pepsin

二甲基亚砜和四氢呋喃对胃蛋白酶催化动力学和分子光谱的影

响

黎春怡;黄卓烈;李利佳;巫光宏;何平;朱国辉

【摘要】为了研究二甲基亚砜(DMSO)和四氢呋喃(THF)对胃蛋白酶(Pepsin,PP)催

化活性的影响及其作用本质,测定了在这两种有机溶剂的作用下胃蛋白酶的催化活

性、动力学参数、紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化.结果表明,

体积分数为9％的DMSO使PP活性提高83.4％；而体积分数为1％的THF只能

使PP活性提高3.59％.在盐酸溶液中,PP的动力学参数Km=2.22

mg/mL,vmax=1.1×106U/mgPro;在9％DMSO中,其Km=1.50

mg/mL,vmax=0.5×106U/mgPro;在1％THF中的Km=1.91

mg/mL,vmax=0.51×106U/mgPro.9％DMSO强烈抑制PP分子肽键的紫外吸

收,而对芳香族氨基酸无影响；1％THF则对PP的紫外吸收光谱影响不大.9％

DMSO和1％THF都使PP的紫外差示光谱出现明显的负吸收峰和正吸收峰.9％

DMSO使酶分子的荧光发射峰向短波方向移动1nm；而1％THF则对其无影响.

实验结果表明,在9％DMSO和1％THF中,PP分子的立体构象发生了变化,使酶分

子的Km下降,酶分子对底物的亲和力有所升高,从而导致酶分子的催化活性有不同

程度的提高.%Inordertoapproachtheeffectsandactionmechanismof

dimethylsulfoxide(DMSO)andtetrahydrofuran(THF)onpepsin,the

catalyticactivity,kineticsparameters,ultravioletabsorptionspectra,

ultravioletdifferentialspectra,andfluorescenceemissionspectraofpepsin

ndicatedthatpepsinactivitywanhancedby83.

4%astheenzymewastreatedwith9%npepsinwas

treatedwith1%THFtheenzymeactivitywanhancedonlyby3.59%.In

hydrochloricacidsolutionthekineticsparameteroftheenzyme,Km=2.

22mg/mL,vmax=1.1×106U/9%DMSO,Km=1.50mg/mL,

vmax=0.5×l06U/1%THF,Km=1.91mg/mLandvmax=0.51

×l06U/9%DMSOtheultravioletabsorptionofpepsinpeptide

ultravioletabsorptionofaromatic

ravioletabsorptionof

pepsinmoleculeswasnotinfluencedobviouslyin1%9%

DMSOandin1%THFtheultravioletdifferentialspectraofpepsinshowed

orescenceemissionpeakof

pepsinenzymemovedtoshortwavelengthdirectionby1runin9%DMSO.

Butin1%THFthefluorescenceemissionspectrumdidnotchange

oncludedfromtheresultsthattheconformationof

pepsinmoleculeschangedobviouslyinboth9%DMSOand1%

ledtheKmvalueoftheenzymedescendedandtheaffinityoftheenzyme

atalysisactivitiesoftheenzymewere

increadinsomeextentinthesolutions.

【期刊名称】《高等学校化学学报》

【年(卷),期】2012(033)005

【总页数】8页(P988-995)

【关键词】胃蛋白酶;二甲基亚砜;四氢呋喃;动力学;光谱

【作者】黎春怡;黄卓烈;李利佳;巫光宏;何平;朱国辉

【作者单位】华南农业大学生命科学学院,广州510642;茂名职业技术学院,茂名

525000;华南农业大学生命科学学院,广州510642;华南农业大学生命科学学院,广

州510642;华南农业大学生命科学学院,广州510642;华南农业大学生命科学学院,

广州510642;华南农业大学生命科学学院,广州510642

【正文语种】中文

【中图分类】O629;Q556

胃蛋白酶（Pepsin，PP）是一种单链酶，分子量约为35500.在pH=1.5～5.0条

件下，细胞合成的胃蛋白酶原裂解变成小分子的胃蛋白酶.PP在胃中酸性很强的环

境下消化蛋白质，促使苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、亮氨酸、谷氨酸以及谷氨酰胺

等氨基酸形成的肽键断裂，使大分子的蛋白质变为较小分子的多肽.在pH=2时，

PP优先作用于天然蛋白质，pH=4时能消化某些特异性的肽，pH超过6时失去

活性.在体外，PP的持续作用可使蛋白质分子中约30%的肽键分裂，形成脙、胨

和一些氨基酸，而且一部分被分解为酪氨酸和苯丙氨酸等氨基酸.PP不作用于角蛋

白和粘蛋白，亦不作用于低分子量的蛋白衍生物.在复合维生素与蛋白质的结合和

释放上，PP亦起主要作用.

传统的观点认为，酶作为一种高效的催化剂只在水溶液中才可发挥催化作用，在有

机溶剂中会发生构型变化而失活，这极大地限制了酶在工业上的应用.20世纪60

年代，人们发现来自生物体的几种酶在有机溶剂中仍有活性［1，2］;Zaks等［3］

发现某些酶在近乎无水的环境下仍有催化活性，并且酶的稳定性还有所提高;Ru等

［4，5］和Yang等［6］对枯草杆菌蛋白酶的研究发现，有机溶剂能极大地增强

该酶的活性;Klibanov［7］报道，在有机溶剂存在的情况下，部分酶的催化活性有

较大的改善;Doukyu等［8］发现有些酶能强烈忍受有机溶剂对其分子结构的影响，

在较大浓度的有机溶剂存在下仍表现出较高的催化活性;Serebryakova等［9］报

道了水溶性有机溶剂存在时能有效地提高氢化酶的活性;Serdakowski等［10］发

现不同的有机溶剂对不同酶激活的程度有较大的差别;Szabo等［11］发现经化学

修饰的木瓜蛋白酶的分子稳定性和催化活性在水溶性有机溶剂中均得到较大的改善.

有机溶剂主要通过对体系中水、酶以及底物和产物的作用来间接或直接影响酶活性.

李秀文等［12］认为有机溶剂可以用3种方式来影响酶促反应:第一种方式是有机

溶剂可能与酶直接发生作用，干扰酶分子的氢键和疏水键，改变酶分子的空间结构，

从而导致酶催化活性的改变;第二种方式是有机溶剂可能与扩散的底物或反应产物

发生相互作用，从而影响反应的速度;第三种方式是有机溶剂可能直接与酶分子周

围的水发生相互作用.一般认为，在非水相反应体系中，添加亲水性或水互溶性的

有机溶剂对酶的催化活性不利，因为它们会夺去酶表面微环境中的水而使其失活.

尽管关于有机溶剂对酶促反应影响的研究非常活跃，但迄今仍处于实验阶段，离工

业生产大规模应用还有一定的距离，其主要原因之一是多数酶在有机溶剂中活性并

不高.有机溶剂中酶的活性通常要比水溶液中低2～6个数量级.因此，确定有机溶

剂中酶活性的影响因素，提高有机溶剂中酶活性成为当今酶学研究的重要课题.

目前，关于有机溶剂对PP的催化作用影响的研究尚未见报道.本文利用二甲基亚砜

（DMSO）和四氢呋喃（THF）为效应物，研究了PP在这两个体系中的催化活性

变化及催化动力学;并通过研究PP在DMSO和THF作用下的紫外吸收光谱、紫外

差示光谱及荧光发射光谱的变化，探索这两种有机溶剂对酶分子结构和催化活性影

响的作用本质.

1.1试剂与仪器

胃蛋白酶购于Sanland化学试剂有限公司，纯酶由此胃蛋白酶纯化提取而得;商品

胃蛋白酶纯酶、酪蛋白及牛血清白蛋白购于美国Sigma公司;考马斯亮蓝G250和

R250均购于Fluka公司;其余试剂为国产分析纯试剂.

UV240pc紫外-可见分光光度计（日本岛津）;F4500型荧光分光光度计（日本日

立）;DYY-5稳压稳流电泳仪（北京六一厂）;凝胶成像系统（珠海黑马）.

1.2实验方法

1.2.1PP溶液的制备将PP用0.065mol/LHCl溶解并配制成1mg/mL的溶液.蛋

白质含量参照Bradford方法［13］测定.PP活性的测定参考中国药典（2000）方

法，并作适当的修改，以酪蛋白为底物.酶促反应后，在275nm测定所生成酪氨

酸的吸光值.酪氨酸标准吸光度（As）的测定:精密称取酪氨酸适量，溶于0.065

mol/LHCl配制成0.5mg/mL标准酪氨酸溶液，在275nm测得其As=0.440.

PP活性单位的定义:在pH=1.5和37℃条件下，每毫克蛋白质水解酪蛋白每分钟

产生1μg酪氨酸为1个PP活性单位（U/mg）.

1.2.2有机溶剂中PP的活性测定以0.065mol/LHCl分别配制不同体积分数的

DMSO溶液和THF溶液，PP在DMSO和THF溶液中的活性测定参照其在水溶

液中的方法进行.

1.2.3PP的纯化参考文献［14，15］方法进行.PP粗酶液经SephadexG-100层

析分离纯化，柱子预先用pH=3.6的0.05mol/LNaAc-HAc缓冲液平衡，柱床体

积2cm×50cm，加样量为3mL，用自动部分收集器收集，4mL/管.测定各管收

集液的A280nm及其酶活性.

1.2.4PP纯度鉴定通过垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）鉴定经纯化PP的纯

度.浓缩胶质量分数为5%，分离胶质量分数为7.5%，点样量为15μL/孔.样品在

浓缩胶时电压为100V，进入分离胶后电压为200V.电泳后用考马斯亮蓝R-250

染色30min后脱色，然后检验酶的纯度，并用黑马凝胶成像系统拍照.

1.2.5PP动力学测定蛋白酶可采用酪蛋白为底物测定动力学［16～21］.在37℃

和pH=1.5条件下分别测定了PP在0.065mol/LHCl，DMSO及THF中的催化

动力学，用双倒数作图法分别求出Km值和vmax值.

1.2.6光谱分析以相应的溶剂作为空白，分别测定了PP在0.065mol/LHCl，

9%DMSO和1%THF中的紫外吸收光谱、紫外差示光谱以及荧光发射光谱.

2.1胃蛋白酶的纯化及纯度鉴定

PP粗酶液经SephadexG-100分离纯化，检测蛋白质含量（A280nm）和酶活性，

得到3个蛋白峰，其中最高酶活性峰与第2个蛋白峰重叠（图1），与第3个蛋

白峰重叠的有1个很小的酶活性峰.收集第2个酶活性峰液，此活性峰酶的比活性

比粗酶提高了2.67倍.

将纯化后酶比活性最高的一管酶液浓缩后进行PAGE鉴定，电泳图见图2.可见，

纯化后的PP仅剩余一条与商品纯酶迁移率相同的电泳带，说明该酶的纯度已达到

电泳纯，可用于DMSO和THF对PP活性影响的验证实验、动力学及光谱学研究.

2.2不同浓度的有机溶剂对胃蛋白酶催化活性的影响

以0.065mol/LHCl中的PP活性作为对照（即0%）测定了不同浓度DMSO和

THF对PP活性的影响.图3（A）是用未经纯化的PP的实验结果，可见DMSO和

THF对PP均表现出激活作用，但激活程度有所不同.在DMSO中，PP活性表现

为中、低浓度被激活，高浓度时被抑制;DMSO对PP的最大激活浓度为9%，此

时酶活性比对照提高了83.4%;当浓度高于9%，随着DMSO浓度的增大PP活性

升高的幅度降低;当浓度大于22%后，DMSO开始表现出对PP的抑制作用.极低浓

度的THF对PP有轻微激活作用，1%THF对PP的激活程度最大，但酶活性比对

照只增加3.59%，几乎可以忽略;当THF浓度大于3%后，PP活性开始被抑制;浓

度为16%时，PP活性只为对照的17.0%;浓度达到41.7%时，酶完全丧失活性.图

3（B）是提纯后PP的实验结果，可见不同浓度DMSO和THF对酶活性影响的规

律与图3（A）的规律基本一致，只是纯酶的比活性比粗酶要高得多.

酶在有机溶剂中的结构和活性与溶剂的性质有一定相关性.DMSO，THF和水的极

性大小顺序为水＞DMSO＞THF.纯水中加入有机溶剂会使体系的极性降低，有机

溶剂的极性越小，体系极性降低的程度越大;体系中有机溶剂的浓度越大，极性的

降低程度也越大.极性降低使水系统局部能量降低，有利于水集团的拆散，使单体

水分子数目增加，从而有利于蛋白质对水分子的结合，使酶分子因表面吸附的水分

子数量增多而柔性增大，导致酶与底物间形成过渡态的能阈更小，最终使酶活性升

高.

然而，水溶性酶的带电基团与极性基团通常分布在分子表面，非极性疏水基团包埋

于内部，在极性很强的水溶液中处于热力学稳定状态（即能量最低状态）.由于热

运动，酶分子在水溶液中的构象处于一种动态变化中，可能使内部的非极性疏水基

团翻到表面.但是，疏水基团翻出作用是一种热力学非自发过程，需要很高的活化

能，通常几率很小.有机溶剂的加入可使溶液极性降低，导致蛋白质体系的稳定性

降低，疏水基团翻到表面所需的活化能减小，翻出几率就会增大［22］，使酶分

子的构象发生较大的改变，从而使酶活性降低.

杨红等［23］研究发现，酶在有机溶剂中发生的变化与其种类有关，极性较强的

有机溶剂更容易导致酶的构象发生变化.如DMSO不仅能使少量的异常β-折叠和

部分无规卷曲转变为正常β-折叠，还能继续诱导α-螺旋的产生，而环己烷却不能

诱导α-螺旋的产生.这可能是因为较强极性溶剂易溶于水，能越过酶分子周围的

“必需水”层而与酶分子直接发生作用;而对于极性较弱的溶剂，实现这一过程的

阻力较大.刘红兵等［24］和Ryu等［25］的研究表明，有机溶剂对不同种类酶的

结构影响有很大差异.

体系中酶的活性取决于其被吸附的水分，过量的水会引起活性中心内部水簇的生成，

从而改变活性中心结构，最终导致酶活性下降.以往的观点认为，酶分子需要的这

层较薄的水合层充当微环境的成分，作为酶表面与主体反应物之间的缓冲层，对保

持酶活性起着非常重要的作用.我们认为，蛋白质的结合水减小导致各极性残基之

间的相互作用而彼此分开，使活性点具有更大运动自由度，使酶与底物间形成过渡

态的能阈变小，直接导致酶活性的增加.经过有机溶剂的处理，可以使水系统局部

能量降低，有利于集团的拆散，单体水分子数目增多，则有利于蛋白质对水分子的

结合，使酶分子表面吸附的水分子数目增多，酶分子的柔性增大，酶与底物间形成

过渡态的能阈更小［26］.

以上机理的共同作用可用于解释本实验的结果，即在适宜浓度下，PP在DMSO

中的活性大于在THF中的活性.

2.3DMSO和THF对PP的动力学参数的影响

PP在0.065mol/LHCl，9%DMSO和1%THF中的动力学曲线见图4.根据双倒

数作图法求出PP在0.065mol/LHCl中的Km=2.22mg/mL，

vmax=1.1×106U/mgPro;在9%DMSO中的Km=1.50mg/mL，

vmax=0.5×106U/mgPro;在1%THF中的Km=1.91mg/mL，vmax=0.51×

106U/mgPro.可见，与对照相比，9%DMSO和1%THF中PP的Km和vmax

都有所下降，表明虽然在此环境中酶分子的最大反应速度有所降低，但酶与底物的

亲和力增加了.由DMSO对PP的激活作用，推测在9%DMSO存在下酶分子与底

物亲和力增加效应比最大反应速度降低的效应明显.而PP在1%THF中的Km值介

于0.065mol/LHCl和9%DMSO之间，表明1%THF对PP的激活作用主要也

是通过增强酶分子与底物的亲和力实现的，但与DMSO相比要差得多.

在有机溶剂中，酶的动力学参数与有机溶剂的浓度以及底物溶剂化有很大关系，有

机溶剂通过改变底物和产物在有机溶剂与酶活性部位微水相之间的分配来影响酶的

活性.实验中发现，PP在9%DMSO和1%THF中的Km均下降，说明此时酶分

子与底物的亲和力都有不同程度的提高，这有利于催化反应，但同时vmax也变

小了.根据经典动力学分析推断，常温下这些有机溶剂对酶的影响类似于反竞争性

抑制，即酶先与酪蛋白结合，然后才与有机溶剂结合.有机溶剂对酶催化作用的影

响，主要通过“微调”反应体系中的极性.DMSO和THF的极性均比水低，可能中

和了酶分子极性侧链基团之间的偶极相互作用，也可能使水系统的内聚能减少，从

而使酶分子表面吸附的水分子数增多.两种情况都使酶分子的柔性增大，酶与底物

间形成过渡态的能阈更小，从而增大了酶与底物的亲和力.但体系极性的改变也使

催化中心的环境发生变化，导致最大反应速度下降.其中，9%DMSO和1%THF可

能由于对增大酶与底物的亲和力贡献比较大，所以表现为激活，但激活的程度有所

不同（见图3）.

2.4DMSO和THF对PP的紫外吸收光谱的影响

有机分子的紫外吸收光谱是由其共价结构决定的，通过对比天然PP和经不同有机

溶剂处理后的PP的紫外吸收光谱，可以探讨有机溶剂对PP催化活性的影响与其

分子构型变化之间的关系.通常，蛋白质在水中的紫外吸收光谱在270～280nm

及200～230nm波长范围内各有一个吸收峰，250nm附近是低谷.其中270～

280nm的峰由酪氨酸（Tyr）和色氨酸（Trp）侧链所致，200～235nm的峰则

为肽链中肽键的吸收.

从图5可以看出，在0.065mol/LHCl中PP的紫外吸收光谱有2个明显的吸收

峰，其中270～280nm处的吸收峰是Tyr的特征吸收峰，在276nm处有最大吸

收值（0.135），为酶分子的芳香族氨基酸（Tyr，苯丙氨酸Phe和Trp）的特征

吸收;另有1个较强的吸收峰出现在204nm处，最大吸收值为2.621，是酶分子

肽键的吸收.PP在9%DMSO中的紫外吸收光谱（已扣除DMSO的紫外吸收）与

在0.065mol/LHCl中的相比发生了明显变化，在236～242nm处出现1个明

显的吸收峰，而在200～235nm处有很多小峰取代了原来在202～206nm处的

吸收峰，可见，在此波长区域内肽键的吸收被大大削弱;但在275～280nm处保

留了芳香族氨基酸的特征吸收峰，最大吸收值为0.165;由此推测，处于9%DMSO

中PP的分子构象发生了较大变化.而在1%THF中，PP的紫外吸收光谱（已经扣

除THF的紫外吸收）与0.065mol/LHCl中的相比则变化不大，峰形和峰位基本

不变;其中275～280nm处的芳香族氨基酸特征吸收峰基本不变，峰值略为增加

（0.167）;202～206nm处的吸收峰略有红移，峰位移至205～210nm处;由此

推测，经低浓度（1%）THF处理的PP分子的构象也发生了变化，但变化较小.

可见，DMSO和THF的存在影响了PP的二级构象.DMSO的加入可能打断了酶

分子的某些二硫键或使某些深埋的半胱氨酸（Cys）暴露，导致酶分子二级、三级

结构部分改变，使肽键所处的环境发生了较大的变化，这种变化显得比Trp和Tyr

残基更敏感［27］.由于Cys－在235nm附近有吸收，从而在238nm附近产生

了紫外吸收峰.由于DMSO在215～233nm有较大的吸收（λmax=226nm），

所以在扣除参比后，在此波段产生噪音，因此不能分析该波段经DMSO处理PP

的紫外吸收光谱.1%THF使PP在204nm处的吸收值下降，可能是由于低浓度

THF的存在降低了体系的极性，使天然酶分子的某些极性氨基酸残基从分子表面

转入内部，而原来埋藏在内部的残基则埋藏得更深，因而肽链的吸收值降低.

2.59%DMSO和1%THF中PP的紫外差示光谱

从图6可以看出，在9%DMSO中，PP的紫外差示光谱出现了明显的负吸收峰和

正吸收峰.202～206nm范围内有1个明显的负吸收峰，最大负吸收值为－2.519，

延伸到236nm处，自237nm开始为正吸收;237～240nm范围内有一个较小

的正吸收峰，最大峰值为0.194，并延伸到303nm处基本消失.以上结果表明，

9%DMSO能改变酶分子的构象，使其趋向有利于催化反应的方向进行，对该酶起

激活作用.

在1%THF中，PP的紫外差示光谱也出现2个明显的吸收峰，一正一负.200nm

附近为负吸收，最大吸收值为－1.117，直到207nm消失;220～225nm附近有

一个正吸收峰，222nm有最大正吸收值0.198，与在DMSO中的结果相似，说

明1%THF也使酶分子构象发生了一定的变化，使其对酶促反应有微小的促进作用.

紫外差示光谱的变化进一步反映了酶在有机溶剂中与Tyr及Trp残基有关的构象

变化.研究表明，260，285和292nm的差示吸收峰主要与Phe，Tyr和Trp有关

［28］;酶α螺旋结构的变化和236nm差示吸收的变化直接相关［29］;220和

236nm的差示吸收与酶分子主链去折叠有关［30］;232nm的差示吸收与主链

的构象变化有关［31］.文献［29］还指出，在190～220nm波长附近，测定酶

分子中芳香族残基（Tyr和Trp）的光吸收变化，以检测和追踪酶分子中α螺旋与

无规则卷曲的变化，当肽链骨架由无规则卷曲变成α螺旋时，吸收明显下降.

在DMSO中，PP在200～220nm的负吸收应归因于肽链骨架的无规则卷曲变成

α螺旋结构，220～236nm的负吸收则可能与酶分子主链的去折叠有关;在237～

240nm出现的微小正吸收可能与主链的构象变化相关.所以，9%DMSO对PP的

激活作用应该是通过改变酶分子的主链构象，使酶与底物的结合变得更加容易.

在THF中，PP在200～207nm产生的负吸收峰应归因于PP肽链骨架的无规则

卷曲变成α螺旋结构;220～225nm处的正吸收峰可能与酶分子主链的折叠相关.

由此推测，THF对PP的影响主要通过改变其主链的α螺旋结构.

2.6DMSO和THF中PP的荧光发射光谱

实验采用波长280nm的光激发测定了PP的荧光发射光谱.由图7可见，在0.065

mol/LHCl中PP在337～342nm有1个强荧光发射峰，是其特征发射峰，在

339.6nm有最大荧光强度（1232.9）.经DMSO处理后，PP的荧光发射峰向短

波方向移动1nm左右，位于338.4nm处，最强荧光强度为1381，比在HCl中

提高12.09%.而在1%THF中，PP荧光发射峰与在HCl中的基本重叠，且荧光强

度基本不变.

酶分子中Trp，Tyr和Phe具有荧光性（其相对荧光强度为100∶9∶0.5），此内

源荧光可作为探针检测酶分子构象变化，用278nm波长光激发时，Tyr和Trp残

基受到激发，295nm的光只激发Trp残基，所产生荧光的强度和位置与这些残基

所处的微环境密切相关.如果酶分子中不含Trp，只含Phe和Tyr（称为A类蛋白

质），则荧光光谱主要表现Tyr的特征，最大发射波长约为304nm;对于含有Trp

的蛋白（称为B类蛋白质），荧光光谱则主要表现Trp的特征，最大荧光发射在

310～350nm之间.处于蛋白质分子表面的Trp残基具有350～353nm的荧光发

射峰，包埋于内部Trp残基的发射峰在326～332nm之间，处于非极性环境Trp

残基的发射峰在310～324nm附近［32］.本实验用280nm波长光激发时，天

然PP的最大发射峰在340nm附近，说明PP荧光主要来源于Trp残基，且部分

Trp处于分子表面，部分包埋于内部.

通常，极性增强使π-π*跃迁的能量降低，导致荧光增强［33］，而在DMSO中

PP荧光强度也有不同程度的增强.这可能是加入有机溶剂后，由于酶分子表面的

Trp改变了分子环境的介电常数，从而改变了分子内部Tyr和Trp残基的微环境，

致使处于淬灭状态的Tyr荧光得以恢复;也可能是由于Trp与Tyr之间的能量传递

降低，从而使荧光强度增强.在THF中，PP的荧光强度略微下降，并且发射峰向

低波长移动3nm.其原因可能是THF的加入使酶分子构象发生了改变，主链趋于

松散，肽链各部分的非极性侧链为避开水相而尽量聚集在一起，从而使疏水核内部

的Trp残基处于比原来非极性更强的环境中，导致发射峰向低波长移动;而Trp的

进一步深埋可能会导致Trp与Tyr之间的能量传递效率降低，致使荧光强度下降.

综上所述，在9%DMSO和1%THF中，PP的立体构象发生变化，导致酶分子的

动力学参数Km下降，使酶分子对底物的亲和力有所提高，有利于酶促反应的进

行，表现为酶活性增大.这可能就是2种有机溶剂在适宜浓度下激活PP的作用本

质.

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（Ed.:H，J，K）