有激光
束激发系统和荧光信号收集检测系统。当DA片段电泳通过检测窗口时,在激光
束的激发下,片段的电泳时间和被激发荧光的波长、强度等信号都被记录,由计
算机自动作数据处理,最后在屏幕上显示每一样品的各终止片段电泳分离的模拟
图像。不同颜的峰标示各自标记的碱基及其排列顺序(如图所示):
MVP(minisatellite variant repeat)序列:称为具有变异核心序列的小卫星
DA,是一类既有长度多态性又有序列差异的DA重复序列。
第七章 线粒体DA多态性
1、 人类核DA与mtDA的比较(P179)
2、 mtDA的特点
1) 唯一的核外DA来源
2) 拷贝数多和异质性(当两种不同的mtDA序列存在同一个细胞、组织或者
个体时称之为异质性)
3) 母系遗传
4) 抗外切酶的环状结构有助于分子稳定性,对高度降解检材奏效
5) 瓶颈效应和复制分离
6) 阈值效应
3、 mtDA分型的优点
1) 高变区作为遗传标记用于法医鉴定,高变区又称D-环区
2) 当细胞核DA量不足而无法进行分型时,线粒体DA技术分析是唯一可以
利用的技术
3) 生物检材中的毛发、骨干、牙齿和其他严重降解的检材也依赖线粒体DN
A分析
4) 简单易操作、检材灵敏度高
5) 所需模板DA减少
6) 减少DA二级结构干扰
4、 mtDA分型的主要方法
1) mtDA提取(抽提)
2) PCR
3) 纯化PCR产物
4) 循环测序反应原理ddTP→core,only 1 primer
5、 mtDA分型的特殊问题
1) mtDA属于母系遗传,凡属同一母系的后代,mtDA序列都是相同的。序列一
致只能说明不排除同一个体的可能;
2) mtDA能够提供的信息量有限(单倍型)→排除同一性(真正价值)
3) mtDA的异质性违背同一个体mtDA序列必然是一致的前提条件,给个体识别
鉴定增加了变数;(如果多份检材异质性出现在同一位置的同一碱基贬义,反
而对认定同一个体检材有利)
6、 mtDA分型的法医学应用局限性
1) 分型技术要求高,耗时耗力耗钱
2) 识别力相对较低:非个体唯一,共有单倍体(母系遗传)
3) 异质性
4) 数据库规模:易高估其识别能力
5) 无法进行混合斑的检测
第八章 红细胞血型
1、 何谓ABO血型的正反定型
1) 正定性试验:根据RBC与特异性抗体的反应来分型,即用抗A抗体判定A
抗原,用抗B抗体判定B抗原。
2) 反定型试验:依据血清中的凝集素与标准型RBC膜上的凝集原反应的性质,
即用标准的A型RBC判定抗A抗体,用标准的B型RBC判定抗B抗体,同
时也应用抗H抗体判定H抗原。
2、 试述ABO血型的DA分型方法
1) PCR-SSP序列特异性引物PCR技术:特异性强、重复性好 2)PCR-RFLP
3、 中和试验的基本原理
1) 不完全Ab
2) 遮断作用
3) 判断不完全Ab是否与Ag凝集
4、 Oh型血清学特点
1) 在RBC上及唾液中均无ABH抗原,即不被抗A、抗B及抗H所凝集
2) 血清中有抗A、抗B及抗H凝集素,可分别凝集A、B、O型RBC
第九章 白细胞血型
1、 HLA抗原的分布
1) HLA-I类抗原:分布广发,几乎存在于所有的有核细胞表面,以淋巴细胞
上的密度最高。
2) 成熟RBC上没有HLA-A、B、和DR抗原,幼稚RBC却有。
3) HLA-II类抗原:密度最高者为DC、单核细胞,一些吞噬细胞亚及B细胞;
4) II类抗原作为一种分化抗原在不同细胞上表达,大多数骨髓分化细胞具有
HLA-II类抗原。
2、 HLA命名原则
1) 以大写字母A、D、C....表示HLA遗传区域中的座位
2) HLA抗原特异性用数字表示
3) 为防止与补体组分命名相混淆,HLA-C抗原特异性以Cw为字首命名
4) HLA基因命名一般以4位数字表示,其中前2位数字表示对应最相近的HLA
抗原特异性,后2位数字则用于表示亚型的等位基因,如A*0101
5) 如果出现第五位数字,则代表“沉默取代”,即该基因虽发生了个别碱基的
替换,但新密码子与原密码子属简并密码,不影响所编码的氨基酸序列
6) 第6、7位数字代表相应的启动子序列的多态性
7) 末尾加英文字母表示无效基因或不表达基因
8) 在不能区分等位基因时,可允许最前面的2位或4位数字表示该HLA的特
异性
3、 HLA遗传特征
1) 共显性遗传:每个HLA基因座表达一对抗原,人类HLA每个基因座上有众
多等位基因。故如果血清学方法分型时,个体只检测出了一个抗原则有三
种可能:该抗原的纯合子、HLA血清板不完全、存在一种至今尚未发现的抗
原。
2) 单倍型遗传:单倍体是指一条染体上HLA各基因座的基因紧密连锁组成
的基因遗传单位。
3) 连锁不平衡:HLA在实际体调查发现,各基因座的基因并非完全随机组成
单倍型,有些单倍型观察频率高于期望频率或低于期望频率,这种现象称
为连锁不平衡。处于连锁部平衡状态说明HLA不同基因座的基因之间存在
关联,具有一同遗传的趋向。
4) HLA高多态性
4、 微量淋巴细胞毒性试验原理(血清学分型)
1) 微量淋巴细胞毒性试验或称补体依赖的细胞毒性试验,其分型原理为
2) Ag-Ab-C:淋巴细胞膜上的HLA抗原与已知HLA血清中相应抗体结合后,形成
抗原抗体复合物,再结合补体。
3) C激活、破坏Lc:被激活的补体系统产生细胞毒性,攻击淋巴细胞,淋巴细胞
膜破坏。
4) 死细胞着:经过染,染料进入破损细胞内着,为阳性结果。
5) 计数:在倒置相差显微镜下观察,计数着细胞所占细胞数目的百分比。
5、 HLA抗血清与交叉反应
成功的关键是HLA抗血清的质量
根据与抗原决定镞的反应,可把HLA抗体分为2组:
1) 抗体仅与一种HLA基因产物反应
2) 抗体能与不止一种HLA基因产物结合
6、 斑点杂交(PCR-SSO分型方法)
将PCR扩增片段制成斑点,用等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO)杂交,通过探
针放射自显影结果进行HLA分型。反向斑点杂交(RDB):把探针预先固定在膜上,
标记PCR引物。
7、 比较HLA血清学分型和DA分型方法的可靠性
HLA个体遗传差异的本质不是在于血清学方法所检测的抗原,而是在编码基因产物
的DA分子上。
DA分型优于血清学方法在于:
1) 试剂由化学合成,便于标准化和实验室间相互比较结果
2) 对检材要求不高(血清学方法因需要活细胞而难以用于斑痕HLA分型)
3) 血清学与DA分型不完全相同的分型误差得以解决
血清学方法发生的错误主要集中在:
1) 交叉反应抗原
2) 能否正确指定属于A9和A19的亚型,这些抗原多在交叉组内或是宽特异性
抗原的裂解产物
3) 未能检出WHO命名的全部基因
4) 纯合子细胞中存在假阳性反应
5) HLA-C大量“空白”基因,没有相应的抗血清检测它们的产物(DA分型技
术促进和改善了对HLA多态性的分辨率)
8、 HLA在法医学上的意义
1) 高度多态性
2) 出生时已完全发育,终身不变
For 同一认定、个人识别
第十章 血清型
1、 等电聚焦技术for 亚型
2、 Hp分型原理、方法及法医学应用评价
➢ Hp:结合珠蛋白,血清中,能与Hb结合使Hb过氧化物酶样活性显着↑的糖蛋
白
➢ 分型:HP1-1、Hp2-1及Hp2-2
➢ 遗传变异,Hp0(无结合珠蛋白血症):→不能用于流产胚胎或<4mon的新生
儿的亲子鉴定。
➢ 原因:
1)溶血性贫血,特发性贫血,白血病,尿毒症等,患者的血浆Hp含量明显下
降;
2)严重肝脏疾病如急性肝炎、肝硬化,Hp合成障碍;
3)胎儿及部分新生儿(4个月后大部分能检出);
4)少数正常个体(注意假阴性)。
➢ 分型原理:
1) 型别分离:PAG圆盘电泳:利用PAG的分子筛作用和电场作用,在柱状凝胶
中分离不同型别的Hp蛋白。Hp-Hb,Hb过氧化物酶样活性使联苯胺→氧化
为联苯胺蓝→显;(just for新鲜血清中Hp型别)
2) Hp亚型等电聚焦电泳分型
3) DA分型:利用基因特异性探针进行杂交分型、PCR扩增
3、 Gc分型原理、方法及法医学应用评价
Gc:维生素D结合蛋白DPB,也成型特异性成分,电泳属a2球蛋白,主要生物学
功能是结合和转运维生素D
分型原理:
1) 免疫电泳
2) PAG圆盘电泳
3) 等电聚焦技术
4) DA分型
Gc法医学应用评价
1) 个人识别率为
2) 非父排除率为%
3) 室温保存4个月的血痕可检出Gc型
4) 4℃条件下保存6个月的尿液可检出Gc型
5) 在血痕检测中,优于Hp
4、 试述免疫球蛋白同种异型分型原理、方法及法医学应用评价
同种异型:是指免疫球蛋白上具有表达个体差异的抗原决定簇,由编码免疫球蛋
白多肽链基因的等位基因所表达产生,表现为同一种属不同个体的免疫球蛋白抗
原性不同,具有遗传多态性。
人类免疫球蛋白同种异型的命名是根据抗原决定簇位于重链或是轻链。
分型方法:
1) 血凝抑制试验
2) 酶联免疫试验
3) 胶体金免疫层析技术
4) PCR扩增
法医学应用评价:
1) Gm及Km系统DP及PE均高于已知的RBC血型、RBC酶型及其他血清型
2) Gm及Km抗原在常温下或碱性环境中颇为稳定,溶血对抗原性无大影响
5、 等位基因排斥现象:免疫球蛋白同种异型的遗传,在重链或轻链的同一位置上
氨基酸不相同的同种异型是由常染体共显性基因遗传的。但基因的表达具有
等位基因排斥现象。虽然杂合子的两个等位基因同时表达,但任何一个免疫球
蛋白分子只有一个同种异型。因为一个B细胞只能表达一种等位基因,称为等
位基因排斥现象。
6、 Gm系统:免疫球蛋白同种异型两个相互独立的连锁基因的其中重链标记,
决定IgG同种异型。
第十一章 酶型
1、 同工酶的分型方法
1) 同工酶的多态性采用凝胶电泳方法进行分型
➢ 区带电泳:利用酶蛋白分子的大小和所携带电荷数量(酶蛋白的电荷密度的差
异)→Rf
➢ 等电聚焦技术:根据酶蛋白分子的等电点不同,在pH梯度介质中,酶蛋白分
子聚焦在相应的等电点pH位置上,形成狭窄而清晰的区带
2) 凝胶介质上酶区带的显现及鉴定
➢ 直接底物显法:常用于测定水解酶,无底物被酶催化反应转变成有
产物
➢ 荧光染法:酶催化下,非荧光底物生成高度荧光的产物或使荧光底物转
化成非荧光产物(负荧光染)
➢ 电子转移染料染:酶催化下,同时AD+或ADP+还原成ADH或ADPH,
同时提供电子。染料还原成暗蓝紫的不溶性甲月替。
2、 PGM1分型原理、方法及法医学应用评价
PGM:磷酸葡萄糖变位酶(Mg2+→(+),Zn2+→(-))
PGM1同工酶活性很高,广泛存在于人体和动物体内各种组织中,esp心、肝。
分型:
➢ 淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳,的缓冲系统:从(-)→(+),谱带顺序为
a、b、c、d(PGM1基因产物,具有个体差异)、e、f、g(PGM2基因座产物,
多态性较低)。PGM1-1=ac,PGM12-1=abcd,PGM1=ac,PGM2=bd
➢ 亚型使用PAG等电聚焦技术
➢ DA-RFLP分型:在PGM1的exon4和exon8中多态性碱基均涉及限制性内切酶
识别序列的改变
检出时限:
➢ 室温保存的血痕样品4-6w内可以准确分型
➢ 条件较好、保存得当:3-4mon
➢ 低温保存:更长时间
➢ 陈旧血痕:可能在d带区域出现一条扩散的谱带,干扰正常判型
3、 EsD分型原理、方法及法医学应用评价
EsD:酯酶D,存在于RBC和组织中的水解酶
EsD表型:3种表型,EsD1-1=12,EsD2-2=23,EsD2-1=123(其中1带活性最高)
分型方法:
淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳法:分辨率较好、方法简便、较常用
➢ 醋酸纤维素膜电泳法
➢ PAG等电聚焦法
检出时限:室温3-4mon,低温;组织检材EsD分型的检出时限较血痕短。
4、 EAP分型原理、方法及法医学应用评价
1) EAP:红细胞酸性磷酸酶,酶活性以前列腺最好,RBC次之。
2) 分型:
➢ 淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳
➢ 醋酸纤维素膜电泳
➢ PAG等电聚焦电泳
3) 检出时限:室温9w
4) 早孕绒毛组织EAP表型能代表胎儿表型,可用于妊娠早期的亲自鉴定
5、 作为个人识别和亲自鉴定的同工酶的条件:
1) 酶型多态性程度高,鉴别能力及PE高
2) 酶的催化活性易于测定
3) 酶活性高而稳定,不易受干燥和其他理化因素影响
4) 电泳检测操作简便,结果重复性好
5) 除血液外,在其他人体组织及细胞也可检出相同的型别
第十二章 亲子鉴定
1、 何谓PE
PE:非父排除概率,是指不是小孩生父的男子(简称非父)能被遗传标记排除的
概率。
是衡量遗传标记系统在亲子鉴定中实用价值大小的指标。不同遗传标记有不同PE
值。
2、 试述父权指数与父权相对机会
1) 父权指数:是亲子关系鉴定中判断遗传证据强度的指标,它是判断亲子关
系所需要的两个条件概率的似然比,即具有AF遗传表型的男子是孩子生物
学父的概率(X)与随机男子是孩子生物学父亲的概率(Y)的比值,PI=X/Y。
2) 父权相对机会:是两个条件概率的比值,它的一个条件概率可以按Bayes
定理换算成为另外一个条件概率,从而引出另一个参数,称之为父权相对
机会(RCP)或父权概率(W=PI/(PI+1)),
3、 何谓排除父权的标准
1) 否定父权不仅需要考虑遗传标记在两代人之间是否符合遗传规律
2) 也要考虑遗传标记在亲子鉴定中的系统效能(DP)
➢ 遗传标记数↑,CPE↑,鉴定能力↑;由于是的遗传标记↑,遇到遗传
变异的可能性↑;
➢ P285为了避免潜在遗传变异的影响,排除父权至少应根据两个以上遗
传标记。
4、 何谓认定父权的标准
1) 父权指数:
2) 父权相对机会:
3) 实验用遗传标记累计排除概率大于等于.
4) CPI>10^4
第十三章 法医物证检材的
提取、包装和送检
1、 怎么提取、包装和保存血痕
(一) 提取:较小整件、较大刮拭;少量转移、注意干燥;泥土避震、凶器整取。
禁止裸触、标记录好。
当血痕附着在……
1) 较小的物品或易于移动、包装、运输、送检的物品上——整体采取
1、 可剪切或易于拆卸的大件物品上——血痕部位+周边无血痕部位的一部分56℃
just note 2 points we should be aware of ,i think)
➢ 遗传标记的多态性程度越高,DP越高
➢ 提高DP可以通过增加检测的遗传标记数目来实现
2、 怎么评估遗产标记对于具体个案的鉴别能力
1) 匹配概率
2) 似然率
3、 试述匹配概率的意义
概念:一个随机个体碰巧与作为证据的检材表型匹配的可能性
用途:遗传标记的个案应用
数值意义:Pr↓,→0,说明随机个体碰巧匹配的可能性小,作为证据的检材与嫌
疑人的表型匹配非常不像是一个随机事件,因此支持这两个样本来自同一个人的
假设,也就是支持现场检材是嫌疑人留下的假设。
1、 普通电泳与等电聚焦电泳法有何差异两种方法各能将PGM1(磷酸葡萄糖变位
酶1)型分为多少型
扩散否、分辨率、加样量、图谱分析、适用范围
2) PAGIEF利用的是各蛋白质等电点,蛋白质在等电点时是不移动的,因此没
有扩散现象。
3) 普通凝胶电泳PGM1可检出4条谱带(从负极到正极方向顺序为a、b、c、d,
具有个体差异),为PGM1的基因产物;PGM可分为三种表现型。
4) PGM1同工酶普通型的分型多采用淀粉凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳,使用的
缓冲系统;
5) 应用ph5-7梯度范围的PAG等电聚焦技术,可将PGM1分为10种亚型。
6) PGM1亚型使用PAG 等电聚焦技术。
2、 HLA基因分型可采用哪些技术
1) 血清学分型:
2) 微量淋巴细胞毒试验(for HLA-A、B、C、DR和DQ基因座的Ag):染(+)
3) HLA抗血清与交叉反应
4) 细胞学分型:淋巴细胞培养试验(for HLA-D和DP基因座的抗原)
5) DA分型:检测HLA所有等位基因分型。
本文发布于:2023-05-26 17:22:59,感谢您对本站的认可!
本文链接:https://www.wtabcd.cn/falv/fa/82/117386.html
版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系,我们将在24小时内删除。
留言与评论(共有 0 条评论) |