ache

乙酰胆碱酯酶（acetylcholinestera，AchE）活性测定试剂盒使用说明

分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

货号：BC2020

规格：50管/48样

产品内容：

提取液：液体×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一，充分震荡溶解。

产品说明：

AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水

解，在神经传导调节中起重要作用。

AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲

酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g

组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，8000g4℃离心10min，取上清液待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例

（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间

隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

二、测定操作：

1.分光光度计预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。

2.试剂二置于37℃水浴中预热30min。

3.空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂一、50μL

试剂二和50μL试剂三，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光

值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2－A1

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液、800μL试剂一、50μL

试剂二和50μL试剂三，，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸

光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3

注意：空白管只需测定一次。

三、AchE活性计算公式：

1.组织AchE活性

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmolTNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/mgprot)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷（Cpr×

V样）÷T

=245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmolTNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/g)=[(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷（W×V样÷V

样总）÷T

=245×(△A测定管-△A空白管)÷W

2.细菌、细胞AchE活性

活性单位定义：每104个细胞每分钟催化产生1nmolTNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/104cell)=[(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷（细胞数

量×V样÷V样总）÷T=245×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量

3.血清AchE活性

活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmolTNB的酶量为1个酶活单位。

AchE酶活(nmol/min/mL)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷×V样÷T

=245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

ε：TNB摩尔消光系数，13.6×103L/mol/cm；V反总：反应体系总体积（L），1mL=0.001L；

106：1mol=1×106μmol；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；W：样

本质量，g；V样：加入上清液体积（mL），0.1mL；T：反应时间（min），3min。