Ⅱ基本概念和理论
一、基本概念和术语
1.色谱图和峰参数
⊕色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-
时间曲线,又称色谱流出曲线(elutionprofile).
⊕基线(baline)--流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出
一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
⊕噪音(noi)――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、
检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
⊕漂移(drift)基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温
度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也
会产生漂移。
⊕色谱峰(peak)--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出
曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线(高斯Gauss曲
线)。不对称色谱峰有两种:前延峰(leadingpeak)和脱尾峰(tailing
peak)。
⊕拖尾因子(tailingfactor,T)T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称
为对称因子(symmetryfactor)或不对称因子(asymmetryfactor)《中国药
典》规定T应为0.95~1.05。T<0.95为前延峰,T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
⊕峰高(Peakheight,h)――峰的最高点至峰底的距离。
⊕标准偏差(standarddeviation,σ)--正态分布曲线x=±1时(拐
点)的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。
⊕峰宽(peakwidth,W)--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点
间的距离。W=4σ。
⊕半峰宽(peakwidthathalf-height,Wh/2)--峰高一半处的峰宽。Wh/2
=2.355σ。
⊕峰面积(peakarea,A)――峰与峰底所包围的面积。
A=2.507σh=1.064W
h/2
h
2.定性参数(保留值)
⊕死时间(deadtime,t0)--不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)
通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
⊕死体积(deadvolume,V0)――由进样器进样口到检测器流动池未被固
定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗
粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只
有Vm参与色谱平衡过程,其他3部粉只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这3部
分体积应尽量减小。V0=F×t0(F为流速)
⊕保留时间(retentiontime,tR)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓
度极大值的时间。
⊕保留体积(retentionvolume,VR)--从进样开始到某个组分在柱后出现
浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR=F*tR.
⊕调整保留时间(adjustedretentiontime,tR’)--扣除死时间后的保留
时间。也称折合保留时间(reducedretentiontime)。在实验条件(温度、
固定相等)一定时,tR’只决定于组分的性质,因此,tR’(或tR)可用于定性。
TR’=tR-t0
⊕调整保留体积(adjustedretentionvolume,VR’)--扣除死体积后的保
留体积。VR’=VR-V0或VR’=F*tR’
3.柱效参数
⊕理论塔板数(theoreticalplatenumber,N)用于定量表示色谱柱的分
离效率(简称柱效)。
N=(tR/σ)2=16(tR/W)2=5.54(tR/W1/2)2
⊕理论塔板高度(theorticalplateheight,H)每单位柱长的方差。实际
应用时往往用柱长L和理论塔板数计算:H=L/N
4.相平衡参数
⊕容量因子(capacityfactor,K)--化合物在两相间达到平衡时,在固定
相与流动相中的量之比。
K=(tR-t0)/t0=tR’/t0(或溶质在固定相中的量/溶质在流动相中的量),因
此,容量因子也称质量分配系数。
⊕选择性因子(lectivityfactor,α)--相邻两组份的分配系数或容量
因子之比。
α=k2/k1(设k2>k1),α又称为相对保留时间(《美国药典》)。要使
两组分得到分离,必须使α≠1。α与化合物在固定相和流动相中的分配性质、
柱温有关,与柱尺寸、流速、填充情况无关。
5.分离参数
⊕分离度(resolution,R)--相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比
值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。
R=(tR2-tR1)/[(W1+W2)/2]。,
当W1=W2,R=1时,称为4σ分离,两峰基本分离,裸露锋面积为95.4%,
内测峰基重叠约2%。
当R=1.5时,称为6σ分离,裸露锋面积为99.7%。R≥1.5称为完全分
离。《中国药典》规定R应大于1.5。
⊕基本分离方程――分离度与三个色谱基本参数有如下关系:
R=1/4(а-1)×N0.5×[k’/(1+k’)]
其中N称为柱效项,α为柱选择项,k’为柱容量项。柱效项与色谱过程动力
学特性有关,后两项与色谱过程热力学因素有关。
本文发布于:2022-12-29 02:14:26,感谢您对本站的认可!
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