白细胞介素1

人白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫分析

试剂盒利用说明书

本试剂盒仅供研究利用。

检测范围：96T

1pg/ml-40pg/ml

利用目的：

本试剂盒用于测定人血清、唾液及相关液体样本中白细胞介素1β（IL-1β）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素1β（IL-1β）水平。用纯化的人

白细胞介素1β（IL-1β）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入

白细胞介素1β（IL-1β），再与HRP标记的白细胞介素1β（IL-1β）抗体结合，形成抗体

-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化

成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素1β（IL-1

β）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中

人白细胞介素1β（IL-1β）浓度。

试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（80pg/ml）×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1．标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不

能马上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可依照以下图表在小试管中进行稀

释。

40pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

20pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

10pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

5pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟之内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，依照样品的

OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保留。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。

3．各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。一次加样时刻最好

操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量太高（样本OD值

大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计

算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。

6．底物请避光保留。

7．严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保留条件及有效期

1．试剂盒保留：；2-8℃。

2．有效期：6个月