一种亚胺培南杂质B的制备方法与流程
一种亚胺培南杂质b的制备方法
技术领域
1.本发明属于医药合成领域，具体涉及一种亚胺培南杂质b的制备方法。
背景技术：
2.亚胺培南(imipenem)属于碳青霉烯类(penems)抗生素，对革兰阳性、阴性需氧、厌氧菌具有抗菌作用。由于其具有β-内酰胺结构和较多的活性基团，因此，在制备、储存和使用中通过氧化和水解极易产生杂质。欧洲药典9.0中收录了两个亚胺培南杂质，一个为相对保留时间0.8的杂质a，另一个为相对保留时间0.35的一对差向异构体杂质b。据查证，杂质b存在两种结构方式，杂质b的两种异构体互转且结构不稳定，难以获得纯度较高的固体，所以无杂质对照品出售。杂质b的两种异构体结构如式i-1、i-2所示：
[0003][0004]
pascale taibi等人曾报道将0.5mg亚胺培南用0.05m硫酸1.0ml降解1h，用氢氧化钡中和至7.0，滤掉沉淀物，过25*1.0cm c18反相柱，得到两种异构体含量1:1的杂质b。该法降解时间长，所用制备柱较小，需长时间富集合格产品，难以保证杂质b在溶液状态的稳定性，且酸解溶液中亚胺培南杂质b浓度低，后续制备难度加大。
技术实现要素：
[0005]
针对以上问题，为了获得纯度较高的杂质b固体，以满足结构鉴定及工作对照品的要求。本发明提供一种亚胺培南杂质b的制备方法。
[0006]
一种亚胺培南杂质b的制备方法，包括以下步骤：
[0007]
1)将亚胺培南加入水中得亚胺培南悬浮液，逐滴加入浓硫酸并不断搅拌，溶液澄清后，用碱溶液调节ph至中性，加水稀释得亚胺培南杂质b粗品溶液；
[0008]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分流出液；
[0009]
3)将目标成分流出液冻干得亚胺培南杂质b纯品；
[0010]
[0011]
优选地，步骤1)中所述亚胺培南悬浮液中亚胺培南与水的质量体积比为1：40～60，其中，质量以g计，体积以ml计。
[0012]
进一步优选地，步骤1)中所述亚胺培南与所述浓硫酸的质量体积比为1:0.8～1.2，其中，质量以g计，体积以ml计。
[0013]
优选地，步骤1)中所述碱溶液选自氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液中的一种。
[0014]
优选地，步骤1)中所述碱溶液的浓度为0.5～5mol/l。
[0015]
优选地，步骤2)中所述梯度洗脱的流动相a为纯化水、流动相b为乙腈。
[0016]
优选地，步骤2)中梯度洗脱使用的谱柱为汉邦dac-50动态轴向压缩柱系统，制备柱材质为316l型不锈钢。
[0017]
优选地，步骤2)中梯度洗脱使用的谱柱中填料及规格为sepax hp c18 10μm [0018]
优选地，步骤2)中梯度洗脱谱柱的柱温为室温。
[0019]
优选地，步骤2)中梯度洗脱检测波长为210nm。
[0020]
优选地，步骤2)中梯度洗脱流速为50ml/min。
[0021]
优选地，步骤2)中所述梯度洗脱按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为0％～2％；7分钟时，流动相b体积比增加到2％～4％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％～15％增加至20～25％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50％～55％；前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在0～2％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环。
[0022]
优选地，步骤2)中所述梯度洗脱按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为3％～4％；7分钟时，流动相b体积比增加到5％～6％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％～15％增加至20％～25％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50％～55％；前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在3％～4％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环。
[0023]
进一步优选地，步骤2)中所述梯度洗脱按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为3％；7分钟时流动相b体积比增加到5％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％增加至20％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50；前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在3％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环。
[0024]
优选地，步骤3)中所述的冻干中冻干曲线为：
[0025][0026]
进一步优选地，步骤3)中所述的冻干中冻干曲线为：
[0027][0028]
本发明相对于现有技术取得了以下有益效果：
[0029]
(1)反应时间短、收率高，本发明将浓硫酸滴加入亚胺培南溶液至溶液澄清，反应即完成，缩短了降解时间，减少了其他杂质的含量。
[0030]
(2)制备效率高，本发明制备过程可以实现连续进样，制备花费时间短，效率高。
[0031]
(3)纯度高，本发明制备的亚胺培南杂质b的hplc纯度可高达97.6％。
附图说明
[0032]
图1实施例1中亚胺培南杂质b粗品溶液hplc图谱；
[0033]
图2实施例1中亚胺培南杂质b粗品溶液在线制备图谱；
[0034]
图3实施例1中亚胺培南杂质b纯品hplc图谱；
[0035]
图4实施例8中亚胺培南杂质b粗品溶液在线制备图谱；
[0036]
图5对比例1中亚胺培南杂质b粗品溶液hplc图谱；
[0037]
图6对比例2中亚胺培南杂质b粗品溶液在线制备图谱；
[0038]
图7对比例2中亚胺培南杂质b纯品hplc图谱；
具体实施方式
[0039]
现通过以下实施例来进一步描述本发明的有益效果，实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围，同时本领域普通技术人员根据本发明所做的显而易见的改变和修饰也包含在本发明范围之内。
[0040]
参考实施例：
[0041]
亚胺培南杂质b纯度检测hplc条件如下：
[0042]
谱柱：ymc-triart c
18
，4.6
×
150mm，3μm
[0043]
检测波长：210nm
[0044]
流速：1.0ml/min
[0045]
柱温：30℃
[0046]
流动相a：2.6mm磷酸二氢钠-7.3mm磷酸氢二钠缓冲液(磷酸调ph＝7.30):乙腈＝993:7
[0047]
流动相b：2.6mm磷酸二氢钠-7.3mm磷酸氢二钠缓冲液(磷酸调ph＝7.30):乙腈＝750:250
[0048]
hlpc分析检测的梯度洗脱为：
[0049][0050]
保留时间为2.2min、2.3min的一对目标峰对应亚胺培南杂质b的两种异构体。
[0051]
本发明实施例中使用的亚胺培南粗品纯度高于90％。
[0052]
实施例1
[0053]
1)将1g亚胺培南粗品加入50ml纯化水中得到亚胺培南混悬液，逐滴加入1ml浓硫酸并不断搅拌，待样品溶液变澄清，立刻滴加1m氢氧化钠溶液调节ph至7.0，加水稀释至100ml。稀释液经hplc检测，亚胺培南杂质b的两种差向异构体纯度分别为29.7％、38.3％，合计68.0％，hplc分析检测图谱见附图1，标号1/2的两个峰对应为亚胺培南杂质b的两种异构体。
[0054]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；
[0055]
制备纯化方法为：
[0056]
谱柱：汉邦dac-50动态轴向压缩柱系统，制备柱材质为316l型不锈钢
[0057]
填料：sepax hp c18 10μm
[0058]
柱温：室温
[0059]
检测波长：210nm
[0060]
流速：50ml/min
[0061]
流动相a：纯化水
[0062]
流动相b：乙腈
[0063]
单次进样量：20ml
[0064]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为3％；7分钟时，流动相b体积比增加到5％；7-7.1分钟内，流动相b的体积比由5％增加至10％，7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％增加至20％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在3％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。收集保留时间为9.4min附近的目标成分，制备图谱见附图2。
[0065]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线为：
[0066][0067][0068]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为566mg，hplc纯度为97.6％，收率56.6％，分析检测图谱见附图3，标号1/2的两个峰对应为亚胺培南杂质b的两种异构体。
[0069]
实施例2
[0070]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0071]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；
[0072]
其他条件同实施例1。
[0073]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为4％；7分钟时，流动相b体积比增加到6％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％增加至20％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在55％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在4％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。收集保留时间为7.7min附近的目标成分。
[0074]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0075][0076]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为535mg，hplc纯度为97.2％，收率53.5％。
[0077]
实施例3
[0078]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0079]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；
[0080]
其他条件同实施例1。
[0081]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为2％；7分钟时，流动相b的体积比增加到4％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由15％增加至25％，17.1-22分钟内，流动相b的体积比维持在55％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在2％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。收集保留时间为10.9min附近的目标成分。
[0082]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0083][0084]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为529mg，收率52.9％，hplc纯度为97.0％。
[0085]
实施例4
[0086]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0087]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；
[0088]
其他条件同实施例1。
[0089]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为0；7分钟时，流动相b体积比增加到3％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％增加至20％，17.1-22分钟内，流动相b的体积比维持在55％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比为0进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。收集保留时间为12.5min附近的目标成分。
[0090]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0091][0092]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为521mg，hplc纯度为97.3％，收率52.1％。
[0093]
实施例5
[0094]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0095]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分流出液；
[0096]
其他条件同实施例1。
[0097]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为0；7分钟时，流动相b的体积比增加到2％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％增加至23％，17.1-22分钟内，流动相b的体积比维持在50％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比为0进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。收集保留时间为12.8min附近的目标成分。
[0098]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0099][0100][0101]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为517mg，hplc纯度为96.1％，收率51.7％。
[0102]
实施例6
[0103]
1)将1g亚胺培南粗品加入40ml纯化水中得亚胺培南混悬液，逐滴加入0.8ml浓硫酸并不断搅拌，待样品溶液变澄清，立刻滴加0.5m氢氧化钾溶液调节ph至7.0，加水稀释至100ml。稀释液经hplc检测，亚胺培南杂质b的两种差向异构体纯度分别为28.0％、35.9％，合计63.9％。
[0104]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；洗脱条件及洗脱梯度同实施例1。
[0105]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0106][0107]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为527mg，hplc纯度为97.1％，收率52.7％。
[0108]
实施例7
[0109]
1)将1g亚胺培南粗品加入60ml纯化水中得亚胺培南混悬液，逐滴加入1.2ml浓硫酸并不断搅拌，待样品溶液变澄清，立刻滴加5m氢氧化钠溶液调节ph至7.0，加水稀释至100ml。稀释液经hplc检测，亚胺培南杂质b的两种差向异构体纯度分别为26.2％、35.3％，
合计61.5％。
[0110]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；洗脱条件及洗脱梯度同实施例1。
[0111]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0112][0113]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为511mg，hplc纯度为96.5％，收率51.1％。
[0114]
实施例8
[0115]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0116]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；
[0117]
其他条件同实施例1。
[0118]
按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为5％；7分钟时，流动相b体积比增加到8％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由12％增加至30％，17.1-22分钟内，流动相b的体积比维持在50％。前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比为5％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环，共进样5针。该梯度不能有效分离亚胺培南杂质b，亚胺培南杂质b与其他杂质分离度较差，在保留时间为5min左右流出，在线制备图谱见图4。
[0119]
实施例9
[0120]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0121]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；实验条件同实施例1；
[0122]
3)将制备收集液在30℃水浴下减压蒸馏，剩余溶液经hplc分析检测，hplc纯度为91.6％。
[0123]
实施例10
[0124]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同实施例1；
[0125]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；实验条件同实施例1；
[0126]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干曲线：
[0127][0128]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为552mg，合并hplc纯度为92.1％，收率55.2％。
[0129]
对比例1
[0130]
将1.0g亚胺培南溶于2l 0.05m硫酸溶液中，室温下搅拌1小时，向上述酸性溶液中逐渐加入固体硫酸钡调节溶液ph至7，过滤，滤液用参考实施例中hplc检测方法分析，亚胺培南杂质b的两种差向异构体纯度分别为23.3％、25.4％，合计48.7％，hplc分析检测图谱见附图5，标号1/2的峰对应为亚胺培南杂质b的两种异构体。
[0131]
滤液用hplc纯化，纯化条件为：vydac，c18柱，25*1.0cm，5μm，波长215nm，进样量：1ml，流速1.0ml/min，洗脱梯度：0-30min，乙腈体积比2～98％。收集保留时间12.6min的洗脱液。该法需多次富集，耗时长，制备效率低，仅可得到洗脱液作分析检测用，难以工业化应用。
[0132]
对比例2
[0133]
1)亚胺培南杂质b粗品溶液的制备同对比例1。
[0134]
2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分洗脱液；洗脱条件及洗脱梯度同实施例1，在线制备图谱见图6。
[0135]
3)将制备收集液直接低温冻干，冻干方法同实施例1。
[0136]
冻干后，称重、分析检测，亚胺培南杂质b为399g，hplc纯度为96.8％，收率39.9％。分析检测图谱见图7，标号1/2的峰对应为亚胺培南杂质b的两种异构体。
技术特征：
1.一种亚胺培南杂质b的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将亚胺培南加入水中得亚胺培南悬浮液，逐滴加入浓硫酸并不断搅拌，溶液澄清后，用碱溶液调节ph至中性，加水稀释得亚胺培南杂质b粗品溶液；2)将上述亚胺培南杂质b粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分流出液；3)将目标成分流出液冻干得亚胺培南杂质b纯品；2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述亚胺培南悬浮液中亚胺培南与水的质量体积比为1：40～60，其中，质量以g计，体积以ml计。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述亚胺培南与所述浓硫酸的质量体积比为1:0.8～1.2，其中，质量以g计，体积以ml计。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述碱溶液选自氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液中的一种。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述碱溶液的浓度为0.5～5mol/l。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述梯度洗脱的流动相a为纯化水、流动相b为乙腈。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述梯度洗脱按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为0％～2％；7分钟时，流动相b体积比增加到2％～4％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％～15％增加至20～25％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50％～55％；前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在0～2％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环。8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述梯度洗脱按照如下梯度洗脱程序进行洗脱：前期洗脱分离和后期洗脱平衡，前期洗脱分离程序为：0分钟时流动相b体积比为3％～4％；7分钟时，流动相b体积比增加到5％～6％；7.1-17分钟内，流动相b的体积比由10％～15％增加至20％～25％，17.1-22分钟内，流动相b体积比维持在50％～55％；前期洗脱分离结束后，22.1-27分钟内，流动相b的体积比维持在3％～4％进行后期洗脱平衡，再进样，前期洗脱分离，后期洗脱平衡，依次循环。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述的冻干的冻干曲线为：
技术总结
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种亚胺培南杂质B的制备方法，包括以下步骤：1)将亚胺培南加入水中得亚胺培南悬浮液，逐滴加入浓硫酸并不断搅拌，溶液澄清后，用碱溶液调节pH至中性，加水稀释得亚胺培南杂质B粗品溶液；2)将上述亚胺培南杂质B粗品溶液进样到动态轴向压缩柱系统，梯度洗脱，收集目标成分流出液；3)将目标成分流出液冻干得亚胺培南杂质B纯品；本发明工艺(1)反应时间短、收率高，将浓硫酸滴加入亚胺培南溶液至溶液澄清，反应即完成，缩短了降解时间，减少了其他杂质的含量；(2)制备效率高，本发明制备过程可以实现连续进样，制备花费时间短，效率高；(3)纯度高，制备的亚胺培南杂质B的HPLC纯度可高达97.6％。培南杂质B的HPLC纯度可高达97.6％。
