地衣芽孢杆菌ZLP-81及其应用

地衣芽孢杆菌ZLP-81及其应用

地衣芽孢杆菌zlp-81及其应用
技术领域
1.本发明涉及一种地衣芽孢杆菌zlp-81及其应用。


背景技术：

2.植物病虫害给农业生产带来严重的损失，常规化学农药防治不仅杀伤了大量 天敌和有益微生物、破坏了生态平衡，还使害虫耐药性急剧上升，对环境和人类 健康造成了极大的危害。为此，研究开发安全、高效、环境友好的产品及化肥农 药替代技术已成为保障粮食安全、食品安全和环境安全的战略需求。
3.地衣芽孢杆菌是一类好氧、产芽孢的杆状细菌，该菌具有对人畜无毒无害、 环境友好、抗逆性强、繁殖速度快等特点，并能分泌多种活性物质。研究表明， 该类微生物对立枯丝核菌、灰霉病菌、镰刀病菌、枯萎病菌、早疫病菌、叶霉病 菌、黑斑病菌、病菌、霜霉病菌、黑星病菌、轮纹菌、小斑病等具有较强的 抑制作用，并能促进作物生长。
4.但是，有关同时具有防病、杀虫和促进植物生长功能的菌株未见相关报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种同时具有防病、杀虫和促进植物生长功能的地衣芽 孢杆菌zlp-81及其应用。
6.本发明采用如下技术方案：
7.一种地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)zlp-81，保藏编号为cgmcc no. 25028，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为： 中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为 2022年6月9日。
8.一种上述地衣芽孢杆菌zlp-81在防治鳞翅目害虫、蜚蠊目害虫、膜翅目害 虫、蜈蚣目害虫、半翅目害虫、鞘翅目害虫或直翅目害虫中的应用。
9.进一步的，所述鳞翅目害虫包括小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和菜青虫；所 述半翅目害虫包括蚜虫、白粉虱、斑衣蜡蝉；所述鞘翅目害虫包括蛴螬、金针虫 或拟地甲；所述直翅目害虫包括蝗虫、蟋蟀、蝼蛄。
10.一种上述地衣芽孢杆菌zlp-81在防治植物病原菌、水产病原菌及金黄葡 萄球菌中的应用。
11.进一步的，所述植物病原菌包括：番茄叶霉病菌、番茄灰霉病菌、梨黑斑病 菌、镰刀病菌、棉花枯萎病菌、黄瓜灰霉病菌、葡萄灰霉病菌、黄瓜病菌、 黄瓜霜霉病菌、黄瓜黑星病菌、苹果轮纹菌、立枯丝核菌、玉米小斑病菌和番茄 早疫病菌。
12.进一步的，所述水产病原菌包括：嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和维氏气 单胞菌。
13.一种上述地衣芽孢杆菌zlp-81在制备生防制剂、生物农药、土壤修复剂或 生物肥料中的应用。
14.进一步的，所述生物杀虫剂、生物农药、生物肥料、生物种衣剂或土壤修复 剂中包
含地衣芽孢杆菌zlp-81菌体和/或发酵液；或是从发酵液中分离出的表面 活性素、伊枯草菌素、芬荠素或精子素。
15.一种杀虫剂，其包括如下重量份的组分：地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉 23.45～76.3份、粘结剂15.0～20.0份、分散剂1.0～1.5份、崩解剂2.5～3.0份、润 湿剂0.9～1.4份以及增效剂0.55～2.15份。
16.进一步的，所述地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉通过如下方法制备：向地衣 芽孢杆菌zlp-81的发酵液中添加发酵液质量7～13％的β-环糊精、5～13％的 caco3以及1.5～5.5％的mgso4后进行喷雾干燥。
17.进一步的，其还包括辅料0～52份。
18.其中，所述粘结剂选自可溶性淀粉、羧甲基纤维素、糊精。
19.其中，所述分散剂选自木质素磺酸钠、三聚磷酸钠、焦磷酸钠。
20.其中，所述崩解剂选自硫酸钠、十二烷基硫酸钠、聚山梨酯80。
21.其中，所述润湿剂选自大豆卵磷脂、磺化油、炔二醇。
22.其中，所用增效剂为：硅氧烷共聚物及多元醇混合物、聚醚改性三硅氧烷、 乙氧基改性聚三硅氧烷等有机硅类，增效醚、顺丁烯二酸二乙酯、磷酸三苯酯等 解毒酶抑制剂类、松节油、茶皂素、天然陈皮精油、玉米胚芽油、油菜籽油、大 豆油、青皮桔油、松油、苦楝油、蓖麻油、薄荷油、百里香油、桉叶油、芝麻油、 橄榄油等植物油类、大豆软磷脂非离子表面活性混合剂、聚天冬氨酸、烷基多糖 苷、d-柠檬烯、蜂蜜、丙酮、肉桂醛、松油烯-4-醇、川楝素、弹指间、倍 创、渗展宝、一可佳中的任意的1种以上。
23.进一步的，其还包括1.10～1.70重量份的化学杀虫剂、生物杀虫剂或植物杀 虫剂。
24.化学杀虫剂包括：丙氨酸甲酯、苯醚甲环性、速克灵、进口甲托、苯并咪唑 44号、密霉胺、福美霜、进口蓝粉、氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯、乙基多 杀菌素、灭幼脲氯氰菊酯、吡虫啉、、赤霉酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、 烯腺嘌呤、羟烯腺嘌呤、苄氨基嘌呤、24-表芸苔素内酯、22,23,24-表芸苔素内 酯、28-表高芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、14-羟基芸苔素甾醇、三十烷醇、s
‑ꢀ
诱抗素、抗坏血酸、糠氨基嘌呤、二氢卟吩铁、尿囊素、超敏蛋白、极细链格孢 激活蛋白、氨基寡糖素、香菇多糖、几丁聚糖、葡聚烯糖、低聚糖素、β-羽扇豆 球蛋白多肽、胆钙化醇、米尔贝霉素、二化螟性诱剂、斜纹夜蛾诱集性信息素、 绿盲蝽性信息素、梨小性迷向素、苹果蠹蛾性信息素中的任意1种以上。
25.生物杀虫剂包括：地衣芽孢杆菌、短稳杆菌、多粘类芽孢杆菌、苏云金芽孢 杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、海洋芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、蜡 质芽孢杆菌、荧光假单胞杆菌、侧孢短芽孢杆菌、短稳杆菌、地衣芽孢杆菌、地 衣芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、嗜硫小红卵菌、白僵菌、球孢白僵菌、金龟子绿 僵菌、哈茨木霉菌、木霉菌、淡紫拟青霉、厚孢轮枝菌、耳霉菌、盾壳霉、小盾 壳霉、寡雄腐霉菌、蟑螂病毒、多角体病毒、颗粒体病毒、多杀霉素、阿维菌素、 蝗虫微孢子虫中的任意1种以上。
26.植物杀虫剂包括：印楝素、苦参碱、、烟碱、鱼藤酮、除虫菊素、苦 皮藤素、桉油精、八角茴香油、狼毒素、雷公藤甲素、莪术醇、蛇床子素、丁子 香酚、大黄素甲醚、香芹酚、小檗碱、甾烯醇、茶皂素、螺威、大蒜素、d-柠檬 烯、萜烯醇、异硫氰酸烯丙酯、十五烯苯酚酸、十三烷苯酚酸、苯丙烯菌酮中的 任意1种以上。
27.一种杀菌剂，包括地衣芽孢杆菌zlp-81菌体或发酵液。
28.进一步的，所述杀菌剂包括体积比为500∶1的地衣芽孢杆菌zlp-81的发 酵液和多菌灵溶液；所述多菌灵溶液为1g多菌灵与600～1000ml的水混合而成。
29.一种杀菌剂，包括从地衣芽孢杆菌zlp-81发酵液中分离出的表面活性素、 伊枯草菌素，芬荠素或精子素。
30.本发明的有益效果在于：
31.本发明的地衣芽孢杆菌zlp-81是一类好氧、产芽孢的杆状微生物，具有环 境友好、抗逆性强、繁殖速度快等特点，并能分泌多种活性物质促进植物生长。
32.本发明的地衣芽孢杆菌zlp-81具有较强的杀虫活性，可以有效杀灭小菜蛾、 甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、菜青虫等鳞翅目害虫，蚜虫、白粉虱、斑衣蜡蝉等半翅目 害虫，蛴螬、金针虫、拟地甲等鞘翅目害虫，蝗虫、蟋蟀、蝼蛄等直翅目害虫及 蜚蠊目的蟑螂、膜翅目蚂蚁和蜈蚣目的蜈蚣。同时具有广谱抗菌性，对灰霉病、 镰刀病、枯萎病、早疫病、叶霉病、黑斑病、病、霜霉病、黑星病、轮纹病、 小斑病等多种植物病原菌均具有明显的抑制效果，在开发为杀虫或防病等功能微 生物制剂等方面具有良好的应用前景。
附图说明
33.图1为地衣芽孢杆菌zlp-81菌落图。
34.图2为地衣芽孢杆菌zlp-81菌株图。
具体实施方式
35.以下结合优选实施例对本发明的技术方案进行详细地阐述。以下实施例仅仅 用于说明和解释本发明，而不构成对本发明技术方案的限制。
36.实施例1地衣芽孢杆菌zlp-81的分离与筛选
37.(1)取土样：从中国西藏昌都采集土壤样品，每份50～100g；装入已灭过 菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
38.(2)芽孢杆菌分离和纯化：在pb培养基上用平板稀释法对土壤样品进行 分离。具体操作如下：准确称取10g土壤样品，加入到装有玻璃珠的90ml 0.9％ 生理盐水锥形瓶中，180r/min摇床振荡30min，使土样分布均匀制成土壤悬液， 浓度为10-1
；依次稀释到浓度为10-5
、10-6
、10-7
。分别在80℃恒温水浴30min， 各取100μl稀释液涂布pb平板，平板于30℃恒温培养箱倒置培养48h。挑取 不同形态的单菌落，用芽孢染进行鉴定，芽孢杆菌用划线法纯化后转接至pb 培养基试管斜面，30℃培养48h后，4℃冰箱保存备用。
39.(3)杀虫防病作用菌株的筛选
40.杀虫作用菌株的筛选：以蚜虫为靶标生物，将纯化后的微生物进行液体摇瓶 发酵培养后，发酵液以转速12000r/min离心10min去菌体，上清液用0.22μm无 菌滤膜过滤制备无菌发酵滤液，发酵滤液进行适当稀释。取适量长度的蚕豆茎叶 放入锥形瓶中。对活蚜虫及所在茎叶喷施适量稀释液后放入锥形瓶内，瓶口用薄 纱布覆盖并用橡皮筋固定。2d后，对蚜虫进行数量统计，筛选出杀虫效果较好 的菌株。
41.具有防病作用菌株的筛选：以黄瓜灰霉病为指示菌，采用平板对峙法进行初 筛。在无菌操作室将pda培养基上长好的灰霉病原菌用打孔器制成d＝5mm菌 饼，然后将菌饼转
接至pda培养基平板中央，再将初筛得到的各拮抗菌的无菌 滤液分别接至距病原菌2.5cm处，设3个重复，同时以只放病原菌菌饼的平板为 对照，26℃恒温培养，待培养至ck长满培养基时，开始测量菌落直径并计算平 均抑制率。筛选出对病原菌拮抗作用强的菌株。将杀虫防病效果较强的菌株进行 了-80℃冷冻保藏。
42.(4)杀虫防病作用菌株的鉴定
43.依据《常见细菌系统鉴定手册》中的实验方法，对筛选得到的杀虫防病效果 较强的菌株进行形态学及生理生化鉴定。将菌株在pb培养基平板上于32
±
1℃培 养14～16h，观察到编号为zlp-81的菌落呈不规则圆形，颜呈白，无光泽， 表面粗糙，该菌体呈杆状(如图1～图2所示)，芽孢呈椭圆形。其生理生化鉴 定指标如表1所示。
44.表1菌株zlp-81的生理生化特性
[0045][0046]
注：“+”为阳性；“－”为阴性。
[0047]
通过形态学观察及生理生化实验，确定编号为zlp-81的菌株为芽孢杆菌属。 接着进行分子生物学分类鉴定，采用16s rdna序列分析，提取菌株的总基因组 dna为模板扩增其16s rdna序列。采用通用引物27f/1492r扩增目的片段， 扩增产物经1％的琼脂糖凝胶电泳检测，采用双向测序方法进行基因测序。测序 结果通过genbank数据库进行blast序列同源性比对后将编号为zlp-81的菌 株鉴定为地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)，命名为地衣芽孢杆菌zlp-81。
[0048]
地衣芽孢杆菌zlp-81送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 进行保藏，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研 究所，保藏编号为cgmcc no.25028，保藏日期为2022年6月9日。
[0049]
实施例2地衣芽孢杆菌zlp-81对鳞翅目害虫、蜚蠊目蟑螂、膜翅目蚂蚁 及蜈蚣目蜈蚣幼虫的杀灭效果
[0050]
将地衣芽孢杆菌zlp-81进行发酵培养。使用nb液体培养基，配方为：牛 肉膏5g/l、蛋白胨10g/l、nacl 5g/l、葡萄糖10g/l，ph7.0。按照5％的接种量 接种于培养基后置于
180r/min、32℃的震荡培养箱中培养48h，获得发酵液。
[0051]
将地衣芽孢杆菌zlp-81的发酵液稀释成10倍、50倍、100倍，以清水处 理作对照。配置药土，以清水配制药土作为对照。并加入适量等量的食料拌匀。 采用药土法，选取虫体大小一致的鳞翅目的小菜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾及菜青 虫、蜚蠊目的蟑螂、膜翅目的蚂蚁及蜈蚣目的蜈蚣幼虫，在温度为25℃～28℃的 环境中保持24h后。每处理试虫数量为45头，每个处理3个平行。接虫后置于 室内常温培养，56h后统计死亡率，如表2所示。
[0052]
表2地衣芽孢杆菌zlp-81对鳞翅目害虫及蜚蠊目蟑螂的灭杀作用
[0053][0054]
实施例3地衣芽孢杆菌zlp-81对蚜虫等半翅目害虫的杀虫效果
[0055]
将地衣芽孢杆菌zlp-81进行发酵培养(同实施例2)。
[0056]
将发酵液稀释成10倍、50倍、100倍，以清水处理作对照。豆蚜杀虫实验 使用的食物为蚕豆幼茎、棉蚜杀虫实验使用的食物为棉花幼茎、甘蓝蚜杀虫实验 使用的食物为甘蓝嫩叶、白粉虱杀虫实验使用的食物为番茄叶片，斑衣蜡蝉杀虫 实验使用的食物为槐花，这五种食物均浸泡在上述药液10min后用滤纸吸干水分， 取出放在垫有滤纸的广口瓶后，加入2ml去离子水保湿，再将广口瓶用保鲜膜 覆盖，扎孔，每12h加1ml水。每个浓度下供试害虫50头，3次重复，挑50 头年龄大小相近的害虫放在准备好的培养皿上饥饿4h，再分别加入上述药液处 理过的蚕豆幼茎、棉花幼茎、甘蓝嫩叶、番茄嫩叶及槐花，每12h更换一次，于 25℃培养箱培养过夜，记录害虫的死亡头数，计算不同稀释倍数下蚜虫的死亡率。
[0057]
死亡率＝(死亡虫数
÷
供试虫数)
×
100％
[0058]
死亡率测定：害虫处理过夜后，用毛笔头触碰害虫，若虫不动则视为死亡， 统计并记录死亡的害虫头数。由表3实施数据结果可以看出，地衣芽孢杆菌 zlp-81对半翅目昆虫有良好的防治作用。
[0059]
表3地衣芽孢杆菌zlp-81对蚜虫等半翅目昆虫的杀虫效果
[0060][0061]
实施例4地衣芽孢杆菌zlp-81对鞘翅目幼虫的杀灭效果
[0062]
将地衣芽孢杆菌zlp-81进行发酵培养(同实施例2)。
[0063]
将地衣芽孢杆菌zlp-81的发酵液稀释成10倍、50倍、100倍，以清水处 理作对照。配置药土，以清水配制药土作为对照。并加入适量等量的食料拌匀。 采用药土法，选取虫体大小一致的白星花金龟、金针虫、拟地甲、桑天牛的三龄 幼虫，在温度为25℃～28℃的环境中保持24h后。每处理试虫数量为15头，每 个处理3个平行，重复3次。接虫后置于室内常温培养，56h后统计死亡率，如 表4所示。
[0064]
表4地衣芽孢杆菌zlp-81对蛴螬等鞘翅目幼虫的杀灭效果
[0065][0066]
实施例5地衣芽孢杆菌zlp-81对蝗虫、蟋蟀、蝼蛄等直翅目害虫的杀虫 效果
[0067]
将地衣芽孢杆菌zlp-81进行发酵培养(同实施例2)。
[0068]
将发酵液稀释成10倍、50倍、100倍，以清水处理作对照。蝗虫杀虫实验 使用的食物为小麦、蟋蟀杀虫实验使用的食物为毛豆、蝼蛄杀虫实验使用的食物 为白菜叶子，这三种食物均浸泡在上述药液10min后用滤纸吸干水分，取出放在 垫有滤纸的广口瓶后，加入2ml去离子水保湿，再将广口瓶用保鲜膜覆盖，扎 孔，每12h加1ml水。每个浓度下供试害虫30头，3次重复，挑30头体重大 小相近的害虫放在准备好的培养皿上饥饿4h，再分别加入上述药液处理过的小 麦、毛豆和白菜叶子，每12h更换一次，于25℃培养箱培养过夜，记录害虫的 死亡头数，计算不同稀释倍数下害虫的死亡率。
[0069]
死亡率＝(死亡虫数
÷
供试虫数)
×
100％
[0070]
由表5实施数据结果可以看出，地衣芽孢杆菌zlp-81对蝗虫、蟋蟀及蝼蛄 等直翅目昆虫有良好的防治作用。
[0071]
表5地衣芽孢杆菌zlp-81对蝗虫等直翅目昆虫的防治效果
[0072][0073]
实施例6地衣芽孢杆菌zlp-81的抑菌谱测定
[0074]
选取常见病原菌如：番茄叶霉病菌、番茄灰霉病菌、梨黑斑病菌、镰刀病菌、 棉花枯萎病菌、黄瓜灰霉病菌、葡萄灰霉病菌、黄瓜病菌、黄瓜霜霉病菌、 黄瓜黑星病菌、苹果轮纹菌、立枯丝核菌、玉米小斑病菌、番茄早疫病菌等多种 植物病原菌；嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌、维氏气单胞菌等水产病原菌及金 黄葡萄球菌为靶标，采用平板对峙法测定菌株zlp-81的抑菌谱，确定zlp-81 菌株对病原菌生长的抑制能力。
[0075]
根据表6的实施结果可见，菌株zlp-81对所试18种病原菌均有较强的拮 抗作用，其中对番茄叶霉病菌的抑制作用最强，抑菌圈直径可达25.20mm。说明 以地衣芽孢杆菌zlp-81的发酵液为活性成分的杀菌剂在农业生产上有良好的应 用价值。
[0076]
表6地衣芽孢杆菌zlp-81对不同植物病原菌的抑制效果
[0077][0078][0079]
实施例7地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂(水分散粒剂)的制备
[0080]
(1)制备地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉
[0081]
培养地衣芽孢杆菌zlp-81使用nb液体培养基，配方为：牛肉膏5g/l、蛋 白胨10g/l、nacl 5g/l、葡萄糖10g/l，ph7.0。按照5％的接种量接种于nb培 养基后置于180r/min、32℃的震荡培养箱中培养48h。将培养好的地衣芽孢杆菌 zlp-81的发酵菌液，进行喷雾干燥，填料选11％的β-环糊精，9％的caco3，3％ 的mgso4，进口温度180℃，设置料液温度为常温22℃，风速为30m3/h，入料 流量是15ml/min，喷雾干燥后获得地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉。
[0082]
(2)杀虫剂的制作流程
[0083]
配方1的制备方法：将26.7％的地衣芽孢杆菌zlp-81菌粉与52.5％的辅料 (碳酸钙)、15％的粘结剂可溶性淀粉、1.3％的分散剂木质素磺酸钠、2.9％的崩 解剂硫酸钠、0.8％的润湿剂大豆卵磷脂及0.8％的增效剂大豆油充分混合，通过 气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒， 得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到地衣芽孢杆菌 zlp-81杀虫剂。
[0084]
配方2的制备方法：将24％的地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉与51.5％的辅 料(碳
酸钙)、17.2％的粘结剂羧甲基纤维素、1.6％的分散剂三聚磷酸钠、2.3％ 的崩解剂十二烷基硫酸钠、1.5％的润湿剂磺化油及1.9％的增效剂聚醚改性三硅 氧烷充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过 造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛 得到地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂。
[0085]
配方3的制备方法：将25.35％的地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉与50.5％的 辅料(碳酸钙)、18.5％的粘结剂糊精、1％的分散剂焦磷酸钠、2.5％的崩解剂聚 山梨酯80、1.2％的润湿剂炔二醇及0.95％的增效剂乙氧基改性聚三硅氧烷充分 混合，通过气流粉碎机粉碎再混匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进 行挤压造粒，得到的样品放置烘箱中进行45-50℃烘干，过40目振动筛得到地衣 芽孢杆菌zlp-81杀虫剂。
[0086]
配方1、配方2和配方3对小菜蛾的矫正杀虫率为73％、74％和74％；对豆 蚜的矫正杀虫率为66％、66％和67％；对蟋蟀的矫正杀虫率为65％、66％和68％。
[0087]
实施例8地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂(粉剂)的制备方法
[0088]
将地衣芽孢杆菌zlp-81的发酵菌液(同实施例2)和多菌灵溶液(1g多菌 灵溶于800ml水)按照500∶1的体积比均匀混合，然后进行喷雾干燥，喷雾干 燥后获得地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂的粉剂。
[0089]
实施例9地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂的促生效果
[0090]
选用黄瓜为试验作物，室内盆栽黄瓜种苗20株/盆，设3个平行，处理组施 用地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂(实施例8)，对照组不施用任何促生产品。而 后随机选10株28日龄黄瓜幼苗，用直尺测量幼苗的株高，游标卡尺测量茎粗。 105℃杀青15min，75℃烘干至恒重，测定地上部和地下部干质量，采用乙醇丙 酮浸提法测定叶绿素含量，用便携式光合测定系统进行光合参数的测定。从表7 可知，地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂在对黄瓜幼苗的株高、茎粗、单株地上部鲜 质量、单株地上部干质量、叶面积、单株根鲜质量、单株根干质量、单株总根体 积、叶绿素总量和净光合速率方面较ck提高了3.68％、10.99％、18.687％、15.41％、 0.49％、77.33％、8.51％、119.57％、63.54％和89.03％，且除株高、叶面积和单 株根干质量外，都达到了差异显著的水平。表明，本发明地衣芽孢杆菌zlp-81 杀菌剂对黄瓜幼苗有显著的促生效果。
[0091]
表7地衣芽孢杆菌zlp-81杀菌剂对黄瓜幼苗的促生效果
[0092][0093]
注：同行相同字母代表p＞0.05，差异不显著，不同字母代表p＜0.05，差 异显著。
[0094]
实施例10地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂(包含其他杀虫剂)的制备
[0095]
按照质量比(见表8)，制作包含化学杀虫剂、生物杀虫剂、植物杀虫剂的 地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂配方。其中菌粉为实施例7的步骤(1)所得到的 地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉。
[0096]
制备方法：将地衣芽孢杆菌zlp-81菌株原粉与辅料混合后，再与粘结剂、 分散剂、崩解剂、润湿剂、杀虫剂及增效剂充分混合，通过气流粉碎机粉碎再混 匀，然后加入蒸馏水捏合成块，再通过造粒机进行挤压造粒，得到的样品放置烘 箱中进行45～50℃烘干，过40目振动筛得到地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂。
[0097]
所用辅料为碳酸钙。
[0098]
所用粘结剂为：(1)可溶性淀粉、(2)羧甲基纤维素钠、(3)糊精。
[0099]
所用分散剂为：(a)木质素磺酸钠、(b)三聚磷酸钠、(c)焦磷酸钠。
[0100]
所用崩解剂为：(a)硫酸钠、(b)十二烷基硫酸钠、(e)聚山梨酯80。
[0101]
所用润湿剂为：(α)大豆卵磷脂、(β)磺化油、(γ)炔二醇。
[0102]
所用增效剂为：(1)硅氧烷共聚物、(2)聚醚改性三硅氧烷、(3)乙氧 基改性聚三硅氧烷等有机硅类，(4)增效醚、(5)顺丁烯二酸二乙酯、(6) 磷酸三苯酯等解毒酶抑制剂类，(7)松节油、(8)茶皂素、(9)天然陈皮精 油、(10)玉米胚芽油、(11)油菜籽油、(12)大豆油、(13)青皮桔油、(14) 松油、(15)苦楝油、(16)蓖麻油、(17)薄荷油、(18)百里香油、(19) 桉叶油、(20)芝麻油、(21)橄榄油等植物油类，(22)大豆软磷脂非离子表 面活性混合剂、(23)聚天冬氨酸、(24)烷基多糖苷、(25)d－柠檬烯、(26) 蜂蜜、(27)丙酮、(28)肉桂醛、(29)松油烯-4-醇、(30)川楝素、(31) 弹指间、(32)倍创、(33)渗展宝、(34)一可佳中任意的1种或2种以上。
[0103]
化学杀虫剂包括：(1)丙氨酸甲酯、(2)苯醚甲环性、(3)速克灵、(4) 进口甲托、(5)苯并咪唑44号、(6)密霉胺、(7)福美霜、(8)进口蓝粉、 (9)氯虫苯甲酰胺、(10)高效氯氟氰
菊酯、(11)乙基多杀菌素、(12)灭 幼脲氯氰菊酯、(13)吡虫啉、(14)、(15)赤霉酸、(16)吲哚乙 酸、(17)吲哚丁酸、(18)烯腺嘌呤、(19)羟烯腺嘌呤、(20)苄氨基嘌呤、(21)24-表芸苔素内酯、(22)22,23,24-表芸苔素内酯、(23)28-表高芸苔素 内酯、(24)28-高芸苔素内酯、(25)14-羟基芸苔素甾醇、(26)三十烷醇、 (27)s-诱抗素、(28)抗坏血酸、(29)糠氨基嘌呤、(30)二氢卟吩铁、(31) 尿囊素、(32)超敏蛋白、(33)极细链格孢激活蛋白、(34)氨基寡糖素、(35) 香菇多糖、(36)几丁聚糖、(37)葡聚烯糖、(38)低聚糖素、(39)β-羽扇 豆球蛋白多肽、(40)胆钙化醇、(41)米尔贝霉素、(42)括二化螟性诱剂、 (43)斜纹夜蛾诱集性信息素、(44)绿盲蝽性信息素、(45)梨小性迷向素、 (46)苹果蠹蛾性信息素中的任意1种或2种以上。
[0104]
生物杀虫剂包括：(1)枯草芽孢杆菌、(2)短稳杆菌、(3)多粘类芽孢 杆菌、(4)苏云金芽孢杆菌、(5)甲基营养型芽孢杆菌、(6)海洋芽孢杆菌、 (7)坚强芽孢杆菌、(8)球形芽孢杆菌、(9)蜡质芽孢杆菌、(10)荧光假 单胞杆菌、(11)侧孢短芽孢杆菌、(12)短稳杆菌、(13)地衣芽孢杆菌、(14) 解淀粉芽孢杆菌、(15)沼泽红假单胞菌、(16)嗜硫小红卵菌、(17)白僵菌、 (18)球孢白僵菌、(19)金龟子绿僵菌、(20)哈茨木霉菌、(21)木霉菌、 (22)淡紫拟青霉、(23)厚孢轮枝菌、(24)耳霉菌、(25)盾壳霉、(26) 小盾壳霉、(27)寡雄腐霉菌、(28)蟑螂病毒、(29)多角体病毒、(30)颗 粒体病毒、(31)多杀霉素、(32)阿维菌素、(33)蝗虫微孢子虫中的任意1 种或2种以上。
[0105]
植物杀虫剂包括：(1)印楝素、(2)苦参碱、(3)、(4)烟碱、 (5)鱼藤酮、(6)除虫菊素、(7)苦皮藤素、(8)桉油精、(9)八角茴香 油、(10)狼毒素、(11)雷公藤甲素、(12)莪术醇、(13)蛇床子素、(14) 丁子香酚、(15)大黄素甲醚、(16)香芹酚、(17)小檗碱、(18)甾烯醇、 (19)茶皂素、(20)螺威、(21)大蒜素、(22)d-柠檬烯、(23)萜烯醇、 (24)异硫氰酸烯丙酯、(25)十五烯苯酚酸、(26)十三烷苯酚酸、(27)苯 丙烯菌酮中的任意1种或2种以上。
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表8地衣芽孢杆菌zlp-81杀虫剂配方
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[0112][0113]
以上所述的实施例和方法是本发明的最佳实施方案，在不脱离本发明技术原 理的前提下，还可以做出部分改变、修饰、替代、组合，都包含在本发明的保护 范围之内。