evg

中国组织化学与细胞化学杂志

CHINESEJOURNALOFHISTOCHEMISTRYANDCYTOCHEMISTRY

第

29

卷第

2

期

2020

年

4

月

.2

April.2020

〔收稿日期〕2019-08-15〔修回日期〕2020-04-10

〔作者简介〕周建云，女（1970年），汉族，副主任技师

*通讯作者

(Towhomcorrespondenceshouldbeaddresd)

：

463395494@

.

弹性纤维染色在评估肺癌胸膜侵犯中的应用价值

周建云，沈蓉，代魁，徐强，陆晓云*

(

南通市肿瘤医院病理科，南通

226361)

〔摘要〕目的利用维多利亚蓝染色法（EVG）对肺癌组织中弹性纤维进行定位，判断肿瘤和胸膜的关系，根据肿瘤旁

弹性纤维性状，确定胸膜被侵犯程度，对肿瘤进行分期。方法选用术后病理证实为肺癌，HE染色后不能明确是否侵犯胸

膜的病例，进行弹性纤维染色。结果经弹性纤维染色后,可更清晰显示出弹性纤维的分布性状以及与胸膜的关系，特别是

肿块紧靠胸膜的病例，区分HE染色难以判断的病例，能准确判断肿瘤是否达到胸膜或侵犯胸膜程度。结论与HE染色相

比，弹性纤维染色可清晰显示弹性纤维的分布状况，更直观判断出肿瘤与胸膜关系，定位定性更准确，有助于评估肿瘤侵袭

程度及患者的临床预后。

〔关键词〕弹性纤维染色；

HE

染色；维多利亚蓝染色法；胸膜侵犯

〔中图分类号〕R365〔文献标识码〕ADOI：10.16705/.1004-1850.2020.02.012

Applicationsignificanceofelasticfiberstainingintheasssmentoflungcancer

pleuralinvasion

ZhouJianyun,ShenRong,DaiKui,XuQiang,LuXiaoyun*

(DepartmentofPathology,NantongTumorHospital,Nantong226361,China)

〔Abstract〕

ObjectiveTolocalizeelasticfibersbyusingElasticTissueFibers-Verhoeff’sVanGieson(EVG)stainingmethod

withVictorianblueinlungcancertissues,soastodeterminetherelationshipbetweenthetumorandthepleura,andthustodetermine

theextentofpleuralinvsLungcancercascon-

firmedbypostoperativepathology,andunabletodeterminewhetherthepleurawasinvadedbyHEstaining,wereletectedandtreated

sAfterelasticfibersstaining,thedistributionofelasticfibersandtheirrelationshiptothepleurawere

clearer,especiallyincaswherethemasswasclotothepleura,whichcontributedtodistinguishingthecaswithdifficultyineval-

uationbyHEstainingfromothersandaccuratesion

ComparedwithHEstaining,EVGstainingshowsclearerdistributionofelasticfibers,whichleadstomoredirectdeterminationofthe

relationshipbetweentumorandpleurawithmoreaccuratepositioning,andthereforehelpsassstumorinvasionandclinicalprogno-

sis.

〔Keywords〕

Elasticfiberstaining;HEstain;Victorianbluestaining;pleuralinvasion.

在HE染色后细胞核为蓝色，其它成分均染成

深浅不同程度的红色，难以分辨弹性纤维与胶原纤

维。为了更直观判断出肿瘤与胸膜关系，便于评估

肿瘤侵袭程度及患者的临床预后，我们应用维多利

亚蓝染色法（EVG）特异性对弹性纤维染色，以将

肺癌组织中弹性纤维分布情况表达出来。

材料与方法

1

材料

收集

2017-2018

年南通市肿瘤医院行手术切除

的肺癌组织共

119

例，患者经病理确诊为肺癌，其

中

HE

染色观察

60

例紧靠胸膜，

HE

病理类型：非

小细胞癌

8

例，浸润性腺癌

105

例，角化性鳞状细

胞癌

2

例，低分化癌

3

例，鳞癌

1

例；年龄在

33-81

岁之间，男

68

例，女性

51

例。

HE

形态特点：紧靠

胸膜或可疑侵犯或不明确，部分贴壁性生长。

2

标本处理

肿块取材后均以

10%

中性福尔马林液固定，常

规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，

55~58

℃低度蜡浸蜡，

58~62

℃高度蜡包埋，切片

2

张，厚度

3μm

，

65

℃烤

片

10min

，分别进行

HE

染色、弹性纤维染色。

3

染色试剂

弹性纤维维多利亚蓝染色法染液试剂组成：

elastin

染液（维多利亚蓝、间苯二酚），

0.5%

高锰

中国组织化学与细胞化学杂志

172

第

29

卷

酸钾溶液，

2%

草酸，

VG

染液（酸性品红、苦味

酸）。所有染色试剂均购于珠海贝索（

BASO

）生物

技术有限公司。

4

染色方法

切片脱蜡至水；

0.5%

高锰酸钾水溶液氧化

5min

；水洗；

2%

草酸溶液漂白

1~2min

，至标本无

色为止；细水冲洗

3~5min

；入

95%

乙醇稍洗；入

elastin

染液

(

维多利亚蓝

)

中浸染（室温）

8~24h

；

95%

酒精分化或

1%

盐酸酒精分化，快速脱洗多余

的染液；细水冲洗

3~5min

；再入

VG

染液

1min

（滴

染），结束后倾去染液，直接入

95%

乙醇迅速分化

数秒；无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

5

结果判读

所有

HE

切片和弹性纤维染色切片均由经验丰

富的病理医师依据国际肺癌研究协会

(international

associationforthestudyoflungcancer

，

IASLC)

制定

的第八版肺癌

TNM

分期标准进行分期，将脏层胸膜

受侵（

visceralpleurainvasion,VPI

）分为

PL0

（肿瘤

位于胸膜下肺实质内或侵犯胸膜弹性层下的胸膜连

接组织）、

PL1

（肿瘤侵犯超过脏层胸膜弹性层）和

PL2

（肿瘤侵及脏层胸膜表面）[1]

，观察肿瘤旁胸膜

弹性纤维是否完整，及受肿瘤侵犯程度。

结果

维多利亚蓝染色法染色显示，弹性纤维呈不同

程度蓝黑色，细丝样波浪状断续曲折；胶原纤维呈

红色，背景肌纤维及红细胞呈黄色（图

1

）。

HE

染

色显示，弹性纤维均呈不同程度的红色（图

2

）。

图

1

肺癌组织

EVG

弹力纤维染色。

A

，右下肺叶浸润性腺癌，癌组织紧靠肺胸膜；

B

，左肺下叶胸膜见癌侵犯；比例尺，

100μm.

Fig.1EVGelasticfibersstainingoflungcancertissues.A,invasiveadenocarcinomaofrightlowerlobeoflung,thecancertissueisclotothepleura;

B,cancerinvasionwaseninpleuraoflowerlobeofleftlung;scalebar,100μm

图

2

肺癌组织

HE

染色。

A

，右下肺叶浸润性腺癌（

50%

为贴壁型），肿瘤直径

1.4cm

；

B

，左肺下叶浸润性腺癌（

35%

为贴壁型），癌组

织紧靠胸膜，是否侵犯胸膜难以判断；比例尺，

100μm

Fig.2HEstainingoflungcancertissues.A,invasiveadenocarcinomaofrightlowerlobeoflung(50%ofthemwasadherenttype),withthe1.4cm

diameterofthetumor;B,invasiveadenocarcinomaoflowerlobeofleftlung(35%ofthemwasadherenttype),cancertissueclotothepleura,invasion

ofthepleuraishardtodetermine;scalebar,100μm

周建云等.弹性纤维染色在评估肺癌胸膜侵犯中的应用价值

第

2

期

173

讨论

弹性纤维新鲜时呈黄色，较细，交织成网。它

富有弹性，容易拉长，外力除去后又恢复原状。它

广泛分布于全身的各个部位，尤以循环系统，呼吸

系统和皮肤系统为多。在肺组织中，弹性纤维参与

气血屏障的形成，

HE

染色后细胞核为蓝色，其它成

分均染成深浅不同程度的红色，难以分辨弹性纤维

与胶原纤维。通过弹性纤维染色，能将弹性纤维分

布情况表达出来；在肺癌不同病理亚型的诊断中，

HE

染色对于肿瘤是否浸润周围组织及浸润深度的

判断并不十分准确，而弹性纤维染色能够很好的显

示肿瘤周边的弹性纤维组织，可作为

HE

染色的补

充为肿瘤浸润深度提供诊断方法［

2

］。

多因素分析显示脏层胸膜受侵（

P1/P2

）是独立

的预后因素［

2

］，对指导病人后期治疗起着重要作

用，因此，染色结果对病理诊断有着深远的影响，必

须选择染色敏感性高、效果好且表达清晰的方法。

常用的弹性纤维染色法有

Gomori

醛品红法、间苯二

酚碱性品红法、地衣红法、维多利亚蓝法、铁碘苏

木素法等。本室使用维多利亚蓝染色法，该方法能

很好的显示出组织中蓝黑色的弹性纤维成分，且操

作简单易行。其原理可能是弹性纤维中某些部分与

elastin

染液中间苯二酚的酚基形成氢键而使弹性纤

维被染成蓝黑色。组织经甲醛固定后，都形成了醛

键，可能影响组织跟染液发色基团的更好结合。为了

使弹性纤维组织能更有效的显示出来，利用某些试

剂进行氧化，如高锰酸钾溶液把这些醛键打开，然

后再对切片进行漂白，使切片不含有其它的杂质，

着色纯正。该方法通过高锰酸钾和

2%

草酸对组织氧

化漂白后再进行染色，将细小的弹性纤维完全暴露

出来，呈现出蓝黑色，与

VG

染液复染后的红色对

比，衬托出因肿瘤生长挤压弹性纤维或断裂或缺失

或失去原有的形态，根据这些变化情况可加以诊断

及鉴别诊断。在染色过程中应注意维多利亚蓝染液

分化度，维多利亚蓝液不易过染，可以染

18~24

h，

elastin

染液染色后直接用乙醇分色，而不用水洗，以

免难分化，浸洗后显微镜下观察分色程度，分色不

够可再用乙醇分色。针对

elastin

染液易挥发，且染

色时间长，将瓶口加盖用密封胶带封住，浸染；

VG

染液染色后不可水洗，否则会淡染或洗脱，苦味酸

的黄色易被

95%

乙醇洗脱，经乙醇时动作要迅速。

弹性纤维染色虽能很好地显示弹性纤维形态、

完整度，但也存在分辨不出肿瘤侵袭程度的情况。

为方便诊断，有研究者对弹性纤维染色方法进行改

进，在

EVG

染色基础上加上

HE

染色，其优点可以

显示组织基本结构及肿瘤细胞的位置，定位定性更

准确，更能显示肿瘤细胞与血管和浆膜的关系，比

传统的

ECG

染色定位更准确；利用特殊染色与免疫

组化染色进行双染，镜下观察肿瘤细胞呈现褐色，

弹性纤维呈现蓝色，两者对比鲜明，更直观的将肿

瘤细胞与周围胸膜关系分辨出来，显示单个或多个

表1HE与EVG染色结果比较

Tab.1ComparisonofdyeingresultsbetweenHEandEVG

HE

染色

EVG

染色

HE/EVG

侵犯例数

侵犯胸膜

6686/6

未明确是否侵犯

48

0

48/28

可疑侵犯

505/5

未侵犯胸膜

033

紧靠胸膜

601760/29

合计

119118119/68

119

例肺癌中，通过弹性纤维染色明确肿瘤侵

犯胸膜

68

例，

33

例未侵犯脏层胸膜，

17

例紧靠胸

膜，

1

例因胸膜不明显，未能判断；而

HE

染色明确

6

例侵犯脏层胸膜，可疑侵犯

5

例或不明确

48

例，

紧靠胸膜

60

例，但是否有侵犯胸膜不明确。经过弹

性纤维染色后可疑

5

例均存在胸膜侵犯，不明确

48

例中有

28

例胸膜侵犯，紧靠胸膜

60

例中判断出

29

例不同程度的胸膜侵犯

(

表

1

），表明弹性纤维染色

清晰识别肿瘤周围胸膜弹性纤维的分布情况，更明

确判断肺癌侵犯胸膜程度。

中国组织化学与细胞化学杂志

174

第

29

卷

肿瘤细胞突破弹性纤维层，阳性率更加提高。

弹性纤维染色在肺癌胸膜侵犯诊断中的意义：

弹性纤维层是脏层胸膜的重要解剖标志，弹性纤维

主要由弹力蛋白和微原纤维组成，分布在肺泡间隔、

皮下及大血管壁，形成人肺泡结构主要的骨架，在

维持肺内支气管及肺泡的结构和功能中发挥重要作

用［

3

］。早在

1988

年肿瘤是否突破脏层胸膜弹性纤维

层就被作为肿瘤是否侵犯胸膜的依据，目前病理诊

断也以肿瘤是否突破脏层胸膜弹性纤维层作为肺癌

胸膜侵犯的评判标准［

4

］，侵犯脏层胸膜（

VPI

）可

能影响非小细胞肺癌（

NSCLC

）的生存，脏层胸膜

受侵犯是肺癌术后最重要的不良预后因素之一

[5]

，

赵兰香

[6]

等分析了

EFs

染色与

HE

染色在胸膜侵犯

中的诊断情况，发现使用

HE

染色

200

例标本中有

28

例标本无法明确是否侵犯胸膜，通过

EFs

染色则

更加直观，能明确判定肿瘤细胞是否侵及胸膜层，

最终得出可靠结论。徐薪等认为，通过弹性纤维染

色可以对细支气管肺泡癌进行分型，将其分为非浸

润型及浸润型

[7]

。王玉蓉等关于弹性纤维在肺腺癌

间质中的增生程度与其预后的相关性研究，分析弹

性纤维在肺腺癌组织中分布量的多少，探讨其与肺

腺癌患者临床特征及预后的关系，发现弹力纤维

III

级的生存率显著高于

I

级、

II

级，提示在肺腺癌组织

中弹力纤维明显增生的患者预后较好

[8]

，表明纤维

组织增生是机体的一种保护反应，可以做为综合判

断患者预后的指标之一［

9

］。

参考文献

[1]

王鑫，支修益

.

国际肺癌研究协会（

IASLC

）第八版肺

癌

TNM

分期解读

.

中华胸部外科电子杂志，

2016

，

3

（

2

）：

71-73.

[2]

雷光，曾亮，陈雪，等．弹性纤维染色在恶性肿瘤中的

研究进展

.

临床与实验病理学杂志，

2016

，

32

（

9

）：

1037-1040

．

[3]

谢惠康，查俊彦，赵力澜，等．弹性纤维在腺泡型及乳

头型为主腺癌中的表达及其与患者预后的相关性．中

华病理学杂志，2016，45（6）：375-380．

[4]TravisWD,BrambillaE,Rami-PortaR

，

al

pleuralinvasion:pathologiccriteriaanduofelasticstains:

proposalforthe7theditionoftheTNMclassificationfor

cicOncol,2008,3(12):1384-1390

．

[5]IchinoY

，

YanoT

，

AsohH

，

sticfactors

obtainedbyapathologicexaminationincompletelyrected

ysisineachpathologic

cCardiovascSurg,1995,110:601-605.

[6]

赵兰香，余科科，邵普晨等．弹性纤维染色在评估肺癌

胸膜侵犯中的意义．临床与实验病理学杂志，

2014,30

（

1

）：

22

．

[7]

罗海军，朱德茂

.

弹性纤维染色在肿瘤胸膜侵犯中的诊

断作用

.

中国现代医药杂志，

2015

，

17

（

9

）：

76-77.

[8]

王玉蓉，孟刚

.

弹力纤维在肺腺癌组织中的分布量与患

者临床特征和预后的关系

.

安徽医学，

2018

，

39

（

8

）：

934-935.

[9]RasmusnBB

，

PedernBV

，

ThorpeSM

，

etal

．

Elastosis

inrelationtoprognosisinprimarybreastcarcinoma

．

Cancer

Res,1985,45(3):1428-1430

．