用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球及其制备方法与流程
1.本发明属于生物技术领域，具体涉及用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球及其制备方法。
背景技术：
2.水凝胶是一类由亲水分子通过物理或化学交联形成的三维网状且富水结构的聚合物，类似于生物软组织，由于其优异的力学性能及良好的生物相容性，在生物医学、生物工程、智能仿生材料及柔性电子器件等领域具有潜在的应用前景。将水凝胶做成微球尺寸最初是在10xgenomic公司旗下单细胞测序产品的mrna捕获，其原理是在水凝胶微胶珠表面偶联核酸标签序列及捕获序列，利用核酸的反向互补原理捕获细胞释放的mrna，而目前没有技术将水凝胶微球未用于细胞富集。
技术实现要素：
3.本发明的目的在于提供用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，具体包括如下组分：40％丙烯酰胺溶液2.58ml、40％甲叉双丙烯酰胺溶液3.6ml、无酶水3.82ml；tris-盐酸缓冲液10ml、nacl 137ml、kcl0.9ml、edta缓冲液20ml、无酶水832.1ml；10％过硫酸铵1ml、氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物4ml、1％span80-hexane20ml、20％fto 4.8ml、微液滴生成油-temed 4ml；
5.所述氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物由4x acrylamide/bis-acrylamide solution1000μl、1x tris-edta-na+k+buffer、无酶水2480μl配置而成。
6.优选的，所述10％过硫酸铵由1g的过硫酸铵、10ml的无酶水配置而成。
7.优选的，所述微液滴生成油-temed由in hef7500 surf-600p 2％4ml、temed 40μl配置而成。
8.本发明还公开了用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球的制备方法，具体包括以下步骤：
9.s1、生成水凝胶微胶珠：调节注射泵流速，胶项流速：25μl/min；油相流速：60μl/min，注射泵启动后2分钟内生成的胶珠液滴弃掉，从第三分钟开始将生成的油包水微液滴收集在装有carrier oil的收集容器内，直至胶项流动结束；
10.s2、水凝胶胶珠凝固：将收集容器封闭后，置于70℃烘箱内进行加速凝固，凝固时间至少大于8小时；
11.s3、将容器从烘箱内取出，使用移液器尽量除去上层的油相与下层的carrier油相；
12.s4、加入1ml 1xpbs，其ph值为7.2，缓冲液以及2ml的20％pfo，震荡混匀使其乳化，静置3min，除去下层pfo，重复3次；
13.s5、加入2ml 1％span80-hexane,充分混匀，静置5min，弃上层hexane，重复3次至hydogel beads曾略透明状态；
14.s6、加入5ml 1x tris-edta-na+k+buffer,充分混匀，静置3min，弃上清，重复3-5次，至hydogel beads曾透明状态，完成制备。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：根据偶联捕获抗体类型不同，该水凝胶微球可以实现不同类型细胞的捕获；以极大程度保护目标细胞，及剩余样本细胞的活性，对细胞分选准确率高。
附图说明
16.图1对胶珠固相进行了基于cd45-af568的抗体染结果图。
具体实施方式
17.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
18.本发明提供了用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，具体包括如下组分：40％丙烯酰胺溶液2.58ml、40％甲叉双丙烯酰胺溶液3.6ml、无酶水3.82ml；tris-盐酸缓冲液10ml、nacl 137ml、kcl 0.9ml、edta缓冲液20ml、无酶水832.1ml；10％过硫酸铵1ml、氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物4ml、1％span80-hexane20ml、20％fto 4.8ml、微液滴生成油-temed 4ml；
19.所述氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物由4x acrylamide/bis-acrylamide solution1000μl、1x tris-edta-na+k+buffer、无酶水2480μl配置而成。
20.所述10％过硫酸铵由1g的过硫酸铵、10ml的无酶水配置而成。
21.所述微液滴生成油-temed由in hef7500 surf-600p 2％4ml、temed 40μl配置而成。
22.本发明还公开了用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球的制备方法，具体包括以下步骤：
23.s1、生成水凝胶微胶珠：调节注射泵流速，胶项流速：25μl/min；油相流速：60μl/min，注射泵启动后2分钟内生成的胶珠液滴弃掉，从第三分钟开始将生成的油包水微液滴收集在装有carrier oil的收集容器内，直至胶项流动结束；
24.s2、水凝胶胶珠凝固：将收集容器封闭后，置于70℃烘箱内进行加速凝固，凝固时间至少大于8小时；
25.s3、将容器从烘箱内取出，使用移液器尽量除去上层的油相与下层的carrier油相；
26.s4、加入1ml 1xpbs，其ph值为7.2，缓冲液以及2ml的20％pfo，震荡混匀使其乳化，静置3min，除去下层pfo，重复3次；
27.s5、加入2ml 1％span80-hexane,充分混匀，静置5min，弃上层hexane，重复3次至hydogel beads曾略透明状态；
28.s6、加入5ml 1x tris-edta-na+k+buffer,充分混匀，静置3min，弃上清，重复3-5次，至hydogel beads曾透明状态，完成制备。
29.免疫细胞jurkat的分选富集实验
30.制备混合细胞样本：100wc666-1细胞+100whone-1细胞，1w jurkat细胞(4ml)
31.目的：特异性抓取jurkat细胞
32.方法：使用一次性吸管取约500μl用于特异性分选jurkat细胞的hydogel beads溶液，加入待分选的细胞样本，封闭反应容器，置于摇床：转速为50-80rpm，反应0.5h；将其转移至3cm细胞培养皿内继续在细胞培养箱内培养1h；使用一次性吸管吸取培养皿内液相置于5ml离心管内，静置3min，使用移液器除去上清；加入2mlpbs或细胞培养液清洗hydrogel beads沉淀，静置3min，除去上清，重复2次。此时目标细胞jurkat便被hydrogel吸附，为了检测hydrogel吸附特异性。实验对胶珠固相进行了基于cd45-af568的抗体染，染结果图1所示。
33.结果分析：白光20x视野下hydrogelbeads表面吸附的细胞均被cd45-af568抗体标记，证明该方法制备的hydrogel beads细胞分选试剂的特异性良好。
34.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：
1.用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，其特征在于，具体包括如下组分：40％丙烯酰胺溶液2.58ml、40％甲叉双丙烯酰胺溶液3.6ml、无酶水3.82ml；tris-盐酸缓冲液10ml、nacl 137ml、kcl 0.9ml、edta缓冲液20ml、无酶水832.1ml；10％过硫酸铵1ml、氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物4ml、1％span80-hexane20ml、20％fto 4.8ml、微液滴生成油-temed 4ml；所述氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物由4x acrylamide/bis-acrylamide solution1000μl、1x tris-edta-na+k+buffer、无酶水2480μl配置而成。2.根据权利要求1所述的用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，其特征在于：所述10％过硫酸铵由1g的过硫酸铵、10ml的无酶水配置而成。3.根据权利要求1所述的用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，其特征在于：所述微液滴生成油-temed由in hef7500 surf-600p 2％4ml、temed 40μl配置而成。4.一种如权利要求1-3任一项所述的用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：s1、生成水凝胶微胶珠：调节注射泵流速，胶项流速：25μl/min；油相流速：60μl/min，注射泵启动后2分钟内生成的胶珠液滴弃掉，从第三分钟开始将生成的油包水微液滴收集在装有carrier oil的收集容器内，直至胶项流动结束；s2、水凝胶胶珠凝固：将收集容器封闭后，置于70℃烘箱内进行加速凝固，凝固时间至少大于8小时；s3、将容器从烘箱内取出，使用移液器尽量除去上层的油相与下层的carrier油相；s4、加入1ml 1xpbs，其ph值为7.2，缓冲液以及2ml的20％pfo，震荡混匀使其乳化，静置3min，除去下层pfo，重复3次；s5、加入2ml 1％span80-hexane,充分混匀，静置5min，弃上层hexane，重复3次至hydogel beads曾略透明状态；s6、加入5ml 1x tris-edta-na+k+buffer，充分混匀，静置3min，弃上清，重复3-5次，至hydogel beads曾透明状态，完成制备。
技术总结
本发明公开了用于细胞捕获的丙烯酰胺水凝胶微球，具体包括如下组分：40％丙烯酰胺溶液2.58mL、40％甲叉双丙烯酰胺溶液3.6mL、无酶水3.82mL；Tris-盐酸缓冲液10mL、aCl 137mL、KCl 0.9mL、EDTA缓冲液20mL、无酶水832.1mL；10％过硫酸铵1mL、氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物4mL、1％Span80-hexane20mL、20％FTO 4.8mL、微液滴生成油-TEMED 4mL；所述氢凝胶珠用丙烯酰胺混合物由4X Acrylamide/Bis-acrylamide solution1000μL、1X Tris-EDTA-a+K+buffer、无酶水2480μL配置而成。无酶水2480μL配置而成。无酶水2480μL配置而成。
