含吡唑多环类衍生物的自由碱晶型及其制备方法和应用与流程
1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种含吡唑多环类衍生物的自由碱晶型及其制备方法和应用。
背景技术：
2.p2x受体(p2x receptors)或称为p2x嘌呤受体(p2x purinoreceptor)是一个阳离子渗透型atp配体门控离子通道家族，能同细胞外的atp结合。p2x受体具有七个亚基，以同源三聚体i或异源三聚体的形式存在，主要表达于神经系统的神经末梢(突触前和突触后)，调节突触传递。p2x3受体是p2x家族成员之一，是感受上呼吸道刺激和触发咳嗽反射的关键感觉受体，被认为在特定感觉神经的致敏(sensitisation)中发挥了关键作用，参与疼痛和咳嗽，并参与骨癌痛的感知，阻断p2x3可以抑制咳嗽的信号刺激。
3.咳嗽是机体的防御性神经反射，有利于清除呼吸道分泌物和有害因子，但频繁剧烈的咳嗽会对患者等工作、生活和社会活动造成严重影响。咳嗽分为急性、亚急性、慢性咳嗽。慢性咳嗽(chronic cough)为咳嗽时间》8周，以咳嗽为主要或唯一症状者，胸部影像学检查肺内无明显病变。慢性咳嗽一直被认为是各种疾病的后果，如哮喘/嗜酸性支气管炎、鼻炎和胃食管反酸病。然而，最近的证据表明，慢性咳嗽是一种临床症状，具有独特的内在病理生理学特征的神经过敏。不明原因慢性咳嗽或特发性咳嗽，此类以慢性刺激性干咳为主要表现，对外界刺激较敏感，普遍存在咳嗽高敏感性，咳嗽高敏感性是其生理病理机制。咳嗽相关传入神经异常可能是难治性或原因不明的慢性咳嗽的原因。慢性咳嗽可引起心血管、消化、神经、泌尿、肌肉骨骼等多个系统的并发症，如尿失禁、晕厥、失眠、焦虑等。
4.基于咳嗽高敏综合症的病理生理学特征，应以降低咳嗽敏感性为目的。目前选择有限，包括药物手段和非药物手段。临床研究结果显示神经调节因子类药物加巴喷丁有效，其他药物如阿米替林，巴氯芬、卡马西平、普瑞巴林等亦可选用。严重咳嗽可适当给予镇咳，镇咳药物主要分为中枢性镇咳药和外周性镇咳药。中枢性镇咳药物分为依赖性镇咳药(类生物碱及其衍生物)和非依赖性镇咳药(人工合成的右美沙芬和喷托维林)，前者具有成瘾性和麻醉性等副作用，后者临床应用十分广泛。外周性镇咳药也称为末梢镇咳药，通过抑制咳嗽反射弧中的某一环节而起到镇咳作用，包括局部麻醉药(那可丁、苯佐那酯)和黏膜防护剂(苯丙哌林和莫吉司坦)。
5.目前，市场上尚未有已批准上市的p2x3受体拮抗剂小分子药物。现在处在临床阶段的p2x3受体拮抗剂药物有默克(merck&co)的mk-7264，其用于慢性咳嗽、疼痛和肺纤维化等疾病，其对p2x3/p2x2/3选择性低，安全性好但具有味觉丧失等副作用，目前适应症慢性咳嗽已经入临床iii期研究。贝勒斯健康(bellus health)的blu5937，具有较高的选择性，且在i期临床试验中未出现味觉等副作用，2020年7月6日，贝勒斯健康公布了blu-5937的2期relief试验在难治性慢性咳嗽患者中的主要研究结果：在ii期临床研究中，relief试验在任何剂量下均未达到安慰剂调整后咳嗽频率降低的主要终点的统计学意义。另外，拜耳(bayer)的bay-1817080和bay-1902607，shionogi公司的s-600918，适应症慢性咳嗽目前
处在临床i/ii期。因此，迫切需要开发安全性好、非成瘾麻醉性、具有高选择性的p2x3受体抑制剂药物用于慢性咳嗽等疾病，以满足巨大的市场需求。
6.江苏豪森药业集团有限公司的专利申请(申请号：pct/cn2020/134264)中公开了一系列含吡唑多环类衍生物抑制剂的结构，在后续的研发中，为了使产物易于处理、过滤、干燥，便于储存、产品长期稳定、生物利用度高等，本发明对上述物质的晶型进行了全面的研究，致力于得到最适合的晶型。
技术实现要素：
7.专利申请pct/cn2020/134264所涉及的所有内容均以引证的方式添加到本发明中。
8.本发明的目的在于提供一种通式(i)所示化合物或其立体异构体的晶型，
[0009][0010]
其中：
[0011]
r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、-(ch2)nc(o)ra、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、-(ch2)nc(o)ra、3-12元杂环基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
1-6
羟烷基、氰基取代的c
1-6
烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-12
芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0012]
ra选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、氧代基、硫代基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0013]
r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基和5-14
元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
1-6
羟烷基、氰基取代的c
1-6
烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-12
芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0014]
r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
3-8
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基；且
[0015]
x为0～3的整数，优选0、1或2，更优选0或1；
[0016]
n为0～3的整数，优选0、1或2，更优选0或1。
[0017]
在本发明的优选方案中，通式(i)进一步进一步如通式(ii)所示：
[0018][0019]
在本发明的优选方案中，所述r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)nc(o)ra、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n1
c(o)ra、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0020]
ra选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、氧代基、硫代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0021]
优选地，r1选自氢、卤素、氨基、氰基、c
1-3
烷基、c
2-6
烯基、、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)nc(o)ra、含1-3个选自氮、氧或硫原子的3-8元杂环基、c
6-10
芳基或含1-3个选自氮、氧或硫原子5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n1
c(o)ra、含1-3个选自氮、氧或硫原子的3-8元杂环基、c
6-10
芳基或含1-3个选自氮、氧或硫原子5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0022]
ra选自氢、氘、卤素、氨基、氰基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-6
环烷基或含1-2个选自n或o的4-6元杂环基，所述的氨基c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-6
环烷基或含1-2个选自n或o的4-6元杂环基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0023]
更优选地，r1选自以下基团：
[0024]-h、-nh2、-f、-cl、-br、-cn、-ch3、-ch2ch3、-cf3、、
[0025]
r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、c
1-3
羟烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，优选氢、氨基、氰基、氟、氯、溴、甲基、异丙基、三氟甲基、甲氧基、环丙基或吗啉基；
[0026]
r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-1.元杂芳基，优选氢或氰基。
[0027]
在本发明的优选方案中，所述化合物的具体结构如下：
[0028]
[0029][0030]
在本发明优选的方案中，所述晶型为化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型。
[0031]
在本发明的优选方案中，提供化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型i～vii。
[0032]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型i的x-射线粉末衍射图谱在18.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在11.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在32.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0033]
优选地，晶型i的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为18.1
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、11.7
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为24.2
±
0.2
°
、24.7
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、15.7
±
0.2
°
、26.7
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0034]
更优选地，所述晶型i的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为32.0
±
0.2
°
、26.3
±
0.2
°
、28.4
±
0.2
°
、17.6
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、35.9
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0035]
进一步优选地，所述晶型i的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为18.1
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、11.7
±
0.2
°
、24.2
±
0.2
°
、24.7
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、15.7
±
0.2
°
、26.7
±
0.2
°
、32.0
±
0.2
°
、26.3
±
0.2
°
、28.4
±
0.2
°
、17.6
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、35.9
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0036]
最优选的，在本发明进一步优选的实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型i，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表1所示。
[0037]
表1
[0038][0039]
本发明实施例17化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型i，其x-射线粉末衍射图谱基本如图1所示；其dsc图谱基本如图2所示。
[0040]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型ii的x-射线粉末衍射图谱在27.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在27.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在30.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在28.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在13.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0041]
优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为27.3
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、27.6
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为22.5
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、28.5
±
0.2
°
、10.4
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0042]
更优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.0
±
0.2
°
、13.7
±
0.2
°
、20.9
±
0.2
°
、22.3
±
0.2
°
、30.4
±
0.2
°
、19.8
±
0.2
°
、21.5
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0043]
进一步优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为27.3
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、27.6
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、28.5
±
0.2
°
、10.4
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、22.0
±
0.2
°
、13.7
±
0.2
°
、20.9
±
0.2
°
、22.3
±
0.2
°
、30.4
±
0.2
°
、19.8
±
0.2
°
、21.5
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0044]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型ii，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表2所示。
[0045]
表2
[0046][0047][0048]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧
啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型ii，其x-射线粉末衍射图谱基本如图3所示；其dsc图谱基本如图4所示。
[0049]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型iii的x-射线粉末衍射图谱在12.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在5.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在8.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者11.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在8.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0050]
优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为12.2
±
0.2
°
、5.9
±
0.2
°
、24.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为17.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、8.5
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、11.8
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为24.8
±
0.2
°
、8.8
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、27.4
±
0.2
°
、23.6
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、23.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0051]
进一步优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为12.2
±
0.2
°
、5.9
±
0.2
°
、24.4
±
0.2
°
、17.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、8.5
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、11.8
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、8.8
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、27.4
±
0.2
°
、23.6
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、23.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0052]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型iii，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表3所示。
[0053]
表3
[0054][0055]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型iii，其x-射线粉末衍射图谱基本如图5所示；其dsc图谱基本如图6所示。
[0056]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型iv的x-射线粉末衍射图谱在10.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0057]
优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.5
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、15.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为17.4
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、10.1
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0058]
更优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为26.9
±
0.2
°
、24.1
±
0.2
°
、14.4
±
0.2
°
、11.3
±
0.2
°
、24.5
±
0.2
°
、16.8
±
0.2
°
、20.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0059]
进一步优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.5
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、15.2
±
0.2
°
、17.4
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、10.1
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、24.1
±
0.2
°
、14.4
±
0.2
°
、11.3
±
0.2
°
、24.5
±
0.2
°
、16.8
±
0.2
°
、20.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0060]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型iv，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表4所示。
[0061]
表4
[0062][0063][0064]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧
啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型iv，其x-射线粉末衍射图谱基本如图7所示；其dsc图谱基本如图8所示。
[0065]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型v的x-射线粉末衍射图谱在13.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在18.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在25.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在12.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在14.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在30.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0066]
优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为13.9
±
0.2
°
、18.1
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.7
±
0.2
°
、25.9
±
0.2
°
、12.9
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0067]
更优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为30.7
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、15.8
±
0.2
°
、31.8
±
0.2
°
、29.5
±
0.2
°
、29.8
±
0.2
°
、22.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0068]
进一步优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为13.9
±
0.2
°
、18.1
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、25.9
±
0.2
°
、12.9
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、15.8
±
0.2
°
、31.8
±
0.2
°
、29.5
±
0.2
°
、29.8
±
0.2
°
、22.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0069]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型v，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表5所示。
[0070]
表5
[0071]
[0072][0073]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型v，其x-射线粉末衍射图谱基本如图9所示；其dsc图谱基本如图10所示。
[0074]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型vi的x-射线粉末衍射图谱在10.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在14.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0075]
优选地，，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.3
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、17.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为24.6
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、10.8
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0076]
更优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为24.9
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、30.2
±
0.2
°
、28.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、5.4
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0077]
进一步优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.3
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、17.2
±
0.2
°
、24.6
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、10.8
±
0.2
°
、24.9
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、30.2
±
0.2
°
、28.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、5.4
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0078]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型vi，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表6所示。
[0079]
表6
[0080][0081]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型vi，其x-射线粉末衍射图谱基本如图11所示；其dsc图谱基本如图12所示。
[0082]
在本发明的优选方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型vii的x-射线粉末衍射图谱在10.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.7
±
0.2
°
处具
有衍射峰；或者在25.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在11.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在25.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在5.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；
[0083]
优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.6
±
0.2
°
、15.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为25.1
±
0.2
°
、11.0
±
0.2
°
、20.1
±
0.2
°
、7.6
±
0.2
°
、25.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；
[0084]
更优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为5.5
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、30.3
±
0.2
°
、23.9
±
0.2
°
、15.9
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；
[0085]
进一步优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.6
±
0.2
°
、15.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、25.1
±
0.2
°
、11.0
±
0.2
°
、20.1
±
0.2
°
、7.6
±
0.2
°
、25.5
±
0.2
°
、5.5
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、30.3
±
0.2
°
、23.9
±
0.2
°
、15.9
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
[0086]
在本发明进一步优选地实施方式中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型vii，使用cu-kα辐射，以2θ角和晶面间距d值表示的x-射线特征衍射峰如表7所示。
[0087]
表7
[0088]
[0089][0090]
本发明化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型vii，其x-射线粉末衍射图谱基本如图13所示。
[0091]
在本发明进一步优选的方案中，化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型i、晶型ii、晶型iii、晶型iv、晶型v、晶型vi和晶型vii的x-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与图1、图3、图5、图7、图9、图11和图13对应位置衍射峰的2θ误差为
±
0.2
°
～
±
0.5
°
，优选
±
0.2
°
～
±
0.3
°
，最优选
±
0.2
°
。
[0092]
在本发明进一步优选的方案中，所述晶型为无水物。
[0093]
在本发明另一优选的方案中，所述晶型为水合物，水的个数为0-3，优选0、0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0、0.5、1、2或3。
[0094]
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物晶型的制备方法，具体包括如下步骤：
[0095]
1)称取适量的自由碱，用不良溶剂混悬；
[0096]
2)以上所得混悬液在0～50℃温度下振摇1～15天；
[0097]
3)将以上混悬液快速离心，去除上清液，干燥得到目标产物；
[0098]
其中：
[0099]
所述的不良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、氯仿、异丙醇、正丁醇、异丁醇、甲苯、n，n-二甲基甲酰胺、n，n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、丙酮、甲苯、二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、甲酸乙酯和醋酸异丙酯中的一种或多种。
[0100]
本发明还提供了一种优选方案，还涉及一种药物组合物，其含有有效量的上述任一化合物的晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0101]
本发明进一步还涉及任一上述的化合物晶型或上述药物组合物在制备p2x3抑制
剂药物中的应用。
[0102]
本发明还提供任一上述化合物的晶型或组合物在制备神经源性疾病药物中的用途；优选地所述神经源性疾病选自妇科疾病、泌尿道疾病状态、呼吸障碍疾病或疼痛相关疾病或病症，更优选子宫内膜异位症、膀胱过度活动症、肺纤维化或慢性咳嗽。
[0103]
在本发明进一步优选的实施方式中，所述疼痛相关疾病或病症选自神经性疼痛或子宫肌瘤相关的疼痛或不适。
[0104]
发明的详细说明
[0105]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0106]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。
[0107]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环己基、环戊基和环庚基。
[0108]
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
[0109]
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至8个环原子；进一步优选包含1-3氮原
子的3-8元杂环基，任选地，被1-2个氧原子、硫原子、氧代基取代，包括含氮单环杂环基、含氮螺杂环基或含氮稠杂环基。
[0110]
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
[0111]
等。
[0112]
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
[0113]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至12元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，包括苯并5-10元杂芳基、苯并3-8元环烷基和苯并3-8元杂烷基，优选苯并5-6元杂芳基、苯并3-6元环烷基和苯并3-6元杂烷基，其中杂环基为含1-3氮原子、氧原子、硫原子的杂环基；或者还包含含苯环的三元含氮稠环。
[0114]
其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
[0115][0115]
等。
[0116]
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0117]
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至12元，更优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、哒嗪基、吡嗪基等，优选吡啶基、噁二唑基、三唑基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、哒嗪基、吡嗪基或噻唑基；更优选吡啶基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、哒嗪基、吡嗪基和噁唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环
烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
[0118][0118]
等。
[0119]
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0120]
术语“烷氧基”指-o-(烷基)和-o-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基，烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0121]
术语“烷硫基”指-s-(烷基)和-s-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷硫基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基，烷硫基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0122]“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0123]“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
[0124]“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0125]“烯基”指链烯基，又称烯烃基，其中所述的烯基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0126]“炔基”指(ch≡c-)，其中所述的炔基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0127]“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0128]“x选自a、b、或c”、“x选自a、b和c”、“x为a、b或c”、“x为a、b和c”等不同用语均表达了相同的意义，即表示x可以是a、b、c中的任意一种或几种。
[0129]
本发明所述的氢原子均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢原子也均可被氘原子取代。
[0130]“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以
基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺自由碱晶型v的xrpd图示。
[0144]
图10为2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺自由碱晶型iv的dsc图示。
[0145]
图11为2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺自由碱晶型vi的xrpd图示。
[0146]
图12为2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺自由碱晶型vi的dsc图示。
[0147]
图13为2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺自由碱晶型vii的xrpd图示。
具体实施方式
[0148]
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
[0149]
实施例
[0150]
本发明的化合物结构是通过核磁共振(nmr)或/和液质联用谱(lc-ms)来确定的。nmr化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker avance-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)，氘代甲醇(cd3od)和氘代氯仿(cdcl3)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0151]
液质联用谱lc-ms的测定用agilent 1200infinity series质谱仪。hplc的测定使用安捷伦1200dad高压液相谱仪(sunfire c18 150
×
4.6mm谱柱)和waters 2695-2996高压液相谱仪(gimini c
18 150
×
4.6mm谱柱)。
[0152]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，tlc采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
[0153]
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
[0154]
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
[0155]
实施例1
[0156]
2-(2-(叔丁基)-5-氧吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0157][0158]
第一步：n-(3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-基)-2-氯烟酰胺的制备
[0159][0160]
冰浴条件下向2-氯烟酸(1.57g，9.96mmol)的dmf(30ml)溶液中依次加入3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺(2.77g,19.93mmol)，dipea(6.2g,49.8mmol)和hatu(5.4g,0.144mmol)，撤去冰浴后搅拌1h。混合物经制备得到实施例1-1(2.5g,90％)。
[0161]
ms m/z(esi):279.7[m+h]
+
.
[0162]
第二步：2-(叔丁基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-5(4h)-酮的制备
[0163][0164]
向实施例1-1(2.5g,8.97mmol)的dmf(50ml)溶液中加入碳酸钾(1.61g,11.66mmol)and 1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(dabco)(150.9mg,1.35mmol)，反应液在室温下搅拌16小时。混合物经制备得到实施例1-2(2.1g,97％)。
[0165]
ms m/z(esi):279.7[m+h]
+
.
[0166]
第三步：2-(2-(叔丁基)-5-氧吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0167][0168]
室温下向实施例1-2(1.5g，6.19mmol)的dmf(30ml)的溶液中加入碳酸钾(4.28g，30.96mmol)和实施例1-3(4.33g,18.57mmol)。将混合物加至热80℃，搅拌反应2h。冷却后，加入水，将沉淀过滤并用乙酸乙酯洗涤，纯化得到实施例1(656mg，收率：27％)。
[0169]
ms m/z(esi):395.4[m+h]
+
.
[0170]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.01(s,1h),8.80
–
8.78(m,1h),8.47(d,j＝7.6hz,1h),8.30(d,j＝2.8hz,1h),8.01
–
7.94(m,1h),7.73
–
7.66(m,1h),7.49(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),6.34(s,1h),4.87(s,2h),1.26(s,9h).
[0171]
实施例2
[0172]
2-(2-溴-5-氧吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0173][0174]
实施例2的合成参照实施例1的方法,以3-溴-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺,得到目标化合物(500mg,68％收率)。
[0175]
ms m/z(esi):418.2[m+h]
+
.
[0176]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.32(s,1h),9.85(d,j＝7.6hz,1h),8.74(d,j＝6.4hz,1h),8.40(d,j＝2.8hz,1h),8.05-8.00(m,1h),7.78-7.73(m,1h),7.23-7.17(m,1h),6.31(s,1h),5.52(s,2h).
[0177]
实施例3
[0178]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-甲基-5-氧代吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)基)乙酰胺
[0179][0180]
实施例3的合成参照实施例1的方法,以3-甲基-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺,得到目标化合物(20mg,26％收率)。
[0181]
ms m/z(esi):353.3[m+h]
+
.
[0182]
实施例4
[0183]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-乙基-5-氧代吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)基)乙酰胺
[0184][0185]
实施例4的合成参照实施例1的方法,以3-乙基-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺,得到目标化合物(15mg,36％收率)。
[0186]
ms m/z(esi):367.4[m+h]
+
.
[0187]
实施例5
[0188]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-异丙基-5-氧代吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)基)乙酰胺
[0189][0190]
实施例5的合成参照实施例1的方法,以3-异丙基-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺,得到目标化合物(15mg,36％收率)。
[0191]
ms m/z(esi):381.4[m+h]
+
.
[0192]
实施例6
[0193]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-异丙烯基-5-氧代吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)基)乙酰胺
[0194][0195]
实施例2(100mg,0.24mmol)，异丙烯基硼酸(41.2mg,0.48mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(19.2mg,0.024mmol)和碳酸铯(232.8mg,0.72mmol)在二氧六环(4ml)和水(1ml)中100℃微波搅拌1小时。旋干反应液，制备液相纯化得到实施例6(54mg,产率60％)。
[0196]
ms m/z(esi):379.4[m+h]
+
.
[0197]
实施例7
[0198]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(5-氧代-2-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0199][0200]
实施例7的合成参照实施例1的方法,以3-三氟甲基-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁
基)-1h-吡唑-5-胺,得到目标化合物(15mg,36％收率)。
[0201]
ms m/z(esi):407.3[m+h]
+
.
[0202]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),8.96(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),8.65(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),8.37(d,j＝3.2hz,1h),8.07-8.02(m,1h),7.78-7.73(m,2h),7.05(s,1h),5.02(s,2h).
[0203]
实施例8
[0204]
2-(2-氨基-5-氧吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0205][0206]
第一步：5-氧代-4,5-二氢吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-2-羧酸甲基的制备
[0207][0208]
实施例8-1的合成方法，参考实施例1-2的合成方法，以5-氨基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯代替3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺，得到实施例8-1(500mg，73％)。
[0209]
ms：m/z(esi):245.2[m+h]
+
.
[0210]
第二步：4-(2-((5-氟吡啶-2-基)氨基)-2-氧乙基)-5-氧代-4,5-二氢吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-2-羧酸甲酯的制备
[0211][0212]
实施例8-2的合成方法，参考实施例1的合成方法，以实施例8-1为原料，得到标题化合物实施例8-2(500mg，51％)。
[0213]
ms m/z(esi):397.3[m+h]
+
.
[0214]
第三步：4-(2-((5-氟吡啶-2-基)氨基)-2-氧乙基)-5-氧代-4,5-二氢吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-2-羧酸的制备
[0215][0216]
室温下向实施例8-2(490mg，1.24mmol)的四氢呋喃(10ml)的溶液中加入lioh(519mg，12.36mmol)的水(2ml)溶液。混合物室温搅拌反应3h，然后用1m hcl调节ph至3左右，浓缩至干得到实施例8-3(470mg，99％)。
[0217]
ms m/z(esi):383.3[m+h]
+
.
[0218]
第四步：2-(2-氨基-5-氧吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0219][0220]
向实施例8-3(450mg，1.2mmol)在1,4-二氧六环(10ml)、et3n(33μl，0.24mmol)和bop试剂(598mg，1.35mmol)中的溶液中加入胺，并在室温下搅拌20min。添加叠氮化钠(160mg，2.46mmol)和四丁基溴化铵(786mg，2.46mmol)，并继续搅拌1小时。然后用1,4-二氧六环(12ml)稀释反应，加入2m h2so4(4ml)水溶液，并在100℃下加热2h。蒸发溶剂，将残渣稀释水，用乙酸乙酯萃取。用盐水清洗有机层，无水硫酸钠上干燥，并蒸发溶剂。柱层析纯化得到实施例8(360mg，86％)。
[0221]
ms m/z(esi):354.3[m+h]
+
.
[0222]
实施例9
[0223]
2-(2-环丙基-5-氧吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0224][0225]
实施例9的合成方法，参考实施例6的合成方法，以环丙基硼酸代替乙丙烯硼酸，得到标题化合物实施例9(8mg，51％)。
[0226]
ms m/z(esi):378.4[m+h]
+
.
[0227]
实施例10
[0228]
2-(2-(叔丁基)-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0229][0230]
实施例10的合成方法，参考实施例1的合成方法，以2-氯-6-三氟甲基烟酸为原料，得到标题化合物实施例10(25mg，46％)。
[0231]
ms m/z(esi):463.1[m+h]
+
.
[0232]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.09(s,1h),7.78(d,j＝8.0hz,1h),8.38(d,j＝2.8hz,1h),8.09-8.04(m,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.79-7.74(m,1h),6.52(s,1h),4.95(s,2h),1.34(s,9h).
[0233]
实施例11
[0234]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-甲基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑啉[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0235]
[0236]
实施例11的合成方法，参考实施例2的合成方法，得到标题化合物实施例11(18mg，30％)。
[0237]
ms m/z(esi):421.1[m+h]
+
.
[0238]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.06(s,1h),8.80(d,j＝8.0hz,1h),8.37(s,1h),8.07-8.03(m,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.79-7.73(m,1h),6.28(s,1h),4.95(s,2h),2.33(s,3h).
[0239]
实施例12
[0240]
2-(2-乙基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0241][0242]
第一步：5-氨基-3-乙基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0243][0244]
将3-乙基-1h-吡唑-5-胺(2.0g，18.0mmol)溶解在无水二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(2.2g，21.6mmol)和二碳酸二叔丁酯(4.7g，21.6mmol)，室温反应16小时。反应液依次用水(50ml*2)、饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗产品柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0～20％)，得到标题产物实施例12-1(3.4g)，产率：89.5％。
[0245]
ms:m/z(esi):212.1[m+h]
+
.
[0246]
第二步：5-氨基-3-乙基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0247][0248]
将实施例12-1(3.4g，16.1mmol)溶解在无水二氯甲烷(60ml)中，加入三乙胺(5.4g,53.1mmol)，氮气保护下在0℃滴加现制备的2-氯-6-三氟甲基烟酸酰氯(4.3g，17.7mmol)的二氯甲烷溶液(50ml)，加完室温反应30分钟。反应液依次用水(200ml*2)、饱和氯化钠溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗产品硅胶柱层析
(乙酸乙酯/石油醚＝0～20％)，得到实施例12-2(2.6g)，产率：38.2％。
[0249]
ms:m/z(esi):319.1[m-boc+h]
+
.
[0250]
第三步：n-(3-乙基-1h-吡唑-5-基)-2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺的制备
[0251][0252]
将实施例12-2(2.6g,6.2mmol)溶解在无水二氯甲烷(10ml)中，加入盐酸二氧六环溶液(4m,20ml)，室温反应4小时。反应液直接旋干，得到实施例12-3(1.9g)，产率：96.0％。
[0253]
ms:m/z(esi):319.0[m+h]
+
.
[0254]
第四步：2-乙基-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-5(4h)-酮
[0255][0256]
将实施例12-3(1.9g，6.0mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入碳酸钾(2.5g，18.0mmol)，加热至120℃反应2小时。反应液冷却至室温，直接用于下步反应。
[0257]
ms:m/z(esi):283.1[m+h]
+
.
[0258]
第五步：2-(2-乙基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0259][0260]
在实施例12-4(1.0g，3.5mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(20ml)反应液中，加入碳酸钾(1.5g，10.6mmol)和2-溴-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺(0.99g，4.2mmol)，40℃反应2小时。反应液冷却至室温，倒入300ml水中，乙酸乙酯萃取(200ml*3)。合并有机相，依次用水(200ml*2)、饱和氯化钠溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗产品乙酸乙酯重结晶，得到实施例12。
[0261]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.06(s,1h),8.79(d,j＝7.6hz,1h),8.37(s,1h),8.07
–
8.03(m,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.79
–
7.72(m,1h),6.36(s,1h),4.96(s,2h),2.70(q,j＝7.6hz,2h),1.25(t,j＝7.6hz,3h).
[0262]
ms m/z(esi):435.1[m+h]
+
.
[0263]
实施例13
[0264]
2-(2-环丙基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0265][0266]
实施例13的合成方法，参考实施例1的合成方法，得到标题化合物实施例13(17mg，28％)。
[0267]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.05(s,1h),8.78(d,j＝8.0hz,1h),8.37(s,1h),8.08
–
8.02(m,1h),7.98(d,j＝8.4hz,1h),7.79-7.73(m,1h),6.23(s,1h),4.91(s,2h),2.11
–
2.04(m,1h),1.04-0.98(m,2h),0.82
–
0.78(m,2h).
[0268]
ms m/z(esi):447.1[m+h]
+
.
[0269]
实施例14
[0270]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-异丙基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0271][0272]
实施例14的合成方法，参考实施例4的合成方法，得到标题化合物实施例31(10mg，22％)。
[0273]
ms m/z(esi):449.1[m+h]
+
.
[0274]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.06(s,1h),8.79(d,j＝8.0hz,1h),8.37(s,1h),8.09-8.03(m,1h),8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.79-7.74(m,1h),6.42(s,1h),4.96(s,2h),3.08-3.01(m,1h),1.29(s,3h),1.27(s,3h).
[0275]
实施例15
[0276]
2-(2-溴-5-氧-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0277]
第一步：5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0278][0279]
将3-溴-1h-吡唑-5-胺(10.0g，61.7mmol)溶解在无水二氯甲烷(100ml)中，加入三乙胺(7.48g，74.1mmol)和二碳酸二叔丁酯(16.0g，74.1mmol)，室温反应16小时。反应液依次用水(50ml*2)、饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗产品柱层析(乙酸乙酯/二氯甲烷＝0～20％)，得到标题产物5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例15-1(14.5g)，产率：89.5％。
[0280]
ms:m/z(esi):262.0[m+h]
+
[0281]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.62(s,2h),5.41(s,1h),1.56(s,9h).
[0282]
第二步：5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0283][0284]
将5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例15-1(14.5g，55.3mmol)溶解在无水二氯甲烷(200ml)中，加入三乙胺(18.5g,183mmol)，氮气保护下在0℃滴加现制备的2-氯-6-三氟甲基烟酸酰氯(13.0g，61.0mmol)的二氯甲烷溶液(50ml)，加完室温反应30分钟。反应液依次用水(200ml*2)、饱和氯化钠溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗产品硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0～20％)，得到5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例15-2(9.5g)，产率：38.2％。
[0285]
ms:m/z(esi):371.0[m-boc+h]
+
[0286]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.08(s,1h),8.40(d,j＝7.6hz,1h),8.14(d,j＝7.6hz,1h),6.96(s,1h),1.58(s,9h).
[0287]
第三步：n-(3-溴-1h-吡唑-5-基)-2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺的制备
[0288][0289]
将5-氨基-3-溴-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例51-2(8.0g,17.1mmol)溶解在无水二氯甲烷(20ml)中，加入盐酸二氧六环溶液(4m,40ml)，室温反应4小时。反应液直接旋干，得到n-(3-溴-1h-吡唑-5-基)-2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺实施例15-3(6.2g)，产率：98.4％。
[0290]
ms:m/z(esi):368.9[m+h]
+
[0291]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),8.39(d,j＝7.6hz,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),6.53(s,1h).
[0292]
第四步：2-溴-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-5(4h)-酮的制备
[0293][0294]
将n-(3-溴-1h-吡唑-5-基)-2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺实施例15-3(6.2g，16.8mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(80ml)中，加入碳酸钾(6.96g，50.4mmol)，加热至120℃反应2小时。反应液冷却至室温，直接用于下步反应。
[0295]
ms:m/z(esi):333.0[m+h]
+
[0296]
第五步：2-(2-溴-5-氧-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0297][0298]
在2-溴-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-5(4h)-酮实施例51-4(na，16.8mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(80ml)反应液中，加入碳酸钾(6.96g，50.4mmol)和2-溴-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺(4.7g，20.2mmol)，40℃反应2小时。反应液冷却至室温，倒入300ml水中，乙酸乙酯萃取(200ml*3)。合并有机相，依次用水(200ml*2)、饱和氯化钠溶液(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗产品乙酸乙酯重结晶，得到标题产物2-(2-溴-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺实施例15。
[0299]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.05(s,1h),8.84(d,j＝8.0hz,1h),8.37(s,1h),8.09(d,j＝8.0hz,1h),8.07
–
8.02(m,1h)，7.80
–
7.73(m,1h),6.78(s,1h),4.96(s,2h).
[0300]
ms m/z(esi):486.2[m+h]
+
.
[0301]
实施例16
[0302]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(5-氧-2,8-双(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0303][0304]
实施例16的合成方法，参考实施例1的合成方法，得到标题化合物实施例16(10mg，33％)。
[0305]
ms m/z(esi):475.3[m+h]
+
.
[0306]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(s,1h),8.91(d,j＝8.0hz,1h),8.37(d,j＝3.1hz,1h),8.19(d,j＝8.1hz,1h),8.14
–
7.98(m,1h),7.76(t,j＝8.8hz,1h),7.13(s,1h),5.04(s,2h).
[0307]
实施例17
[0308]
2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0309][0310]
第一步：2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0311][0312]
在室温下将实施例15(300mg，0.619mmol)和zn(cn)2(300mg，2.56mmol)，pd2(dba)3(20mg，0.022mmol)，pd(dppf)cl2(30mg，0.036mmol)和zn粉(10mg，0.154mmol)溶在dma(10ml)中，向里鼓氮气2分钟。然后微波加热140度反应8小时。冷却至室温，并用乙酸乙酯(50ml)萃取，有机相用饱和食盐水洗两遍。将有机相干燥(na2so4)，减压浓缩，送p-hplc(fa)得到100mg(38％收率)的标题化合物。
[0313]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.07(s,1h),8.92(d,j＝8.2hz,1h),8.37(d,j＝
3.1hz,1h),8.22(d,j＝7.9hz,1h),8.05(s,1h),7.77(t,j＝8.6hz,1h),7.24(s,1h),5.01(s,2h).
[0314]
ms m/z(esi):432.3[m+h]
+
.
[0315]
实施例18
[0316]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0317][0318]
第一步：n-(1h-吡唑-5-基)-2-氯烟酰胺的制备
[0319][0320]
冰浴条件下向2-氯烟酸(1.57g，9.96mmol)的dmf(30ml)溶液中依次加入1h-吡唑-5-胺(1.66g,19.93mmol)，dipea(6.2g,49.8mmol)和hatu(5.4g,0.144mmol)，撤去冰浴后搅拌1h。混合物经制备得到实施例18-1(2.0g,90％)。
[0321]
ms m/z(esi):291.0[m+h]
+
.
[0322]
第二步：吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-5(4h)-酮的制备
[0323][0324]
向实施例18-1(2.0g,8.97mmol)的dmf(50ml)溶液中加入碳酸钾(1.61g,11.66mmol)and 1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(dabco)(150.9mg,1.35mmol)，反应液在室温下搅拌16小时。混合物经制备得到实施例18-2(1.6g,97％)。
[0325]
ms m/z(esi):255.0[m+h]
+
.
[0326]
第三步：2-(2-(叔丁基)-5-氧吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0327][0328]
室温下向实施例18-2(1.5g，8.06mmol)的dmf(30ml)的溶液中加入碳酸钾(2.23g，16.11mmol)和实施例1-3(2.25g,9.67mmol)。将混合物加至热80℃，搅拌反应2h。冷却后，加入水，将沉淀过滤并用乙酸乙酯洗涤，纯化得到实施例18(2.1g，收率：78％)。
[0329]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.06(s,1h),8.83(d,j＝8.0hz,1h),8.37(d,j＝3.2hz,1h),8.06(d,j＝8.0hz,1h),8.05
–
8.02(m,1h),7.98(d,j＝2.0hz,1h),7.78
–
7.73(m,1h),6.46(s,1h),5.00(s,2h).
[0330]
ms m/z(esi):407.3[m+h]
+
.
[0331]
实施例19
[0332]
2-(2-氯-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0333][0334]
实施例19的合成参照实施例1的方法，以3-氯-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺，得到目标化合物(31mg,26％收率)。
[0335]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.05(s,1h),8.84(d,j＝8.1hz,1h),8.36(s,1h),8.15
–
7.99(m,2h),7.76(t,j＝9.0hz,1h),6.73(s,1h),4.96(s,2h).
[0336]
ms m/z(esi):441.7[m+h]
+
.
[0337]
实施例20
[0338]
2-(3-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺
[0339][0340]
实施例20的合成参照实施例1的方法，以4-氰基-1h-吡唑-5-胺替代3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-胺，得到目标化合物。
[0341]
第一步：5-氨基-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0342][0343]
将5-氨基-1h-吡唑-4-甲腈(2.0g，18.5mmol)溶解在无水二氯甲烷(40ml)中，加入三乙胺(3.74g，37.0mmol)和二碳酸二叔丁酯(4.44g，20.4mmol)，室温反应16小时。反应液减压浓缩，石油醚(50ml)打浆，得到标题产物5-氨基-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例20-1(3.5g)，产率：90.9％。
[0344]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.77(s,1h),7.63(s,2h),1.56(s,9h).
[0345]
第二步：5-(2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺)-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯的制备
[0346][0347]
将5-氨基-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例20-1(3.5g，16.8mmol)溶解在无水二氯甲烷(50ml)中，加入三乙胺(5.35g,7.37mmol)，氮气保护下在0℃滴加现制备的2-氯-6-三氟甲基烟酸酰氯(4.3g，17.6mmol)的二氯甲烷溶液(50ml)，加完室温反应1小时。反应液依次用水(50ml*2)、饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得粗产品硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0～40％)，得到5-(2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺)-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例20-2(2.8g)，产率：38.2％。
[0348]
ms:m/z(esi):432.8[m+nh4]
+
[0349]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.87(s,1h),9.23(s,1h),8.43(d,j＝7.6hz,1h),8.13(d,j＝7.6hz,1h),1.59(s,9h).
[0350]
第三步：2-氯-n-(4-氰基-1h-吡唑-5-基)-6-(三氟甲基)烟酰胺的制备
[0351][0352]
将5-(2-氯-6-(三氟甲基)烟酰胺)-4-氰基-1h-吡唑-1-羧酸叔丁酯实施例20-2(2.8g,6.73mmol)溶解在无水二氯甲烷(10ml)中，加入盐酸二氧六环溶液(4m,30ml)，室温反应5小时。反应液直接旋干，得到2-氯-n-(4-氰基-1h-吡唑-5-基)-6-(三氟甲基)烟酰胺实施例20-3(2.1g)，产率：98.8％。
[0353]
ms:m/z(esi):315.8[m+h]
+
[0354]
第四步：5-氧代-8-(三氟甲基)-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-3-甲腈的制备
[0355][0356]
将2-氯-n-(4-氰基-1h-吡唑-5-基)-6-(三氟甲基)烟酰胺实施例20-3(2.1g，6.65mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入碳酸钾(1.84g，13.3mmol)，加热至120℃反应2小时。反应液冷却至室温，1m的稀盐酸调ph至6，乙酸乙酯萃取(100ml*2)。合并有机相，依次用水(100ml*2)、饱和氯化钠溶液(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，乙酸乙酯(15ml)打浆，得到5-氧代-8-(三氟甲基)-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-3-甲腈实施例20-4(1.3g)，产率：69.9％。
[0357]
ms:m/z(esi):279.8[m+h]
+
[0358]
第四步：2-(3-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的制备
[0359][0360]
将5-氧代-8-(三氟甲基)-4,5-二氢吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-3-甲腈实施例20-4(500mg，1.79mmol)溶解在n，n-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入碳酸钾(371mg，2.69mmol)和2-溴-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺(501mg，2.15mmol)，40℃反应2小时。反应液冷却至室温，倒入100ml水中，乙酸乙酯萃取(50ml*2)。合并有机相，依次用水(50ml*2)、饱
和氯化钠溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗产品乙酸乙酯打浆，所得母液减压浓缩后反向hplc制备，得到标题产物2-(3-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺实施例20。ms m/z(esi):432.3[m+h]
+
.
[0361]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.2(s,1h),8.93(d,j＝8.0hz,1h),8.58(s,1h),8.38(d,j＝3.2hz,1h),8.20(d,j＝8.0hz,1h),8.07-8.04(m,1h),7.81-7.75(m,1h),5.19(s,2h).
[0362]
实施例21
[0363]
n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-(羟甲基)-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺
[0364][0365]
第一步：n-(5-氟吡啶-2-基)-2-(2-(羟甲基)-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)乙酰胺的制备
[0366][0367]
0℃下，向实施例21-1(100mg，0.22mmol)(实施例21-1的合成方法参照实施例8-2)的thf(2ml)中的溶液中加入二异丁基氢化铝(1m的甲苯溶液，0.66ml，0.66mmol)，将混合物在室温搅拌过夜。加入rochelle's盐溶液(1.0m，5ml)；然后加入乙酸乙酯(5ml)，将得到的悬浮液在室温搅拌直至实现透明相分离，分离有机相，并用etoac(3
×
40ml)萃取水相。合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩纯化得到目标化合物(32mg，34％收率)。
[0368]
ms m/z(esi):437.1[m+h]
+
.
[0369]1h nmr(400mhz,dmso)δ11.06(s,1h),8.82(d,j＝7.9hz,1h),8.37(s,1h),8.02(m,2h),7.76(s,1h),6.40(s,1h),5.44(s,1h),5.00(s,2h),4.56(s,2h).
[0370]
生物学测试评价
[0371]
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
[0372]
测试例1、本发明化合物在稳定表达1321n1-hp2x3受体细胞中对钙离子流动能力影响的测定
[0373]
实验目的：
[0374]
测定化合物对1321n1-hp2x3受体的抑制活性。
[0375]
实验仪器：
[0376]
384孔-细胞板(corning；3712)；
[0377]
384孔-化合物板(corning；3657)；
[0378]
384孔-试验板(labcyte；p-05525)；
[0379]
flipr(molecular devices)。
[0380]
实验试剂：
[0381]
dmem(gibco；11965)；
[0382]
fbs(gibco；10099-141)；
[0383]
潮霉素b(invitrogen，10687010)；
[0384]
matrix(thermo；5416)；
[0385]
dmso(sigma；d2650)；
[0386]
hbss(invitrogen；14025)；
[0387]
hepes(invitrogen；15630080)；
[0388]
probenecid(sigma；p8761)；
[0389]
versene(gibco；15040066)；
[0390]
g418(sigma；g5013)；
[0391]
calcium 4assay kit(molecular devices；r8141)；
[0392]
α，β-meatp(sigma；m6517)；
[0393]
atp hydrolytic enzyme(sigma；a7646)；
[0394]
稳转细胞株：1321n1-hp2x3(由上海睿智化学研究有限公司提供)。
[0395]
实验方法：
[0396]
1.试剂配制：
[0397]
assay buffer：1*hbss+20mm hepes；
[0398]
细胞培养基：dmem+10％fbs+75μg/ml潮霉素b+300μg/ml g418；
[0399]
铺板培养基：dmem+10％dpbs；
[0400]
0.5*dye：10*dye stock+1.25probenecid+1*assay buffer+0.5u/ml atp hydrolytic enzyme；
[0401]
2.细胞株培养于细胞培养基中，37℃，5％co2至70％～90％融合度，弃培养基，取出细胞，加2ml versene，置37℃培养箱2-5min，加10ml铺板培养基收集细胞，细胞计数，每孔加50μl(1
×
104个细胞/well的密度)播种到384孔-试验板孵育16-24小时(至少过夜)。
[0402]
3.丢弃培养液，加入30μl 1x染料，37℃避光孵育60min。
[0403]
4.用dmso将化合物粉末溶解成20mm储备液，准备检测需要浓度的180x化合物并梯度稀释10个浓度点。
[0404]
5.准备化合物板：用echo转移500nl 180x化合物到化合物板(flipr用的source板)中，每孔加入30μl assay buffer，轻微振摇20-40分钟。
[0405]
6.上机检测：每孔取15μl 3x化合物加入细胞板，flipr仪器加样，检测钙信号，15分钟后，每孔加22.5μl 3x激动剂(ec
80
浓度)，检测钙信号。
[0406]
实验数据处理方法：
[0407]
通过flipr读取钙信号值。实验中每个采样时间点的计算后的输出结果是340/510nm与380/510nm波长信号的比值。最大值减去最小值的计算来源自比值信号曲线。
[0408]
使用graphpad prism拟合百分比抑制率和十点浓度数据至参数非线性逻辑公式计算出化合物的ic
50
值。
[0409]
实验结果：
[0410]
本发明实施例化合物在1321n1-hp2x3受体细胞功能钙流试验中的结果如表8所示：
[0411]
表8
[0412][0413][0414]
实验结论：
[0415]
以上数据显示，本发明所示的化合物在1321n1-hp2x3受体细胞功能钙流试验中显示出良好的抑制作用。
[0416]
测试例2、本发明化合物在稳定表达1321n1-hp2x2/3受体细胞中对钙离子流动能力影响的测定
[0417]
实验目的：
[0418]
测定化合物对1321n1-hp2x2/3受体的抑制活性。
[0419]
实验仪器：
[0420]
384孔-细胞板(corning；3712)；
[0421]
384孔-化合物板(corning；3657)；
[0422]
384孔-试验板(labcyte；p-05525)；
[0423]
flipr(molecular devices)。
[0424]
实验试剂：
[0425]
dmem(gibco；11965)；
[0426]
fbs(gibco；10099-141)；
[0427]
潮霉素b(invitrogen，10687010)；
[0428]
matrix(thermo；5416)；
[0429]
dmso(sigma；d2650)；
[0430]
hbss(invitrogen；14025)；
[0431]
hepes(invitrogen；15630080)；
[0432]
probenecid(sigma；p8761)；
[0433]
versene(gibco；15040066)；
[0434]
g418(sigma；g5013)；
[0435]
calcium 4assay kit(molecular devices；r8141)；
[0436]
α，β-meatp(sigma；m6517)；
[0437]
atp hydrolytic enzyme(sigma；a7646)；
[0438]
稳转细胞株：1321n1-hp2x2/3(由上海睿智化学研究有限公司提供)。
[0439]
实验方法：
[0440]
1.试剂配制：
[0441]
assay buffer：1*hbss+20mm hepes；
[0442]
细胞培养基：dmem+10％fbs+75μg/ml潮霉素b+150μg/ml g418；
[0443]
铺板培养基：dmem+10％dpbs；
[0444]
0.5*dye：10*dye stock+1.25probenecid+1*assay buffer+0.5u/ml atp hydrolytic enzyme；
[0445]
2.细胞株培养于细胞培养基中，37℃，5％co2至70％～90％融合度，弃培养基，取出细胞，加2ml versene，置37℃培养箱2-5min，加10ml铺板培养基收集细胞，细胞计数，每孔加50μl(1
×
104个细胞/well的密度)播种到384孔-试验板孵育16-24小时(至少过夜)。
[0446]
3.丢弃培养液，加入30μl 1x染料，37℃避光孵育60min。
[0447]
4.用dmso将化合物粉末溶解成20mm储备液，准备检测需要浓度的180x化合物并梯度稀释10个浓度点。
[0448]
5.准备化合物板：用echo转移500nl 180x化合物到化合物板(flipr用的source板)中，每孔加入30μl assay buffer，轻微振摇20-40分钟。
[0449]
6.上机检测：每孔取15μl 3x化合物加入细胞板，flipr仪器加样，检测钙信号，15分钟后，每孔加22.5μl 3x激动剂(ec
80
浓度)，检测钙信号。
[0450]
实验数据处理方法：
[0451]
通过flipr读取钙信号值。实验中每个采样时间点的计算后的输出结果是340/510nm与380/510nm波长信号的比值。最大值减去最小值的计算来源自比值信号曲线。
[0452]
使用graphpad prism拟合百分比抑制率和十点浓度数据至参数非线性逻辑公式计算出化合物的ic
50
值。
[0453]
实验结果：
[0454]
本发明实施例化合物对1321n1-hp2x2/3受体细胞功能钙流的试验，结果如表9所示：
[0455]
表9
[0456][0457]
实验结论：
[0458]
以上数据显示，本发明所示的化合物在1321n1-h2x2/3受体细胞功能钙流试验中显示出较小的抑制作用。
[0459]
测试例3、balb/c小鼠药代动力学测定
[0460]
1.研究目的：
[0461]
以balb/c小鼠为受试动物，研究以下化合物实施例，在5mg/kg剂量下口服给药在小鼠体内血浆的药代动力学行为。
[0462]
2.试验方案
[0463]
2.1试验药品：
[0464]
本发明实施例，自制。
[0465]
2.2试验动物：
[0466]
balb/c mouse 6只/实施例，雄性，上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(scxk(沪)2013-0006n0.311620400001794)。
[0467]
2.3药物配制：
[0468]
称取5g羟乙基纤维素(hec，cmc-na，粘度：800-1200cps)，溶于1000ml纯净水，加入10g tween80。混合均匀成澄清溶液。
[0469]
2.4给药：
[0470]
balb/c小鼠，雄性；禁食一夜后分别p.o.，剂量为5mg/kg，给药体积10ml/kg。
[0471]
2.5样品采集：
[0472]
小鼠给药前和给药后，在0、0.5、1、2、4、6、8和24小时，采用眼眶采血0.04ml，置于edta-k2试管中，4℃ 6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存。
[0473]
2.6样品处理：
[0474]
1)血浆样品20ul加入160ul乙腈沉淀，混合后3500
×
g离心5～20分钟。
[0475]
2)取处理后上清溶液100ul进行lc/ms/ms分析待测化合物的浓度。
[0476]
2.7液相分析
[0477]
·
液相条件：shimadzu lc-20ad泵
[0478]
·
质谱条件:ab sciex api 4000质谱仪
[0479]
·
谱柱：phenomenex gemiu 5um c18 50
×
4.6mm
[0480]
·
移动相：a液为0.1％甲酸水溶液，b液为乙腈
[0481]
·
流速：0.8ml/min
[0482]
·
洗脱时间：0-4.0分钟，洗脱液如下：
[0483]
表10
[0484][0485][0486]
3.试验结果与分析
[0487]
药代动力学主要参数用winnonlin 8.2计算得到，小鼠药代实验结果见下表11：
[0488]
表11小鼠药代实验结果
[0489][0490]
注：0.5％cmc-na(1％吐温80)
[0491]
实验结论：
[0492]
从表中小鼠药代实验结果可以看出，本发明实施例化合物表现出良好的代谢性质，暴露量auc和最大血药浓度c
max
都表现良好。
[0493]
测试例4、大鼠药代动力学测定
[0494]
1.研究目的：
[0495]
以sd大鼠为受试动物，研究以下化合物实施例，在5mg/kg剂量下口服给药在大鼠体内血浆的药代动力学行为。
[0496]
2.试验方案
[0497]
2.1试验药品：
[0498]
本发明实施例，自制。
[0499]
2.2试验动物：
[0500]
sd大鼠每组3只，雄性。上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号(scxk(沪)2013-0006n0.311620400001794)。
[0501]
2.3药物配制：
[0502]
称取5g羟乙基纤维素(hec，cmc-na，粘度：800-1200cps)，溶于1000ml纯净水，加入10g tween80。混合均匀成澄清溶液。
[0503]
2.4给药：
[0504]
sd大鼠每组3只，雄性，禁食一夜后分别po，剂量为5mg/kg，给药体积10ml/kg。
[0505]
2.5样品采集：
[0506]
大鼠给药前和给药后，在0、0.5、1、2、4、6、8和24小时，采用颈静脉采血0.2ml，置于edta-k2试管中，4℃ 6000rpm离心6min分离血浆，于-80℃保存。
[0507]
2.6样品处理：
[0508]
1)血浆样品40ul加入160ul乙腈沉淀，混合后3500
×
g离心5～20分钟。
[0509]
2)取处理后上清溶液100ul进行lc/ms/ms分析待测化合物的浓度。
[0510]
2.7液相分析
[0511]
·
液相条件：shimadzu lc-20ad泵
[0512]
·
质谱条件:ab sciex api 4000质谱仪
[0513]
·
谱柱：phenomenex gemiu 5um c18 50
×
4.6mm
[0514]
·
移动相：a液为0.1％甲酸水溶液，b液为乙腈
[0515]
·
流速：0.8ml/min
[0516]
·
洗脱时间：0-4.0分钟，洗脱液如下：
[0517]
表12
[0518][0519]
3.试验结果与分析
[0520]
药代动力学主要参数用winnonlin 8.2计算得到，大鼠药代实验结果见下表13：
[0521]
表13大鼠药代实验结果
[0522]
[0523]
注：0.5％cmc-na(1％吐温80)
[0524]
4.实验结论：
[0525]
从表中大鼠药代实验结果可以看出，5mg/kg剂量下，本发明实施例化合物表现出良好的代谢性质，暴露量auc和最大血药浓度c
max
都表现良好。
[0526]
测试例5、肝微粒体代谢稳定性试验
[0527]
1.实验目的：
[0528]
本实验的目的是检测实施例化合物在小鼠、大鼠、犬和人肝微粒体中的稳定性情况。
[0529]
2.实验步骤：
[0530]
2.1配制化合物工作液
[0531]
化合物的工作液配制：将化合物储备溶液加入磷酸缓冲液，终浓度为20μm。
[0532]
2.2配制肝微粒体工作液
[0533]
用100mm磷酸缓冲液稀释至终浓度为0.625mg/ml。
[0534]
2.3准备nadph和udpga
[0535]
称取nadph(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)和udpga(尿苷二磷酸葡萄糖醛酸)，加入100mm磷酸缓冲液，终浓度均为20mm。
[0536]
2.4准备打孔剂
[0537]
称取1mg alamethicin(丙甲菌素)加入200μl dmso，配制成5mg/ml的溶液。再用磷酸缓冲液稀释至终浓度为50μg/ml。
[0538]
2.5配制反应终止液
[0539]
终止液：含有100ng/ml的盐酸拉贝洛尔和400ng/ml甲苯磺丁脲为内标的冷乙腈。
[0540]
2.6孵育流程
[0541]
在96孔板中依次加入400μl配制好的肝微粒体、25μl化合物工作液和25μl alamethicin，于37℃预孵育10min。随后加入50μl配制好的nadph/udpga启动反应，37℃孵育，反应体系的总体积为500μl，各成分最终含量如下：
[0542]
表14
[0543]
成分含量肝微粒体0.5mg/ml化合物1μmnadph2mmudpga2mmalamethicin2.5μg/ml
[0544]
2.7样品分析
[0545]
2.7.1谱条件：
[0546]
仪器：岛津lc-30ad；
[0547]
谱柱：c18(50*4.6mm，5μm粒径)；
[0548]
流动相：a：0.1％甲酸溶液，b：甲醇
[0549]
冲洗梯度：0.2～1.6min 5％a到95％a，3.0～3.1min 95％a到5％a
[0550]
运行时间：4.0min。
[0551]
2.7.2质谱条件：
[0552]
仪器：api5500型液相谱质谱联用仪，ab sciex公司；
[0553]
离子源：电喷雾离子化源(esi)；
[0554]
干燥气体：n2，温度500℃；
[0555]
电喷雾电压：5000v；
[0556]
检测方式：正离子检测；
[0557]
扫描方式：反应监测(mrm)方式。
[0558]
3.实验结果：
[0559]
表15实施例化合物肝微粒体代谢稳定性结果
[0560][0561]
4.实验结论：
[0562]
以上数据显示，本发明实施例化合物在小鼠、大鼠、犬和人的肝微粒体中代谢稳定性良好。
[0563]
测试例6、血浆蛋白结合率实验
[0564]
1.实验目的：
[0565]
本实验方法的目的是检测实施例化合物在血浆中的血浆蛋白结合情况。
[0566]
2.实验仪器及材料：
[0567]
液相质谱联用仪、离心机、涡旋仪、移液、连续加液器、96孔板、组织匀浆机(组织样品分析时使用)、50％的甲醇水溶液，加入内标的乙腈溶液、空白基质(血浆、尿液或组织匀浆液等)
[0568]
3.实验步骤：
[0569]
3.1待测物储备液的配制a
[0570]
用dmso将实施例化合物配制成1mm溶液a；
[0571]
3.2血浆溶液的配制b
[0572]
取溶液a加入到血浆溶液中，配制成5um溶液b；
[0573]
3.3处理流程
[0574]
1)在膜内加入200ul溶液b；
[0575]
2)在膜外加入350ulpbs；
[0576]
3)在37℃水浴锅内孵育6h；
[0577]
4)样品进行处理稀释并进质谱检测。
[0578]
4.谱条件：
[0579]
仪器：岛津lc-20ad；
[0580]
谱柱：phenomenexc18(50*4.6mm，5μm粒径)；
[0581]
流动相：a：乙腈，b:0.1％甲酸溶液0～0.5min：5％a
→
90％a，2.0～2.1min：90％a
→
5％a；流速：0.8ml/min；运行时间：5.0min；进样体积：5μl。
[0582]
5.质谱条件：
[0583]
仪器：api4000型液相谱质谱联用仪，美国ab公司；
[0584]
离子源为电喷雾离子化源(esi)；
[0585]
干燥气体(n2)温度500℃；
[0586]
电喷雾电压为5500v；
[0587]
检测方式为正离子检测；
[0588]
扫描方式为选择反应监测(mrm)方式；扫描时间为0.1s。
[0589]
6.实验结果：
[0590]
表16：实施例化合物血浆蛋白结合率结果
[0591][0592]
7.实验结论：
[0593]
以上数据显示，本发明实施例化合物显示出高血浆蛋白结合率，种属差异小。
[0594]
测试例7、cyp酶单点抑制试验
[0595]
1.实验目的
[0596]
采用人肝微粒体孵育体系，利用单点法快速预测化合物对cyp450酶亚型的抑制情况。
[0597]
2.实验步骤
[0598]
2.1溶液配制
[0599]
2.5mm nadph，称重4.165mg nadph(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)加100mm磷酸缓冲液至2ml。0.25mg/ml微粒体，50μl 20mg/ml微粒体，加4ml 100mm磷酸缓冲液，混匀。
[0600]
待测化合物反应液的配制
[0601]
称取待测实施例化合物，用dmso稀释至10mm,再用100mm磷酸缓冲液稀释至100μm。
[0602]
2.2实验流程：
[0603]
1.在96孔板中，加入40μl肝微粒体、10μl底物、10μl待测化合物，预孵育3min。
[0604]
2.加入nadph 40μl。
[0605]
3.在20min时加入300μl含有内标的乙腈终止液。
[0606]
4.离心进样。
[0607]
3.实验结果：
[0608]
表17实施例化合物cyp酶单点抑制结果
[0609][0610]
注：强抑制：ic
50
《1μm；中等抑制：1μm《ic
50
《10μm；弱抑制：ic
50
》10μm
[0611]
4.实验结论：
[0612]
以上数据显示，本发明实施例化合物对各cyp酶亚型没有强抑制，ddi风险小。
[0613]
测试例8、herg钾离子通道抑制活性测试
[0614]
1.细胞准备
[0615]
7.1.1cho-herg细胞培养于175cm2培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7ml pbs洗一遍，然后加入3ml detachin消化。
[0616]
7.1.2待消化完全后加入7ml培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5ml培养液重悬，以确保细胞密度为2～5
×
106/ml。
[0617]
2.溶液配制
[0618]
表18细胞内液和外液的组成成分
[0619][0620]
3.电生理记录过程
[0621]
单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予一个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录5分钟，然后开始给药过程，化合物浓度从最低测试浓度开始，每个测试浓度给予2.5分钟，每个浓度至少测试3个细胞(n≥3)。
[0622]
4.化合物准备
[0623]
4.1将20mm的化合物母液用细胞外液进行稀释，取5μl 20mm的化合物母液加入
2495μl细胞外液，500倍稀释至40μm，然后在含0.2％dmso的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度。
[0624]
4.2最高测试浓度为40μm，依次分别为40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16μm共6个浓度。
[0625]
4.3最终测试浓度中的dmso含量不超过0.2％，此浓度的dmso对herg钾通道没有影响。
[0626]
5.数据分析
[0627]
实验数据由xlfit软件进行分析。
[0628]
6.质量控制
[0629]
环境：湿度20～50％，温度22～25℃
[0630]
试剂：所用实验试剂购买于sigma公司，纯度》98％
[0631]
报告中的实验数据必须满足以下标准：
[0632]
全细胞封接阻抗》100mω
[0633]
尾电流幅度》400pa
[0634]
药理学参数：
[0635]
多浓度cisapride对herg通道的抑制效应设为阳性对照。
[0636]
7.实验结果：
[0637]
表19：实施例化合物在多浓度对herg电流的抑制结果herg结果
[0638][0639]
8.实验结论：
[0640]
药物对于心脏herg钾离子通道的抑制是药物导致qt延长综合症的主要原因。从实验结果可以看出，本发明实施例化合物对于心脏herg钾离子通道没有明显抑制作用，可以避免高剂量时的心脏毒副作用。
[0641]
测试例9、balb/c小鼠味觉敏感性试验
[0642]
1.实验目的：
[0643]
本实验通过奎宁苦水实验筛选出对动物味觉毒副作用较小的化合物。
[0644]
2.实验主要仪器和材料
[0645]
2.1仪器：
[0646]
1、超净工作台(cj-2f，苏州冯氏实验动物设备有限公司)；
[0647]
2、电子天平(cpa2202d，赛多利斯)；
[0648]
3、电子天平(bsa2202s-cw，赛多利斯)；
[0649]
4、纯水仪(pacific tii，thermo)。
[0650]
2.2试剂：
[0651]
奎宁单盐酸盐二水合物(6119-47-7，adamas)。
[0652]
2.3动物：
[0653]
balb/c小鼠，6-8周，
♂
，购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。
[0654]
3.实验步骤：
[0655]
3.1动物筛选
[0656]
实验前1天，所有balb/c小鼠称重，剔除体重过高或过低的动物。
[0657]
3.2分组及禁水
[0658]
根据体重将balb/c小鼠按照要求进行随机分组，并于给药前12-16小时禁水、不禁食。
[0659]
3.3奎宁水溶液的制备
[0660]
称取适量的奎宁单盐酸盐二水合物，用超纯水配置成浓度为3mmol/l的奎宁盐酸水溶液，待用。
[0661]
3.4待测化合物配制
[0662]
称取适量的待测化合物，用对应的溶媒根据实验设计配制成目标浓度，待用。
[0663]
3.5给药及动物奎宁饮水量测试
[0664]
给药及禁食：实验当天，动物称重、禁食、更换垫料，按实验设计进行给药。
[0665]
奎宁饮水量测试：
[0666]
1、分别用超纯水和配制好的3mmol/l的奎宁盐酸水溶液润洗对应的干净的小鼠饮水瓶2-3次，之后装满称重并记录重量为wi0。
[0667]
2、按照实验设计，给药一定时长后，将装满的水瓶轻柔地放置于对应的小鼠笼架上，开始计时，30min后，轻柔地取出水瓶，称重并记录重量为wi
30
。
[0668]
3、每组动物饮水量计算：δww(g)＝wi
30-wi0；单只小鼠饮水量计算：δpww(g)＝δww/n，n为各组动物只数。
[0669]
4、味觉障碍比率＝(饮用水为奎宁盐酸水溶液同时给与受试药组δpww－饮用水为奎宁盐酸水溶液同时给与溶剂对照组δpww)/(饮用水为超纯水同时给与溶剂对照组δpww－饮用水为奎宁盐酸水溶液同时给与溶剂对照组δpww)
×
100％。用excel等软件进行数据处理。
[0670]
5、实验结束后安乐死动物。
[0671]
4.试验结果：
[0672]
表20实施例化合物味觉结果
[0673]
[0674]
5.实验结论：
[0675]
从上述结果中可以看出，本专利的化合物对小鼠味觉毒副作用较小。
[0676]
测试例10、对柠檬酸诱导的豚鼠急性咳嗽的药效研究
[0677]
1.实验目的
[0678]
本试验目的是评价化合物在柠檬酸诱导的豚鼠急性咳嗽模型中的药效。
[0679]
2.实验仪器与试剂
[0680]
2.1关键仪器
[0681]
表21
[0682][0683][0684]
2.2关键试剂
[0685]
表22
[0686]
试剂名称厂家货号羧甲基纤维素钠sigmac5678吐温80sigmap4780atpsigmaa2383柠檬酸sigmac2404
[0687]
3.实验操作及数据处理：
[0688]
3.1动物
[0689]
豚鼠(hartley guinea pig)，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0690]
3.2实验流程
[0691]
动物经适应性饲养，体重达标(300-400g)后，进行流水编号并根据体重进行随机分组。
[0692]
引咳方法：先将豚鼠放入全身体积扫描箱适应3-5min后，进行2min atp雾化，间隔3min，再给予5min的柠檬酸雾化。从柠檬酸雾化开始，记录10min内动物的咳嗽次数和咳嗽潜伏期。
[0693]
3.3给药方案及咳嗽指标监测
[0694]
受试化合物在柠檬酸雾化前2小时进行豚鼠单次灌胃给药处理，在预定时间放入dsi buxco全身体积描记检测系统(wbp)的呼吸体积描记腔中进行柠檬酸雾化引咳。从柠檬酸雾化开始，wbp系统记录10分钟内豚鼠的咳嗽总次数(ccnt)和咳嗽潜伏期(cip)。
[0695]
3.4数据处理
[0696]
所有的数据被录入到excel文档中，并以平均值
±
标准误的方式表示。实验数据统计采用单因素方差分析方法(one-way anova)将各组数据进行分析比较。统计分析结果p《0.05认为有显著差异。两两比较采用t-test方法比较差异性。
[0697]
结果显示，本发明实施例化合物在柠檬酸诱导的豚鼠急性咳嗽模型中能有效改善咳嗽症状，咳嗽总次数下降率达59％以上。
[0698]
三、化合物的晶型研究
[0699]
本领域普通技术人员所熟知的是，上述实施例化合物被证明在1321n1-hp2x3受体细胞功能钙流试验中显示出良好的抑制作用时，其晶型往往会具有同样的药理药效活性。在此基础上，发明人进一步研究了相应化合物晶型的理化性质，但下述具体晶型的制备与表征并不代表对本发明保护范围范围的限定，本领域普通技术人员可以以本发明为基础，获得本发明化合物更多的晶体，这些晶体均为本发明所保护的方案。具体如下：
[0700]
1.实验仪器
[0701]
1.1物理化学检测仪器的一些参数
[0702]
表23
[0703][0704]
1.2仪器与液相分析条件
[0705]
1.2.1仪器与设备
[0706]
表24
[0707]
仪器名称型号分析天平mettler toledo xa105纯水机milli-q plus，millipore高效液相谱仪agilent1260泵agilent g1311b进样器g1329b柱温箱g1316a检测器g1315d
[0708]
1.2.2谱条件
[0709]
谱柱：zorbax bonus rp(3.5μm，4.6*75mm)
[0710]
流速：1.0ml/min
[0711]
柱温：30℃
[0712]
检测波长：262nm
[0713]
进样体积：5.0μl
[0714]
运行时间：15min
[0715]
稀释剂：dmso
[0716]
流动相：a：水(0.05％三氟乙酸)；b：乙腈(0.05％三氟乙酸)
[0717]
表25
[0718]
t(min)a(％)b(％)0.00604012.00257512.01604015.006040
[0719]
2.化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的的自由碱晶型i～vii的制备
[0720]
2.1自由碱晶型i的制备
[0721]
称取化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的游离碱6g，用dcm/丙酮＝3:1(250ml)溶解，加入活性炭(0.5g)以及无水硫酸钠(15g)，40℃搅拌30分钟。过滤，滤液减压浓缩至干，用50ml丙酮带一次，蒸干。加入100ml丙酮，加热到65℃回流，仍未溶清，滴加200ml正庚烷，加热搅拌1小时，关闭加热，自然冷却到室温，继续搅拌1小时。过滤，得类白固体，真空干燥至恒重，得到自由碱晶型i，经检测分析，其有如图1所示的xrpd图、如图2所示的dsc图。
[0722]
2.2自由碱晶型ii的制备
[0723]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的乙醇溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到自由碱晶型ii，经检测分析，其有如下如图3所示的xrpd图、如图4所示的dsc图。
[0724]
2.3自由碱晶型iii的制备
[0725]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的丙酮溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到自由碱晶型iii，经检测分析，其有如下如图5所示的xrpd图、如图6所示的dsc图。
[0726]
2.4自由碱晶型iv的制备
[0727]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的二氧六环溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到自由碱晶型iv，经检测分析，其有如下如图7所示的xrpd图、如图8所示的dsc图。
[0728]
2.5自由碱晶型v的制备
[0729]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的二氯甲烷溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到自由碱晶型v，经检测分析，其有如下如图9所示的xrpd图、如图10所示的dsc图。
[0730]
2.6自由碱晶型vi的制备
[0731]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的醋酸异丙酯溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到自由碱晶型vi，经检测分析，其有如下如图11所示的xrpd图、如图12所示的dsc图。
[0732]
2.7自由碱晶型vii的制备
[0733]
称量10mg的化合物(晶型i)到2ml的玻璃瓶中，加入200μl的甲苯溶剂，得到混悬液；将混悬液置于磁力搅拌器上40℃打浆3天，离心，去除上清液，固体进一步在真空干燥箱中干燥过夜(50℃减压真空干燥)，得到晶型自由碱vii，经检测分析，其有如下如图13所示的xrpd图。
[0734]
3.固体稳定性实验
[0735]
3.1实验目的：
[0736]
考察化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型ii在光照5000lx、高温60℃、高湿92.5％rh、高温高湿50℃/75％rh条件下，化合物的物理化学稳定性，为化合物贮存提供依据。
[0737]
3.2仪器与液相分析条件
[0738]
表26
[0739][0740][0741]
3.3实验方案：
[0742]
取晶型ii约1mg，于光照5000lx、高温60℃、高湿92.5％rh、高温高湿50℃/75％rh条件下，考察14天，用hplc，外标法测定含量，并采用谱峰面积归一化法计算有关物质的
变化。
[0743]
3.4实验结果
[0744]
表27
[0745][0746]
自由碱晶型ii固体稳定性结果：4个条件下14天稳定性都没有单杂增加超过0.1％，且总杂增加也不超过0.1％。以上数据表明，2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型ii在高温、高湿、光照和高温高湿条件均比较稳定。
[0747]
4、引湿性实验
[0748]
4.1实验目的
[0749]
考察化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型i在不同相对湿度条件下的引湿性，为化合物贮存提供依据。
[0750]
4.2实验方案：
[0751]
将化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型i置于同相对湿度的饱和水蒸气中，使化合物与水蒸气达到动态平衡，并计算平衡后化合物吸湿增重的百分数。
[0752]
表28动态水分吸附仪(dvs)仪器参数
[0753]
仪器型号sms intrinsic实验温度25℃干燥时间0％rh 120min平衡dm/dt0.02％/min(最小10min，最大180min)rh(％)测量步长10％测量梯度0-95-0％循环次数2
[0754]
4.3实验结果：
[0755]
表29
[0756][0757]
2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱晶型i在rh80％条件下吸湿增重不到0.3％，略有引湿性。经0-95％相对湿度条件下吸湿与解吸湿循环2次，自由碱晶型i的xrpd谱图并未发生改变，即晶型未转变。
[0758]
5.不同介质中溶解度实验
[0759]
5.1化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶型在不同介质中溶解度实验
[0760]
5.1.1实验目的：
[0761]
考察自由碱晶型i和晶型ii在ph1-8 usp缓冲液、人工模拟禁食胃液(fassgf)、禁食人工模拟肠液(fassif)、非禁食人工模拟肠液(fessif)以及纯水等媒介中溶解度大小，为可成药性评估提供依据。
[0762]
5.1.2实验方案：
[0763]
分别称量1～2mg的化合物自由碱晶型i、自由碱晶型ii到1.5ml的液相小瓶中，然后分别加入1ml的不同ph缓冲液、人工模拟胃液(fassgf)、禁食人工模拟肠液(fassif)、非禁食人工模拟肠液(fessif)和纯水，置于旋转混匀仪上过夜，温度为室温，24小时后将样品溶液用0.45μm混合水纤滤膜过滤后取续滤液，用hplc测试其含量。
[0764]
表30
[0765][0766]
5.1.3实验结果：如图所示：
[0767]
表31
[0768][0769][0770]
化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的自由碱的溶解度不存在ph依赖性，且溶解度都很低，不超过0.02mg/ml，相比晶型ii，晶型i(亚稳晶型)在相应介质中的溶解度提高3倍以上。
技术特征：
1.通式(i)所示化合物或其立体异构体的晶型，其中：r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、-(ch2)
n
c(o)r
a
、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、-(ch2)
n
c(o)r
a
、3-12元杂环基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
1-6
羟烷基、氰基取代的c
1-6
烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-12
芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；r
a
选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、氧代基、硫代基、c
1-6
烷基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基和5-14元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
1-6
羟烷基、氰基取代的c
1-6
烷基、c
3-12
环烷基、3-12元杂环基、c
6-12
芳基和5-12元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
3-8
环烷基、3-12元杂环基、c
6-14
芳基或5-14元杂芳基；且x为0～3的整数，优选0、1或2，更优选0或1；n为0～3的整数，优选0、1或2，更优选0或1。2.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，
r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n
c(o)r
a
、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
氘代烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n
c(o)r
a
、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；r
a
选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、氧代基、硫代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；优选地，r1选自氢、卤素、氨基、氰基、c
1-3
烷基、c
2-6
烯基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n1
c(o)r
a
、含1-3个选自氮、氧或硫原子的3-8元杂环基、c
6-10
芳基或含1-3个选自氮、氧或硫原子5-10元杂芳基，所述的氨基、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、c
1-6
羟烷基、c
3-8
环烷基、-(ch2)
n1
c(o)r
a
、含1-3个选自氮、氧或硫原子的3-8元杂环基、c
6-10
芳基或含1-3个选自氮、氧或硫原子5-10元杂芳基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；r
a
选自氢、氘、卤素、氨基、氰基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-6
环烷基或含1-2个选自n或o的4-6元杂环基，所述的氨基c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-6
环烷基或含1-2个选自n或o的4-6元杂环基，任选地被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、氧代基、c
1-3
烷基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
1-3
羟烷基、氰基取代的c
1-3
烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；更优选地，r1选自以下基团：-h、-nh2、-f、-cl、-br、-cn、-ch3、-ch2ch3、-cf3、
r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、硝基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、c
1-3
羟烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-10元杂芳基，优选氢、氨基、氰基、氟、氯、溴、甲基、异丙基、三氟甲基、甲氧基、环丙基或吗啉基；r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、氧代基、硫代基、c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、c
1-3
氘代烷基、c
1-3
卤代烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
烷氧基、c
1-3
卤代烷氧基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环基、c
6-10
芳基或5-1.元杂芳基，优选氢或氰基。3.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，化合物的具体结构如下：
4.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为化合物2-(2-氰基-5-氧代-8-(三氟甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶[3,2-e]嘧啶-4(5h)-基)-n-(5-氟吡啶-2-基)乙酰胺的晶
型；晶型为晶型i，其x-射线粉末衍射图谱在18.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在11.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在32.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型i的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为18.1
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、11.7
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为24.2
±
0.2
°
、24.7
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、15.7
±
0.2
°
、26.7
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型i的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为32.0
±
0.2
°
、26.3
±
0.2
°
、28.4
±
0.2
°
、17.6
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、35.9
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型i的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为18.1
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、11.7
±
0.2
°
、24.2
±
0.2
°
、24.7
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、15.7
±
0.2
°
、26.7
±
0.2
°
、32.0
±
0.2
°
、26.3
±
0.2
°
、28.4
±
0.2
°
、17.6
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、35.9
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型i的x-射线粉末衍射图谱如图1所示，或其dsc图谱基本如图2所示；或，为晶型ii，其x-射线粉末衍射图谱在27.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在27.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在30.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在28.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在13.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为27.3
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、27.6
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为22.5
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、28.5
±
0.2
°
、10.4
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为22.0
±
0.2
°
、13.7
±
0.2
°
、20.9
±
0.2
°
、22.3
±
0.2
°
、30.4
±
0.2
°
、19.8
±
0.2
°
、21.5
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为27.3
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、27.6
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、30.1
±
0.2
°
、28.5
±
0.2
°
、10.4
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、22.0
±
0.2
°
、13.7
±
0.2
°
、20.9
±
0.2
°
、22.3
±
0.2
°
、30.4
±
0.2
°
、19.8
±
0.2
°
、21.5
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；
更进一步优选地，晶型ii的x-射线粉末衍射图谱如图3所示，或其dsc图谱基本如图4所示；或，为晶型iii，其x-射线粉末衍射图谱在12.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在5.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在8.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者11.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在8.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为12.2
±
0.2
°
、5.9
±
0.2
°
、24.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为17.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、8.5
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、11.8
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为24.8
±
0.2
°
、8.8
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、27.4
±
0.2
°
、23.6
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、23.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为12.2
±
0.2
°
、5.9
±
0.2
°
、24.4
±
0.2
°
、17.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、8.5
±
0.2
°
、20.2
±
0.2
°
、11.8
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、8.8
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、27.4
±
0.2
°
、23.6
±
0.2
°
、20.8
±
0.2
°
、23.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型iii的x-射线粉末衍射图谱如图5所示，或其dsc图谱基本如图6所示；或，为晶型iv，其x-射线粉末衍射图谱在10.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.4
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.5
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、15.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为17.4
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、10.1
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为26.9
±
0.2
°
、24.1
±
0.2
°
、14.4
±
0.2
°
、11.3
±
0.2
°
、24.5
±
0.2
°
、16.8
±
0.2
°
、20.4
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.5
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、15.2
±
0.2
°
、17.4
±
0.2
°
、24.8
±
0.2
°
、19.5
±
0.2
°
、10.1
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、24.1
±
0.2
°
、14.4
±
0.2
°
、11.3
±
0.2
°
、24.5
±
0.2
°
、16.8
±
0.2
°
、20.4
±
0.2
°
中的一处或多
处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型iv的x-射线粉末衍射图谱如图7所示，或其dsc图谱基本如图8所示；或，为晶型v，其x-射线粉末衍射图谱在13.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在18.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在25.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在12.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在14.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在30.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为13.9
±
0.2
°
、18.1
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为19.7
±
0.2
°
、25.9
±
0.2
°
、12.9
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为30.7
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、15.8
±
0.2
°
、31.8
±
0.2
°
、29.5
±
0.2
°
、29.8
±
0.2
°
、22.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为13.9
±
0.2
°
、18.1
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、25.9
±
0.2
°
、12.9
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、22.6
±
0.2
°
、15.8
±
0.2
°
、31.8
±
0.2
°
、29.5
±
0.2
°
、29.8
±
0.2
°
、22.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型v的x-射线粉末衍射图谱如图9所示，或其dsc图谱基本如图10所示；或，为晶型vi，其x-射线粉末衍射图谱在10.3
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在14.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.2
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在19.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在26.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在10.8
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在24.9
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在22.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.3
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、17.2
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为24.6
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、10.8
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为24.9
±
0.2
°
、22.5
±
0.2
°
、30.2
±
0.2
°
、28.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、5.4
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.3
±
0.2
°
、14.7
±
0.2
°
、17.2
±
0.2
°
、24.6
±
0.2
°
、7.5
±
0.2
°
、19.7
±
0.2
°
、26.9
±
0.2
°
、10.8
±
0.2
°
、24.9
±
0.2
°
、
22.5
±
0.2
°
、30.2
±
0.2
°
、28.7
±
0.2
°
、21.0
±
0.2
°
、5.4
±
0.2
°
、24.0
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型vi的x-射线粉末衍射图谱如图11所示，或其dsc图谱基本如图12所示；或，为晶型vii，其x-射线粉末衍射图谱在10.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在15.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在17.7
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在25.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在11.0
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在20.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在7.6
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在25.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在5.5
±
0.2
°
处具有衍射峰；或者在21.1
±
0.2
°
处具有衍射峰；优选包含上述衍射峰中的任意2-5处，或者3-5处，或者3-6处，或者3-8处，或者5-8处，或者6-8处，更优选包含其中任意6处、7处或8处；优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱至少包含位于2θ为10.6
±
0.2
°
、15.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选包含其中两条，更优选包含三条；任选的，进一步还可以包含位于2θ为25.1
±
0.2
°
、11.0
±
0.2
°
、20.1
±
0.2
°
、7.6
±
0.2
°
、25.5
±
0.2
°
中的至少一条，优选至少包含其中2条、3条、4条或5条；更优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱任选还包含位于2θ为5.5
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、30.3
±
0.2
°
、23.9
±
0.2
°
、15.9
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰；优选至少包含其中任意2-3处，或者4-5处，或者6-7处；进一步优选，至少包含其中任意2处、3处、4处、5处、6处、7处；进一步优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱包含位于2θ为10.6
±
0.2
°
、15.1
±
0.2
°
、17.7
±
0.2
°
、25.1
±
0.2
°
、11.0
±
0.2
°
、20.1
±
0.2
°
、7.6
±
0.2
°
、25.5
±
0.2
°
、5.5
±
0.2
°
、21.1
±
0.2
°
、27.3
±
0.2
°
、30.7
±
0.2
°
、30.3
±
0.2
°
、23.9
±
0.2
°
、15.9
±
0.2
°
中的一处或多处衍射峰，优选的，至少包含其中任选的4处、5处、6处、8处或10处有衍射峰；更进一步优选地，晶型vii的x-射线粉末衍射图谱如图13所示。5.根据权利要求4中所述的晶型，其特征在于，晶型i、晶型ii、晶型iii、晶型iv、晶型v、晶型vi和晶型vii的x-射线粉末衍射图谱中相对峰强度为前十强的衍射峰位置分别与图1、图3、图5、图7、图9、图11和图13对应位置衍射峰的2θ误差为
±
0.2
°
～
±
0.5
°
，优选
±
0.2
°
～
±
0.3
°
，最优选
±
0.2
°
。6.根据权利要求1-5任意一项所述的晶型，其特征在于，晶型为无水物或水合物，当晶型为水合物时，水的个数为0-3，优选0、0.2、0.5、1、1.5、2、2.5或3，更优选0、0.5、1、2或3。7.制备权利要求1-6任一项所述晶型的方法，具体包括如下步骤：1)称取适量的自由碱，用不良溶剂混悬振摇；2)将以上混悬液快速离心，去除上清液，干燥得到目标产物；所述的不良性溶剂选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、乙醇、丙酮、2-甲基-四氢呋喃、二氯甲烷、二氧六环、甲基叔丁基醚、正庚烷、苯、甲苯、氯苯、氯仿、异丙醇、正丁醇、异丁醇、甲苯、n，n-二甲基甲酰胺、n，n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、正丙醇、甲酸乙酯、醋酸异丙酯、叔丁醇、2-丁酮和3-戊酮中的一种或多种；优选甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、丙酮、甲苯、二氧六环、乙酸乙酯、甲苯、甲酸乙酯和醋酸异丙酯中的一种或多种。8.一种药物组合物，其含有有效量的权利要求1-6任一项所述的晶型以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
9.根据权利要求1-6中任一项所述的晶型，或权利要求8所述的药物组合物在制备p2x3抑制剂药物中的应用。10.根据权利要求1-6中任一项所述的晶型，或权利要求8所述的药物组合物在制备神经源性疾病药物中的用途；优选地，所述神经源性疾病选自妇科疾病、泌尿道疾病状态、呼吸障碍疾病或疼痛相关疾病或病症；更优选地，所述神经源性疾病选自子宫内膜异位症、膀胱过度活动症、肺纤维化或慢性咳嗽；所述疼痛相关疾病或病症选自神经性疼痛或子宫肌瘤相关的疼痛或不适。
技术总结
本发明涉及含吡唑多环类衍生物的自由碱晶型及其制备方法和应用。特别地，本发明涉及通式(I)化合物自由碱晶型、制备方法和含有有效量的该晶型的药物组合物，及其作为P2X3抑制剂，在制备神经源性疾病药物中的用途，其中通式(I)中的各取代基与说明书中的定义相同。义相同。义相同。义相同。
