envision

・实验技术・

Envision法与LSAB法在免疫组化染色中的对比观察

李 雯 梁颜笑 刘国荣

(广州医学院附属市一医院病理科,广州510180

)

摘要 目的:对目前免疫组织化学染色中应用最为广泛的Envision二步法与LSAB三步法进行比较。方法:将

本科常规肿瘤活检标本固定,脱水,石蜡包埋,切片,分别应用CK、Envision法和LSAB法进行相应的30多种不同单

克隆/多克隆抗体免疫组化染色。结果:两种方法特异性强,阳性定位准确,无差异。Envision法敏感度及阳性强度

均优于LSAB法,操作更为简便,更省时,背景清晰,非特异性染色少,缺点是试剂盒在价格上略高于LSAB法。结

论:Envision二步法特别适合于快速临床病理诊断,而LSAB法应用于科研或定量试验比Envision法效果更理想。

关键词 Envision;LSAB;免疫组化方法;对比

中图分类号 R392-33 文献标识码:A 文章编号:1008-1836

(

2002

)

04-0050-03

作者简介:李雯,女(

1968.11-

)

,主管技师。

研究方向:免疫组织化学。

随着免疫组织化学技术在病理诊断和科研工作

中的普及,其检测方法也在不断改进和提高,向着更

敏感、更特异方向发展。本文对免疫组织化学染色

中最常用的Envision二步法和LSAB三步法进行比

较,找出两种方法各自的优缺点,为免疫组化染色提

供更好的选择方法。

1 材料和方法

1.1 标本

取自本科常规肿瘤活检标本,包括多种上皮源

性肿瘤、间叶源性肿瘤、神经源性肿瘤和淋巴瘤等。

组织经10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,

60℃烘烤30min。

1.2 试剂

所用的抗体有CK、CK7、CK19、CK20、CEA、

EMA、CA125、Vim、HHF235、SMA、C2Kit、Desmin、

S2100、CD31、CD34、CD68、HMB245、ER、PR、Cerb2

B22、VEGF、PCNA、P53、GFAP、NSE、CgA、Syn、

LCA、UCHL1、CD3、CD20、CD79

α

、HPV等30多种

单克隆和多克隆抗体。Envision法和LSAB法试剂

盒均为DaKo公司产品。

1.3 方法

上述抗体同时用Envision法和LSAB法进行免

疫组化染色。首先将切片常规脱蜡至水,微波抗原

修复或胰蛋白酶消化处理,0.05mol/LPBS清洗3

次,每次3min,根据组织的需要,滴加不同的一抗,

具体染色方法和时间见表1。

表1 Envision法与LSAB法染色步骤和时间

Tab.1 ThedyeingstepandtimeofEnvisionπs

methodandLSABπsmethod

DyeingstepEnvisionπs

(

time

)

LSABπS

(

time

)

Firstantibody

(

37℃)

20～30min30～60min

Secondantibody

(

37℃)

10～30min20～30min

Thirdantibody

(

37℃)

20～30min

2 结果

两种方法特异性强,阳性定位准确,分别为细胞

浆、细胞核、细胞膜和间质,呈棕色的阳性反应,经苏

木素复染后,棕色与蓝色对比鲜明,大多数组织片均

无显著的背景染色,为免疫组化染色中较为理想的

两种选择方法。Envision法敏感度与阳性强度均比

LSAB法高,并使一抗的稀释度提高了1～2倍,背

景更加清晰,非特异性染色少,而且简化了操作步

骤,只需两步就可完成,缩短了染色时间,比LSAB

法节省时间40～60min,缺点是试剂盒价格上略高

于LSAB法试剂盒。

3 讨论

免疫组织化学技术是利用已知的特异性抗体与

抗原的特异性结合来鉴定组织或细胞内某种物质的

性质,并利用酶作用于底物所产生的颜色反应来显

示的一种技术。它经历了三步法的PAP法、ABC

法、LSAB法发展到二步法、一步法,目前应用最广,

染色结果最为理想是LSAB法和Envision法。

Envision法是利用葡聚糖多聚体复合物技术,将一

05

第30卷第4期 广州医学院学报 Vol.30No.4

2002年12月 ACADEMICJOURNALOFGUANGZHOUMEDICALCOLLEGE Dec.2002

个抗小鼠(或兔)的免疫球蛋白与过氧化物酶(或碱

性磷酸酶)联结到葡萄糖的聚合物上而成。LSAB

法为过氧化物酶标记的链霉卵白素-生物素亲和反

应,其链霉卵白素有四个亚基可和生物素结合,具有

灵敏度高、特异性强、背景清晰的特点[1,2]。通过对

Envision和LSAB两种方法的比较发现,Envision法

在敏感度、染色步骤、时间、背景染色等方面均优于

LSAB法,是一种高敏感、快速的试验方法,只是试

剂盒价格略高。

Envision法第二抗体上标记有多聚物酶(

HRP

或AP

)复合物,含有多个抗兔或抗鼠免疫球蛋白和

较多的HRP分子,能充分与第一抗体结合,敏感度

较LSAB法高出几十倍,同时对抗原有显著的放大

作用,使第一抗体稀释度提高1～2倍[3],尤其是对

抗原表达较弱的组织,如ER、PR等Envision法比

LSAB法更理想。

Envision法为非卵白素-生物素反应,第二抗

体没有生物素的存在,无非特异性干扰,无需血清封

闭,避免了内源性生物素造成的背景染色,背景更清

晰,适合于在内源性生物素含量高的组织进行免疫

组化染色[4]。由于LSAB法中含有生物素,与组织

中内源性生物素起交叉反应,形成卵白素(或链霉卵

白素)

-生物素复合物,易造成一定的背景染色特别

是对于S2100、GFAP、NSE、Syn、CgA、HPV等抗体

尤为显著。

Envision法多聚物酶分子结合的第二抗体孵育

时间较短,比LSAB法省时40～60min,在操作步骤

上只需两步,比LSAB法操作更为简便,同时也减少

一次PBS的冲洗步骤和时间,节省了人力和物力。

特别适合于快速临床病理诊断。但如果应用于科研

或定量试验,特别是较新首次使用的抗体,我们发现

使用LSAB法,一抗在4℃冰箱过夜,结果更理想。

Envision二步法试剂盒在价格上高于LSAB三

步法试剂盒,一般较适合于大型医院,LSAB法较经

济实惠,在中小型医院应用较为普及。

图1 CK19细胞浆强阳性,背景清晰。Envision×200

图2 CK19阳性强度较Envision法弱。LSAB×200

图3 VEGF细胞浆强阳性。Envision×400

Fig.1 StrongpositivereactionforCK19wasshowninplasm,withclearbackground,Envision×200

Fig.2 WeakerpositiveintensityforCk19waseninLSABπsthanEnvisionπs,LSAB×200

Fig.3 StrongpositivereactionforVEGFwaseninplasm,Envision×400

图4 VEGF阳性强度较Envision法弱。LSAB×200

图5 CerbB22细胞膜及细胞浆强阳性。Envision×400

图6 CerbB22阳性强度较Envision法稍弱。LSAB×400

Fig.4 WeakerpositiveintensityforVEGFwaseninLSABπsthanEnvisionπs,LSAB×200

Fig.5 StrongpositivereactionforCerbB22wasenincellmembraneandplasm,Envision×400

Fig.6 WeakerpositiveintensityforCerbB22waseninLSABπsthanEnvisionπs,LSAB×400

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第4期 李雯,等:Envision法与LSAB法在免疫组化染色中的对比观察

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(收稿日期 2002-09-12

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AComparativeObrvationinImmunohistochemistry

StainingMethods:EnvisionvsLSAB

LIWen,LIANYan2Xiao,LIUGuo2Rong

(

ology,FirstAffiliatedMunicipalHospital,GuangzhouMedicalCollege,Guangzhou510180)

Objective:TocompareEnvisionπsandLSABπsmethodsthatarecurrentlyappliedwidelyin

:Tofixate,dehydrate,waxandctiontheusualsamplesfromtumor

thecorrespondingthirtyormorespeciesofmonoclonal/polyclonalantibody

immunohistochemistystainingrespectivelywithEnvisionπsandLSABπ:Thetwomethods

sitivityandpositiveintensityof

EnvisionπsmethodarebetterthanthatofLSABπmerisoperatedmorebrieflyandfaster,withclear

ttingandlittlenonspecificstaining,butismoreexpensivethanLSABπsion:

Envisionπsmethodispeciallyfavorableinfastclinicalpathologicdiagnosis,whileLSABπsmethodismore

effectiveforscientificrearchorratiotrial.

Keywords Envision;LSAB;immunohistolochemistrymethod;contrast

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广州医学院学报(

JGZMC

) 2002,30

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4

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