一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物及其应用的制作方法
research 100,35-83)。发现axl、mer和tyro3在癌细胞中过度表达。
6.因此，开发一种tam激酶抑制剂在癌症领域中存在迫切需求。
技术实现要素：
7.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物及其应用，该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物具有良好的tam激酶抑制作用。
8.本发明的发明构思为：发现一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物，该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物具有良好的tam激酶抑制作用，其axl激酶ic
50
最低可达4.1nm。
9.本发明的第一方面提供一种具有通式i所示结构的化合物或其药学可接受的盐：
[0010][0011]
r1选自h或卤素；
[0012]
r2、r3分别独立地选自h或卤素；
[0013]
r4选自吡咯并三嗪基或吡啶基，其中，所述的吡咯并三嗪基或吡啶基被r5基团所取代；
[0014]
r5选自h、c6-c10芳基、5-10元杂芳基、4-10元杂环烷基、-c(o)ra、-c(o)nrara、-c(o)ora、-ora、-oc(o)nrara或-nrara；所述5-10元杂芳基、4-10元杂环烷基分别被1、2或3个独立选择的rb所取代；
[0015]
rb选自h、c1-c5烷基、c1-c5烷氧基取代的c1-c5烷基、羟基取代的c1-c5烷基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基、c1-c3烷基取代的4-10元杂环烷基、-s(o)2r
b1
或-nr
b2rb3
；
[0016]rb1
选自：c3-c5环烷基或c6-c10芳基，r
b2
、r
b3
分别独立地选自h、c1-c5烷基或c1-c5烷氧基取代的c1-c5烷基；
[0017]
ra各自独立地选自h、c1-c10烷基、-nrcrc、-s(o)2rc、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基或-c(o)rc；其中，所述c1-c10烷基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基各自独立地被1、2或3个独立选择的rc取代基取代；
[0018]
rc各自独立地选自：h、c1-c5烷基、c6-c10芳基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基、-ord或-nrdrd；
[0019]
rd各自独立地选自：h或c1-c5烷基。
[0020]
相对于现有技术，本发明第一方面提供的一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物的有益效果如下：该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物具有良好的tam激酶抑制作用，对axl激酶的ic
50
最低可达4.1nm。
[0021]
优选的，r4选自进一步优选的，r4选自
[0022]
优选的，r9选自选自
[0023]
优选的，ra选自
[0024]
优选的，所述通式i化合物为以下通式所示的化合物优选的，所述通式i化合物为以下通式所示的化合物
[0025]
优选的，所述通式i化合物包括以下结构式所示的化合物中的任意一种：
[0026]
[0027][0028]
本发明的第二方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包括所述通式i化合物或其药学可接受的盐。
[0029]
优选的，所述药物组合物还包括选自下列组中的一种或多种：egfr抑制剂、vegfr抑制剂、bcr-abl抑制剂、c-kit抑制剂、c-met抑制剂、raf抑制剂、mek抑制剂、组蛋白去乙酰
酶抑制剂、vegf抗体、egf抗体、hiv蛋白激酶抑制剂、hmg-coa还原酶抑制剂、pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂等。
[0030]
优选的，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体包括微囊、微球、纳米粒、脂质体。
[0031]
优选的，所述药物组合物还的剂型包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂中的至少一种。
[0032]
优选的，可以将本发明的化合物、异构体、溶剂合物、结晶或前药与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
[0033]
本发明的第三方面提供一种通式i化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0034]
[0035][0036]
(1)通式
ⅱ‑
1化合物和通式
ⅱ‑
2化合物反应生成通式
ⅱ‑
3化合物；
[0037]
(2)通式
ⅱ‑
3化合物和通式
ⅱ‑
4化合物反应生成通式
ⅱ‑
5化合物；
[0038]
(3)通式
ⅱ‑
5化合物和通式
ⅲ‑
1化合物反应生成通式
ⅲ‑
2化合物；
[0039]
(4)通式
ⅲ‑
2化合物和通式
ⅲ‑
3化合物反应生成通式
ⅲ‑
4化合物；
[0040]
(5)通式
ⅲ‑
4化合物和通式
ⅲ‑
5化合物反应生成通式i-1化合物；
[0041]
(6)通式
ⅳ‑
1化合物和通式
ⅳ‑
2化合物反应生成通式
ⅳ‑
3化合物；
[0042]
(7)通式
ⅳ‑
3化合物和通式
ⅱ‑
5化合物反应生成通式i-2化合物；
[0043]
(8)通式
ⅴ‑
1化合物和通式
ⅴ‑
2化合物反应生成通式
ⅴ‑
3化合物；
[0044]
(9)通式
ⅴ‑
3化合物和通式
ⅱ‑
5化合物反应生成通式i-3化合物；
[0045]
r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9的定义如上述通式i-1、i-2和i-3化合物中的定义。
[0046]
优选的，步骤(1)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括乙酸盐，所述溶剂包括乙酸、丙酸、丁酸中的至少一种，温度为100-140℃；进一步优选的，步骤(1)的所述反应中，所述催化剂包括乙酸钾，所述溶剂包括乙酸，温度为110-130℃。
[0047]
优选的，步骤(2)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催化剂、磷酸盐和水，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3(甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii))、xphos-pd-g2(氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(ii))、xphos-pd-g1(氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2-氨基乙基苯基)]钯(ii))、ruphos-pd-g3(甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii))、sphos-pd-g2(氯(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii))中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为50-90℃；进一步优选的，步骤(2)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括pd(pph3)2cl2，所述磷酸盐包括磷酸钾，所述溶剂包括1,4-二氧六环，所述温度为60-80℃。
[0048]
优选的，步骤(3)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，通式
ⅲ‑
1化合物先与bop(卡特缩合剂)、dbu(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)在溶剂中、温度为20-40℃下反应，后与通式
ⅱ‑
5化合物在催化剂、溶剂中、温度为20-40℃下反应，所述溶剂包括thf(四氢呋喃)、nmp(n-甲基吡咯烷酮)、dmf(n,n-二甲基甲酰胺)、ch3cn(乙腈)、dcm(二氯甲烷)中的至少一种，所述催化剂包括碱催化剂；进一步优选的，所述碱催化剂包括铯盐；更进一步优选的，所述铯盐为碳酸铯，温度为25-35℃。
[0049]
优选的，步骤(4)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催化剂、醋酸盐、吡啶类衍生物，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为80-130℃，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3、xphos-pd-g2、xphos-pd-g1、ruphos-pd-g3、sphos-pd-g2中的至少一种；进一步优选的，步骤(4)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括ruphos-pd-g3，所述醋酸盐包括醋酸钾，所述溶剂包括1,4-二氧六环，温度为90-110℃。
[0050]
优选的，步骤(5)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催化剂、磷酸盐和水，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3、xphos-pd-g2、xphos-pd-g1、ruphos-pd-g3、sphos-pd-g2中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为80-130℃；进一步优选的，步骤(5)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括ruphos-pd-g3，所述磷酸盐包括磷酸钾，所述溶剂包括1,4-二氧六环，所述温度为90-110℃。
[0051]
优选的，步骤(6)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催化剂、碳酸盐和水，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3、xphos-pd-g2、xphos-pd-g1、ruphos-pd-g3、sphos-pd-g2中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为80-130℃；进一步优选的，步骤(6)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括pd(pph3)2cl2，所述碳酸盐包括碳酸钾，所述溶剂包括1,4-二氧六环，所述温度为90-110℃。
[0052]
优选的，步骤(7)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催化剂、磷酸盐和水，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3、xphos-pd-g2、xphos-pd-g1、ruphos-pd-g3、sphos-pd-g2中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为80-130℃；进一步优选的，步骤(7)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括ruphos-pd-g3，所述磷酸盐包括磷酸钾，所述溶剂包括dmf，所述温度为90-110℃。
[0053]
优选的，步骤(8)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括鎓盐、有机碱，所述鎓盐包括hbtu(o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐)、tbtu(o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸)、hatu(2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐)、pybop(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷)中的至少一种，所述有机碱包括三乙胺(net3)、dbu、n,n-二甲苯胺、吡啶和喹啉中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、thf、nmp、dmf、ch3cn、dcm中的至少一种，温度为20-40℃；进一步优选的，步骤(8)的所述反应中，所述鎓盐包括hatu，机碱包括三乙胺，所述溶剂包括dmf，温度为25-35℃。
[0054]
优选的，步骤(9)的所述反应中使用到催化剂、溶剂，所述催化剂包括偶联反应催
化剂、铯盐，偶联反应催化剂包括pd(dppf)cl2、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)4、xphos-pd-g3、xphos-pd-g2、xphos-pd-g1、ruphos-pd-g3、sphos-pd-g2中的至少一种，所述溶剂包括1,4-二氧六环、dmf、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的至少一种，温度为100-140℃；进一步优选的，步骤(9)的所述反应中，所述偶联反应催化剂包括ruphos-pd-g3，所述磷酸盐包括磷酸钾，所述溶剂包括dmf，所述温度为110-130℃。
[0055]
本发明的第四个方面提供一种所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐、或本发明的药物组合物在制备tam激酶抑制剂中的应用；优选的，提供一种所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐在制备axl激酶抑制剂中的应用。
[0056]
本发明的第五个方面提供一种所述的通式i化合物或其药学可接受的盐、或本发明的药物组合物在制备或预防肿瘤药物中的应用。
[0057]
所述肿瘤包括乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、子宫癌、食管癌、鳞状细胞癌、白血病、骨肉瘤、黑素瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胰腺癌中的至少一种。
[0058]
本发明的“溶剂合物”在常规意义上是指溶质(如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂(如水)组合形成的复合物。溶剂是指本领域的技术人员所知的或容易确定的溶剂。如果是水，则溶剂合物通常被称作水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
[0059]
本发明的“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型、无定形。
[0060]
本发明的“异构体”包括化合物构型异构体、构象异构体和对映异构体。构型异体是指顺式或反式构型的顺反异构体；构象异构体是指由于单键旋转产生的立体异构体。
[0061]
本发明的“前药”是指在生物体的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成本发明的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成本发明的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成本发明的化合物。
[0062]
本发明的“药学可接受的盐”是指本发明的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。
[0063]
本发明的“药物组合物”是指包含任何一种本文所述的化合物，包括异构体、前药、溶剂合物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种药学上可接受载体的混合物。
[0064]
本发明的“药学上可接受的载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。
[0065]
本发明的“赋形剂”指加入到药用组合物中以进一步促进给予化合物的惰性物质。赋形剂可以包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇。
[0066]
本发明的“在制备用于或预防肿瘤的药物中的应用”是指可以抑制肿瘤的生
长、发展和/或转移，主要向所需要的人或动物给治予有效剂量的本发明的化合物以抑制、减慢或逆转受者肿瘤的生长、迁移或扩散。
[0067]
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
[0068]
(1)该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物具有良好的tam激酶抑制作用，对axl激酶的ic
50
小于100nm、最低可达4.1nm。
[0069]
(2)对其他激酶抑制较弱，选择性高。
[0070]
(3)化合物的制备方法工艺简单，便于工业化生产。
具体实施方式
[0071]
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
[0072]
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
[0073]
实施例1
[0074]
一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物，i-1-1，结构式为：
[0075]
其制备路线如下：
[0076][0077]
(1)化合物
ⅱ‑
3-1(4-溴-2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮)的合成
[0078][0079]
反应瓶中加入3-溴邻苯二甲酸酐2.5g和对羟基苯乙胺1.66g，加入25ml冰醋酸溶解，再加入醋酸钾3.8g，搅拌均匀，抽真空后置换氮气，移至120℃油浴加热，搅拌反应6小时。反应停止后，旋蒸除去大部分溶剂后析出固体，抽滤，先用碳酸氢钠溶液洗涤滤饼至滤液ph＝8-9，再用水洗两次。滤饼风干后得近白固体4.13g，纯度98％。
[0080]
化合物
ⅱ‑
3-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 346[m+h]
+
。
[0081]
(2)化合物
ⅱ‑
5-1(4-(4-氟苯基)-2-(4-羟基苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮)的合成
[0082][0083]
将化合物
ⅱ‑
3-1 1.0g和4-氟苯硼酸0.424g溶于25ml 1,4-dioxane(1,4-二氧六环)中，加入pd(dppf)cl
2 84.54mg、2.3g k3po4和0.26g水，搅拌均匀，抽真空后置换氮气。移至70℃油浴加热，反应4h。反应停止后，旋蒸除去大部分溶剂，加硅胶拌样进行柱层析纯化，得到白产物0.85g。
[0084]
化合物
ⅱ‑
5-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 360[m-h]
+
。
[0085]
(3)化合物
ⅲ‑
2-1(2-(4-((6-溴吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氧基)苯乙基)-4-(4-氟苯基)异吲哚-1,3-二酮)的合成：
[0086][0087]
在常温下，将6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-(1h)-酮1.67g和bop 3.63g，溶于thf 1.1ml中，滴加dbu 1.78g，置换氮气，搅拌均匀，室温(rt，25℃)搅拌反应20min。停止反应，抽滤，用水和无水乙醇洗涤滤饼，干燥后溶于12ml thf中，加入化合物
ⅱ‑
5-1 0.85g、碳酸铯3.54g，置换氮气，搅拌均匀，室温(rt，25℃)搅拌反应12h，减压浓缩除去大部分溶剂，加水析出固体，过滤，再用乙醇洗涤滤饼，风干干燥后得到1.01g。
[0088]
化合物
ⅲ‑
2-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 579[m+na]
+
。
[0089]
(4)化合物
ⅲ‑
4-1(4-(4-氟苯基)-2-(4-((6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯并呋喃-2-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氧基)苯乙基)异吲哚啉-1,3-二酮)的合成：
[0090][0091]
将化合物
ⅲ‑
2-1 789.75mg和联硼酸频那醇酯540mg溶于10ml 1,4-dioxane(1,4-二氧六环)中，加入xphos-pd-g3 48.5mg、醋酸钾420mg和4-苯基吡啶(4-phenylpyridine)44.2mg，搅拌均匀，置换氮气。将温度升至100℃，反应7h。反应停止，将反应液倒入饱和食盐
水中，用ea萃取3次，合并有机相，旋干得粗产品，再用pe和ea重结晶得到白固体784.71mg。
[0092]
化合物
ⅲ‑
4-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 605[m+h]
+
。
[0093]
(5)化合物i-1-1(4-(4-氟苯基)-2-(4-(6-(5-((2-甲氧基乙基)氨基)甲基)吡啶-2-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氧基)苯乙基)异吲哚-1,3-二酮)的合成：
[0094][0095]
将化合物
ⅲ‑
4-1 76.73mg和6-溴-n-(2-甲氧基乙基)-3-吡啶甲胺28.90mg溶于6ml1,4-dioxane(1,4-二氧六环)中，加入xphos-pd-g3 4.30mg、k3po
4 101.35mg和水11.42mg，混合搅拌，置换氮气。移至120℃油浴加热，反应4h。反应停止，减压浓缩除去大部分溶剂，经反相柱层析纯化，得到白粉末27.72mg。
[0096]
化合物i-1-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 643[m+h]
+
。
[0097]
化合物i-1-1核磁共振氢谱表征结果为：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.58(d,j＝1.7hz,1h),8.54(d,j＝2.2hz,1h),8.10(s,1h),7.95(d,j＝8.0hz,1h),7.88
–
7.84(m,2h),7.77(ddd,j＝20.0,6.7,2.9hz,2h),7.68
–
7.62(m,2h),7.57(d,j＝1.7hz,1h),7.30(dt,j＝26.0,8.3hz,7h),3.82(dd,j＝8.4,6.5hz,2h),3.76(s,2h),3.41(t,j＝5.7hz,2h),3.24(s,3h),3.00
–
2.93(m,2h),2.67(t,j＝5.7hz,2h).
[0098]
实施例2
[0099]
一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物，i-2-1，结构式为：
[0100]
制备路线如下：
[0101][0102]
(1)化合物
ⅳ‑
3-1(4-氯-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶)的合成
[0103][0104]
将3-溴-4-氯吡啶3.1g和1-甲基-4-吡唑硼酸嚬呐醇酯3.56g溶于1,4-dioxane(1,4-二氧六环)(30ml)和水(3ml)的混合液中，加入pd(pph3)
4 550.14mg和na2co
3 3.46g，混合搅拌，抽真空，置换氮气。移至100℃油浴加热，搅拌反应6h。反应停止，旋蒸除去大部分溶剂，加硅胶拌样进行柱层析纯化，得到话黄产物2.03g。
[0105]
化合物
ⅳ‑
3-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 194[m+h]
+
。
[0106]
(2)化合物i-2-1(4-(4-氟苯基)-2-(4-((3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶-4-基)氧基)苯乙基)异吲哚-1,3-二酮)的合成：
[0107][0108]
将化合物
ⅱ‑
5-1(实施例1制得)200.01mg和化合物
ⅳ‑
3-1 373.26mg溶于dmf(2.0ml)中，加入xphos-pd-g3 4.30mg和cs2co
3 421.74mg，混合搅拌，抽真空，置换氮气。移至100℃油浴加热，反应16h。反应停止，向反应体系中加入少量乙醇，再加入水，析出固体。抽滤，滤饼用乙酸乙酯溶解，拌硅胶进行柱层析纯化，得白粉末23.33mg。
[0109]
化合物i-2-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 519[m+h]
+
。
[0110]
化合物i-2-1核磁共振氢谱表征结果为：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.84(s,1h),8.21(s,2h),7.99(s,1h),7.86(d,j＝6.9hz,2h),7.74(d,j＝6.7hz,1h),7.63(dd,j＝8.4,5.4hz,2h),7.30(d,j＝8.4hz,4h),7.08(d,j＝8.1hz,2h),6.53(d,j＝5.6hz,1h),3.87(s,3h),3.81(t,j＝7.2hz,2h),2.94(t,j＝7.3hz,2h).
[0111]
实施例3
[0112][0113]
(1)化合物
ⅴ‑
3-1(4-氯-n-环丙基吡啶酰胺)的合成
[0114][0115]
将4-氯-2-吡啶甲酸2.0g和环丙胺0.87g溶于dcm(20ml)中，加入hatu 5.07g和三乙胺(net3)2.57g，搅拌混匀，室温(rt，25℃)下反应10h。反应停止，旋蒸除去大部分溶剂，加水和乙腈稀释，析出固体。抽滤除去固体，滤液减压浓缩，得到白粉末0.7g。
[0116]
化合物
ⅴ‑
3-1质谱表征结果为：lcms(esi):m/z 197[m+h]
+
。
[0117]
(2)化合物i-3-1(n-环丙基-4-(4-(2-(4-(4-氟苯基)-1,3-二氧异喹啉-2-基)乙基)苯氧基)吡啶酰胺)的合成：
[0118][0119]
将化合物
ⅴ‑
3-1 123.42mg和化合物
ⅱ‑
5-1(实施例1制得)184.10mg溶于dmf(2.0ml)中，加入xphos-pd-g3 20.00mg和cs2co
3 410.44mg，搅拌均匀，抽真空，置换氮气。移
slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值。
[0143]
本发明化合物i-1-1、i-2-1、i-3-1对激酶axl的抑制活性如下表2
[0144]
表2化合物i-1-1、i-2-1、i-3-1对激酶axl的抑制活性
[0145][0146]
由上表可知，本发明化合物能够有效地抑制axl激酶的活性。
[0147]
效果实施例2
[0148]
本实验利用htrf的方法，分别以g-749、bibf-1120、blu-667、bms777607、loxo-195和sitravatinib作为阳性对照化合物，测试化合物i-1-1在flt3、kdr、ret、c-kit、c-met、tryo3、mertk、trka和trkb激酶上的ic
50
值。化合物测试浓度为10000nm，3倍稀释，10个浓度，复孔。
[0149]
一、测试方法
[0150]
1.配制1
×
kinase buffer。
[0151]
2.使用分液器echo 550将化合物稀释液转移到实验板(784075，greiner)的每个孔中。
[0152]
3.密封实验板，1000rpm离心复合板1min。
[0153]
4.在1
×
kinase buffer中配制2倍终浓度的激酶溶液。
[0154]
5.向384孔板(784075，greiner)中加入5μl 2倍终浓度的激酶溶液。
[0155]
6. 1000rpm离心30秒，反应板振荡混匀后室温孵育10分钟。
[0156]
7.用1
×
kinase buffer配制2倍终浓度的atp和tk-substrate-biotin(2um)的混合溶液。
[0157]
8.加入5μl的2倍终浓度的atp和tk-substrate-biotin的混合溶液，开始反应。
[0158]
9.将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育相应的时间。
[0159]
10.在htrf detection buffer中配制4
×
sa-xl 665。
[0160]
11.向384板的每个孔中加入5μl sa-xl 665和5μl tk-antibody-cryptate。
[0161]
12. 1000rpm离心30秒，室温孵育1小时。
[0162]
13.在envision 2104微孔板检测仪上读取615nm(cryptate)和665nm(xl665)处的荧光信号。
[0163]
二、数据分析
[0164]
1.计算每个孔的比值(665/615nm)
[0165]
2.％inhibition计算如下：
[0166]
％inhibition＝100-(signal
cmpd-signal
ave_pc
)/(signal
ave_vc-signal
ave_pc
)
×
100.
[0167]
3.计算ic
50
并绘制化合物的量效曲线：
[0168]
以浓度的log值作为x轴，％inhibition为y轴，采用分析软件graphpad 8.0的log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值。公式如下：
[0169]
y＝bottom+(top-bottom)/(1+10^((logic
50-x)*hillslope))
[0170]
三、实验结果
[0171]
本发明化合物i-1-1在flt3、kdr、ret、c-kit、c-met、tryo3、mertk、trka和trkb激酶上的ic
50
值如下表。
[0172]
表3实验结果
[0173][0174]
化合物i-1-1：
[0175]
从表3可看出，化合物i-1-1对tam激酶家族的tryo3、mertk具有良好的抑制活性，对其他靶点抑制活性较弱，具有很高的选择性。
技术特征：
1.一种具有通式i所示结构的化合物或其药学可接受的盐：r1选自h或卤素；r2、r3分别独立地选自h或卤素；r4选自吡咯并三嗪基或吡啶基，其中，所述吡咯并三嗪基或所述吡啶基被r5基团所取代；r5选自h、c6-c10芳基、5-10元杂芳基、4-10元杂环烷基、-c(o)r
a
、-c(o)nr
a
r
a
、-c(o)or
a
、-or
a
、-oc(o)nr
a
r
a
或-nr
a
r
a
；所述5-10元杂芳基、4-10元杂环烷基分别被1、2或3个独立选择的r
b
所取代；r
b
选自h、c1-c5烷基、c1-c5烷氧基取代的c1-c5烷基、羟基取代的c1-c5烷基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基、c1-c3烷基取代的4-10元杂环烷基、-s(o)2r
b1
或-nr
b2
r
b3
；r
b1
选自：c3-c5环烷基或c6-c10芳基；r
b2
、r
b3
分别独立地选自h、c1-c5烷基或c1-c5烷氧基取代的c1-c5烷基；r
a
各自独立地选自h、c1-c10烷基、-nr
c
r
c
、-s(o)2r
c
、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基或-c(o)r
c
；其中，所述c1-c10烷基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基各自独立地被1、2或3个独立选择的r
c
取代基取代；r
c
各自独立地选自：h、c1-c5烷基、c6-c10芳基、c3-c10环烷基、4-10元杂环烷基、-or
d
或-nr
d
r
d
；r
d
各自独立地选自：h或c1-c5烷基。2.根据权利要求1所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐，其特征在于，r4选自3.根据权利要求1所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐，其特征在于，r4选自4.根据权利要求1所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐，其特征在于，r
b
选自
5.根据权利要求1所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐，其特征在于，所述通式i化合物包括以下结构式所示的化合物中的任意一种：
6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-5任一项所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐，以及辅料。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还的剂型包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂中的至少一种。
8.权利要求1-5任一项所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐在制备tam激酶抑制剂中的应用。9.权利要求1-5任一项所述的通式i所示的化合物或其药学可接受的盐或权利要求6-7任一项所述的药物组合物在制备或预防肿瘤药物中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、子宫癌、食管癌、鳞状细胞癌、白血病、骨肉瘤、黑素瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胰腺癌中的至少一种。
技术总结
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种异吲哚啉-1,3-二酮衍生物及其应用。该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物通式I所示的化合物或其药学可接受的盐，为具有通式I的化合物：该异吲哚啉-1,3-二酮衍生物具有良好的TAM激酶抑制作用，对AXL激酶的IC
