滤纸片法

环境因素

对微生物生长的影响

班级：食品科学与工程102班

指导老师：郭玉宝

姓名：何月

实验目的：

1、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。

2、了解常用化学消毒剂对微生物生长的影响。

实验原理：

微生物的生长繁殖受外界因素的影响。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的

机制不同，而，不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。

1、生物因素

在自然界中普遍存在网速间的颉颃现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性的一致或杀死其他微生

物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上向四周扩散后可形成抗生素

浓度由高到低的梯度，将不同试验菌与滤纸条划线接种。培养后，根据抑菌带的长短可判断出该抗生素

对不同试验菌生长的影响程度，初步确定其抗菌谱。

2、化学消毒剂

常用的化学消毒剂包括有机溶剂、重金属盐、卤族元素及其化合物。燃料和表面活性剂。

实验器材：

1、菌种

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌

2、培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基

3、溶液和试剂

青霉素溶液、无菌生理盐水、2.5%碘酒、5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭

4、仪器和其他用品

酒精灯，接种环，玻璃棒，报纸，牛皮纸，镊子，无菌平皿，无菌滤纸片，滴管，无菌滤纸片，涂布棒，

记号笔，高压蒸汽灭菌锅、三角瓶，量筒，棉线

实验过程：

一、生物因素对微生物生长的影响

（1）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。

（2）贴滤纸条：无菌操作，用镊子取无菌滤纸条浸入青霉素溶液中润湿，在容器内壁沥去多

余溶液，再将滤纸贴在平板上。

（3）接种：无菌操作，用接种针分别取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌，从滤纸

条边缘分别垂直向外划线接种。

（4）培养、观察：对上述平板导致于37℃，保温24h，观察细菌生长状况并记录。

二、化学消毒剂对微生物生长的影响（滤纸片法）

（1）菌液制备：无菌操作将金黄色葡萄球菌菌接种至装有5mL牛肉

膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿

中培养基厚度均匀。

（3）涂平板：无菌操作吸取0.2mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平

板，用无菌三角涂棒涂布均匀。

（4）标记：将上述平板皿底用记号笔分成三等分，分别标明一种消

毒剂名称。

（5）贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入各种消毒剂（2.5%碘酒、5%石炭酸、

1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭）在容器内壁沥去多余液体，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置

（不要在培养基表面拖动滤纸片）

（6）培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察并记录

抑（杀）菌圈大小。

实验结果:

一、青霉素对微生物生长的影响

由图可知，青霉素

对金黄色葡萄球菌

有明显的抑制作用，

对大肠杆菌几乎没

有抑制作用，对枯

草芽孢杆菌也几乎

没有抑制，但抑制

作用比对大肠杆菌

的抑制作用大。

原因：因为青霉素为窄谱抗生素，只对革兰氏阳性菌有抑制作用。所以

对大肠杆菌几乎没有抑制作用，对金黄色葡萄球菌抑制作用较大。枯草

芽孢杆菌也为革兰氏阳性菌，但是它的抗逆性较强，所以抑制作用不大。

二、滤纸片法检测的各种化学消毒剂对细菌的作用效果如下

75%乙

醇可能

是因为

挥发作

用太快，

导致没

有产生

抑菌效

果。

思

考题：

（1）

根据青霉素的抗菌机制，你的试验

平板上出现的抑菌带是致死效应还

是抑制效应？若抑菌带在隔一段时间

后又长出少数菌落，你如何解释这

一现象？

消毒剂抑菌圈直径/mm

2.5%碘酒20

5%石炭酸12

1%来苏尔7

75%乙醇0

0.25%新洁尔灭40

答：出现的抑菌带是抑制效应。抑菌带在隔一段时间后有长出少数菌落，

可能原因如下：1，抑菌物质失效；2，该菌产生抗性突变，可以分解抑菌

物质；3，落入了杂菌，抑菌物质不能抑制杂菌的生长。

（2）利用滤纸片法测定化学消毒剂对微生物的影响时，影响抑菌圈大小的

因素有哪些？抑菌圈大小能否准确反映化学消毒剂抑菌能力的强弱？

答：影响抑菌圈大小的因素：1、培养条件：温度、湿度、培养基PH值。2、

菌液浓度，制板时培养基温度。3、滤纸片中消毒剂的浓度，消毒剂效价等。

抑菌圈大小只能在一定程度上反应杀菌能力差异，但不能准确反映。