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1例罕见型HbBart's胎儿水肿综合征胎儿家系分析

陈唯;陈洁;廖群英

【期刊名称】《《检验医学与临床》》

【年(卷),期】2019(016)019

【总页数】4页(P2753-2755,2760)

【关键词】泰国型缺失α-地中海贫血;罕见型;HbBart's胎儿水肿综合征;家系分

析

【作者】陈唯;陈洁;廖群英

【作者单位】广西壮族自治区梧州市妇幼保健院遗传实验室广西梧州543002

【正文语种】中文

【中图分类】R556.5

α-地中海贫血主要由位于16号染色体16p13.3位点的珠蛋白基因缺失、点突变，

引起相应珠蛋白链的合成受到抑制或功能丧失所致。α-珠蛋白基因突变大多数为

大片段缺失引起，同时包含少量的点突变[1-2]。广西壮族自治区是地中海贫血高

发区，地中海贫血也是该地区最常见和危害最大的遗传病之一。常规α-地中海贫

血基因检测只包括常见的3种基因型缺失(--SEA/、-α3.7/、-α4.2/)和3种点突变

(αQSα/、αCSα/、αWSα/)，不包括泰国型缺失(--THAI/)检测，该型地中海贫血

容易被漏检和误诊。因此，在进行地中海贫血基因检测时，一定要结合地中海贫

血表型的筛查，密切注意受检者的地中海贫血筛查表型结果与基因型是否相符，在

二者检测结果不相符时，应考虑是否存在罕见型地中海贫血，尤其是来自有生育胎

儿水肿综合征或血红蛋白(Hb)H病胎儿史家庭的受检者。本研究对近期进行产前

诊断羊水标本地中海贫血基因检测时发现的1例东南亚型缺失合并泰国型缺失(--

SEA/--THAI)双重杂合突变的HbBart′s胎儿水肿综合征胎儿进行家系分析，现报

道如下。

1资料与方法

1.1一般资料先证者,孕23周胎儿,其父母均为梧州市藤县人。先证者父母于2012

年在某县医院进行婚前检查，血细胞检查均显示为小细胞低色素性贫血，Hb分析

显示血红蛋白A2(HbA2)正常和偏低。母亲地中海贫血基因检测未见异常；父亲检

出东南亚缺失型α-地中海贫血杂合突变。临床医生怀疑胎儿母亲为缺铁性贫血患

者，补铁后未见平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)等指标

升高，该女性于2014年曾产下健康一子，此次怀孕为第二次怀孕，在孕23周进

行B超检查时发现胎儿心胸比值增大、胎盘增厚等症状，遂转诊来本院接受进一

步医学检查。医生建议采用羊水穿刺进行产前诊断分析，并对胎儿父母及其兄长进

行地中海贫血筛查及基因检测家系分析。

1.2仪器与试剂α-缺失型地中海贫血基因检测试剂盒为深圳益生堂生物企业有限

公司产品。微量样品基因组DNA提取试剂盒为北京天根有限公司产品。β-地中海

贫血及α-非缺失型地中海贫血基因检测试剂盒为亚能生物技术(深圳)有限公司产

品。PCR扩增使用Hema9600PCR扩增仪，凝胶成像使用黑马GSG-2000凝胶

成像系统，分子杂交使用精宏恒温水浴摇床。SysmexXN-1000全自动血液分析

仪为日本Sysmex公司产品，Bio-RadVARIANTTMⅡHb分析系统为美国Bio-

Rad公司产品，Lab-Aid核酸提取仪为厦门致善生物科技股份有限公司产品。

1.3方法

1.3.1血细胞检查采用SysmexXN-1000全自动血液分析仪进行血常规检测，

MCV<82fL、MCH<27pg作为地中海贫血初筛标准。

1.3.2Hb组分分析采用Bio-RadVARIANTTMⅡHb分析系统进行Hb组分分析，

HbA2>3.5%或(和)血红蛋白F(HbF)>2.6%作为β-地中海贫血筛查标准。

1.3.3地中海贫血基因检测(1)外周血DNA提取，采用Lab-Aid核酸提取仪进行

外周血DNA的提取。(2)羊水DNA提取，羊水穿刺取两份羊水标本，1份羊水标

本用于细胞培养,培养7d后用其细胞做平行管基因分析，两次结果一致方能发出

报告。另1份羊水标本以4000r/min离心10min，去上清液保留沉淀物(羊水

细胞)转移至1.5mL离心管中，采用微量样品基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

提取DNA，离心管中加入细胞裂解液及蛋白酶K消化，转移裂解液至吸附柱，洗

脱DNA。(3)DNA扩增：采用Gap-PCR法检测α-缺失型地中海贫血--SEA/、--

THAI/、-α3.7/、-α4.2/4种缺失型。α-缺失型扩增程序为96℃，5min；98℃，

45s，65℃，90s，72℃，3min,10个循环；98℃，30s，65℃，45s，

72℃，3min,25个循环；72℃，10min。采用PCR-反向点杂交法检测CD41-

42、IVS-Ⅱ-654、-28、CD71-72、CD17、βE、CD43、-29、CD31、-32、

IVS-Ⅰ-Ⅰ、CD27/28、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS-Ⅰ-517种β-地中海贫

血位点突变和αQSα、αCSα、αWSα3种α-非缺失型地中海贫血突变。β-地中海

贫血及α-非缺失型地中海贫血点突变扩增程序为50℃，15min，95℃,10min；

94℃，60s，55℃，30s，72℃，30s,35个循环；72℃，5min。(4)电泳与

杂交：α-缺失型地中海贫血检测取2μL扩增产物，用1.0%琼脂糖凝胶(内加核酸

染料)在5v/cm电压下电泳60min，在黑马凝胶成像系统上观察结果。β-地中海

贫血及α-非缺失型地中海贫血点突变检测，使用恒温水浴摇床于42℃杂交1.5～

4.0h。洗膜，显色后观察结果。

1.4统计学处理采用Excel2007软件、AutoCAD绘图工具分别进行数据、图像处

理。

2结果

2.1表型结果夫妻双方的血液学结果均为小细胞低色素贫血。Hb分析结果正常或

偏低。见表1。

表1HbBart′s胎儿水肿综合征家系成员表型和基因型资料成员诊断年龄或胎龄

Hb(g/L)MCV(fL)MCH(pg)HbA2(%)HbF(%)α-地中海贫血基因型β-地中海贫血

基因型母亲α0携带者31岁10272.124.82.41.1--THAI/ααβN/βN父亲α0携带

者32岁13565.822.32.50.9--SEA/ααβN/βN兄长健康4岁

12383.927.52.62.0αα/ααβN/βN先证者HbBart′s水肿胎儿孕23周-------

SEA/--THAIβN/βN

注：-为无数据

2.2基因分析先证者α-地中海贫血基因检测出--SEA/--THAI双重杂合突变,β-地

中海贫血基因17种位点突变检测未见异常。先证者母亲α-地中海贫血基因检测

出--THAI/αα杂合突变,β-地中海贫血基因17种位点突变检测未见异常。先证者

父亲α-地中海贫血基因检测出--SEA/αα杂合突变,β-地中海贫血基因17种位点

突变检测未见异常。先证者兄长α-地中海贫血基因检测未见异常，β-地中海贫血

基因17种位点突变检测未见异常。见表1及图1、2。

注：1为母亲(--THAI/αα)；2为父亲(--SEA/αα)；3为兄长(αα/αα)；4为先证者

(--SEA/--THAI)；N为正常对照(αα/αα)；P为阳性对照(--SEA/αα)；B为空白对

照(无扩增条带)；M为DNA相对分子质量标准

图1家系α-缺失型地中海贫血电泳图

注：Ⅰ代1为母亲(--THAI/αα)；Ⅰ代2为父亲(--SEA/αα)；Ⅱ代1为兄长

(αα/αα)；Ⅱ代2为先证者(--SEA/--THAI)

图2HbBart′s胎儿水肿综合征胎儿家系谱

3讨论

泰国缺失型α-地中海贫血属于罕见型缺失型地中海贫血，为α-珠蛋白基因簇大片

段缺失，且断裂点及缺失区域明确，缺失范围为chr16:199800-233300,包括ζ、

α1、α2基因在内的33501个碱基[3]。采用Gap-PCR分析技术可以检测东南亚

型缺失(--SEA/)、泰国型缺失(--THAI/)、右侧缺失(-α3.7/)、左侧缺失(-α4.2/)4

种α-地中海贫血基因缺失型[4-5]。根据检测的4种缺失型地中海贫血基因的缺失

范围及断裂点设计4对引物，分别扩增出0.9kb(泰国型缺失)，1.2kb(东南亚型

缺失)、1.4kb(左侧缺失)、2.0kb(右侧缺失)大小的扩增片段，同时在4种缺失片

段的共同缺失区域设计一对α2基因正常内对照引物，扩增片段大小为1.7kb，用

以区分突变纯合子，在未发生缺失突变时可作为内对照，判断扩增是否成功。由5

对引物组成多重Gap-PCR检测体系，可根据特异性扩增片段的大小及组合结果检

测各种不同的基因型。从本案例表型可以看出，先证者母亲MCV、MCH和

HbA2均偏低，呈现明显的小细胞低色素贫血。经常规地中海贫血基因检测，3种

缺失型和3种非缺失型α-地中海贫血，以及17种位点突变β-地中海贫血基因未

见异常，应进行补铁观察分析是否是缺铁性贫血或者考虑为罕见型α-地中海贫血。

采用其他方法进一步确定该胎儿是否存在罕见缺失突变(例如采用MLPA、Gap-

PCR、基因测序等技术做进一步检测，必要时还应进行家系分析以确认是否为新的

突变)。先证者23周胎龄时B超检查显示全身水肿，心胸比值增大、胎盘增厚。

进行羊水穿刺做地中海贫血基因检测分析，检出--SEA/--THAI双重杂合突变，综

合确认为HbBart′s胎儿水肿综合征。先证者母亲为泰国缺失型(--THAI/αα)α-地

中海贫血，先证者父亲为东南亚缺失型(--SEA/αα)α-地中海贫血，胎儿出生有25%

的概率为重型地中海贫血患儿。如果不结合患者的血液学表型和超声检查，并同时

进行胎儿基因检测，就不能及时发现胎儿为东南亚型缺失合并泰国型缺失(--SEA/-

-THAI)双重杂合突变的HbBart′s胎儿水肿综合征，则极易发生漏诊。地中海贫

血遍布全球，在我国南方地区发病率较高，主要分布在广东、广西、海南等地。

α-地中海贫血和β-地中海贫血在广西壮族自治区人群中携带率分别高达17.55%

和6.43%[6]。在我国南方地区，泰国型缺失(--THAI/)地中海贫血发病率仅次于常

见的3种缺失型地中海贫血[7]。泰国型缺失(--THAI/)地中海贫血合并其他α-地中

海贫血，在临床上可以形成中间型(HbH病)和重型α地中海贫血。泰国型缺失α-

地中海贫血基因的缺失范围包括α珠蛋白基因簇中的多个基因，其缺失片段较东

南亚型更大，包括ζ基因，因此，可能导致胎儿水肿出现得更早[8-10]。泰国缺失

型α-地中海贫血家系的产前诊断应结合夫妇双方血液学特征、不良生育史、常见

地中海贫血基因检测结果及超声检查结果来进行家系调查以明确病因，尤其在南方

地中海贫血高发区，临床医生与实验室检测人员应加强沟通，根据地中海贫血筛查

者的血液学表型，选择全面、准确、可靠的诊断方法，优化地中海贫血基因检测诊

断流程，加强对罕见型泰国型缺失α-地中海贫血的检测，建立规范的产前诊断操

作程序，预防重型地中海贫血患儿出生。泰国型缺失α-地中海贫血的准确检测对

于遗传咨询和产前基因诊断具有重要的临床意义，通过对这个家系的分析，丰富了

缺失型α-地中海贫血的资料。

参考文献

【相关文献】

[1]徐韫健，廖颖茵，高俊．广东地区地中海贫血筛检者的基因检测和类型分析[J]．实用医学杂志，

2019，48(2)：285-289．

[2]华亮，李婉玲，蔡燕娜．广州地区疑诊地中海贫血患儿α-地中海贫血基因突变型研究[J]．中国

小儿血液与肿瘤杂志，2010，15(5)：212-214．

[3]PANGESONT,SANGUANSERMSRIP,SANGUANSERMSRIT,ationoftissue-

specificDNAmethylationalterationswithα-ThalasmiaSoutheastAsian

Deletion[J].GenetEpigen,2017,9:1-7.

[4]邓涛，谢明水，刘方方，等．血常规检测在珠蛋白生成障碍性贫血和缺铁性贫血患者中的临床

价值[J].中国实验诊断学，2018，22(4)：665-666．

[5]肖奇志，周玉球，张永良，等．单管多重PCR结合RDB技术在α-珠蛋白生成障碍性贫血产前

诊断中的应用[J]．国际检验医学杂志，2012，33(3)：271-273．

[6]徐湘民，张新华，陈荔丽，等．地中海贫血预防控制操作指南[M]．北京：人民军医出版社，

2011：60．

[7]杨宇航．基于高通量测序技术的贵州省地中海贫血分子流行病学特征分析[D]．遵义：遵义医学

院，2018．

[8]WANGY,LIUC,ZHANGL,etal．Identificationofanovel44.6-kbdeletioncausingα0-

thalasmiainsouthernChina[J]．IntJLabHematol,2017,39(4):e94-e97.

[9]黄海龙，林娜，徐两蒲，等．产前诊断泰国缺失型α-地中海贫血引起的胎儿巴氏水肿[J]．中华

妇产科杂志，2010，45(7)：532-533．

[10]YANGY,ntoffetalhydropsassociatedwiththeα-thalasmia——

(THAI)deletion[J].Hemoglobin,2014,38(6):431-434.