anthrax

254

十三、炭疽防治技术规范

炭疽（Anthrax）是由炭疽芽胞杆菌引起的一种人畜共患传染病。

世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其

列为二类动物疫病。

为预防和控制炭疽，依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它

相关法律法规，制定本规范。

1适用范围

本规范规定了炭疽的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施和控

制标准。

本规范适用于中华人民共和国境内一切从事动物饲养、经营及其

产品的生产、经营的单位和个人，以及从事动物防疫活动的单位和个

人。

2诊断

依据本病流行病学调查、临床症状，结合实验室诊断结果做出综

合判定。

2.1流行特点

本病为人畜共患传染病，各种家畜、野生动物及人对本病都有不

同程度的易感性。草食动物最易感，其次是杂食动物，再次是肉食动

255

物，家禽一般不感染。人也易感。

患病动物和因炭疽而死亡的动物尸体以及污染的土壤、草地、水、

饲料都是本病的主要传染源，炭疽芽胞对环境具有很强的抵抗力，其

污染的土壤、水源及场地可形成持久的疫源地。本病主要经消化道、

呼吸道和皮肤感染。

本病呈地方性流行。有一定的季节性，多发生在吸血昆虫多、雨

水多、洪水泛滥的季节。

2.2临床症状

2.2.1本规范规定本病的潜伏期为20天。

2.2.2典型症状

本病主要呈急性经过，多以突然死亡、天然孔出血、尸僵不全为

特征。

牛：体温升高常达41℃以上，可视黏膜呈暗紫色，心动过速、

呼吸困难。呈慢性经过的病牛，在颈、胸前、肩胛、腹下或外阴部常

见水肿；皮肤病灶温度增高，坚硬，有压痛，也可发生坏死，有时形

成溃疡；颈部水肿常与咽炎和喉头水肿相伴发生，致使呼吸困难加重。

急性病例一般经24～36小时后死亡，亚急性病例一般经2～5天后

死亡。

马：体温升高，腹下、乳房、肩及咽喉部常见水肿。舌炭疽多见

256

呼吸困难、发绀；肠炭疽腹痛明显。急性病例一般经24～36小时后

死亡，有炭疽痈时，病程可达3～8天。

羊：多表现为最急性（猝死）病症，摇摆、磨牙、抽搐，挣扎、

突然倒毙，有的可见从天然孔流出带气泡的黑红色血液。病程稍长者

也只持续数小时后死亡。

猪：多为局限性变化，呈慢性经过，临床症状不明显，常在宰后

见病变。

犬和其它肉食动物临床症状不明显。

2.3病理变化

死亡患病动物可视黏膜发绀、出血。血液呈暗紫红色，凝固不良，

粘稠似煤焦油状。皮下、肌间、咽喉等部位有浆液性渗出及出血。淋

巴结肿大、充血，切面潮红。脾脏高度肿胀，达正常数倍，脾髓呈黑

紫色。

严禁在非生物安全条件下进行疑似患病动物、患病动物的尸体剖

检。

2.4实验室诊断

实验室病原学诊断必须在相应级别的生物安全实验室进行。

2.4.1病原鉴定

2.4.1.1样品采集、包装与运输

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按照NY／T5612.1.2、4.1、5.1执行。

2.4.1.2病原学诊断

炭疽的病原分离及鉴定（见NY/T561）。

2.4.2血清学诊断

炭疽沉淀反应（见NY/T561）。

2.4.3分子生物学诊断

聚合酶链式反应（PCR）（见附件1）。

3疫情报告

3.1任何单位和个人发现患有本病或者疑似本病的动物，都应

立即向当地动物防疫监督机构报告。

3.2当地动物防疫监督机构接到疫情报告后，按国家动物疫情

报告管理的有关规定执行。

4疫情处理

依据本病流行病学调查、临床症状，结合实验室诊断做出的综合

判定结果可做为疫情处理依据。

4.1当地动物防疫监督机构接到疑似炭疽疫情报告后，应及时

派员到现场进行流行病学调查和临床检查，采集病料送符合规定的实

验室诊断，并立即隔离疑似患病动物及同群动物，限制移动。

对病死动物尸体，严禁进行开放式解剖检查，采样时必须按规定

258

进行，防止病原污染环境，形成永久性疫源地。

4.2确诊为炭疽后，必须按下列要求处理。

4.2.1由所在地县级以上兽医主管部门划定疫点、疫区、受威胁

区。

疫点：指患病动物所在地点。一般是指患病动物及同群动物所

在畜场（户组）或其它有关屠宰、经营单位。

疫区：指由疫点边缘外延3公里范围内的区域。在实际划分疫

区时，应考虑当地饲养环境和自然屏障（如河流、山脉等）以及气象

因素，科学确定疫区范围。

受威胁区：指疫区外延5公里范围内的区域。

4.2.2本病呈零星散发时，应对患病动物作无血扑杀处理，对同

群动物立即进行强制免疫接种，并隔离观察20天。对病死动物及排

泄物、可能被污染饲料、污水等按附件2的要求进行无害化处理；对

可能被污染的物品、交通工具、用具、动物舍进行严格彻底消毒（见

附件2）。疫区、受威胁区所有易感动物进行紧急免疫接种。对病死

动物尸体严禁进行开放式解剖检查，采样必须按规定进行，防止病原

污染环境，形成永久性疫源地。

4.2.3本病呈暴发流行时（1个县10天内发现5头以上的患

病动物），要报请同级人民政府对疫区实行封锁；人民政府在接到封

259

锁报告后，应立即发布封锁令，并对疫区实施封锁。

疫点、疫区和受威胁区采取的处理措施如下：

4.2.3.1疫点

出入口必须设立消毒设施。限制人、易感动物、车辆进出和动物

产品及可能受污染的物品运出。对疫点内动物舍、场地以及所有运载

工具、饮水用具等必须进行严格彻底地消毒。

患病动物和同群动物全部进行无血扑杀处理。其它易感动物紧急

免疫接种。

对所有病死动物、被扑杀动物，以及排泄物和可能被污染的垫料、

饲料等物品产品按附件2要求进行无害化处理。

动物尸体需要运送时，应使用防漏容器，须有明显标志，并在动

物防疫监督机构的监督下实施。

4.2.3.2疫区：交通要道建立动物防疫监督检查站，派专人监管

动物及其产品的流动，对进出人员、车辆须进行消毒。停止疫区内动

物及其产品的交易、移动。所有易感动物必须圈养，或在指定地点放

养；对动物舍、道路等可能污染的场所进行消毒。

对疫区内的所有易感动物进行紧急免疫接种。

4.2.3.3受威胁区：对受威胁区内的所有易感动物进行紧急免疫

接种。

260

4.2.3.4进行疫源分析与流行病学调查

4.2.3.5封锁令的解除

最后1头患病动物死亡或患病动物和同群动物扑杀处理后20天

内不再出现新的病例，进行终末消毒后，经动物防疫监督机构审验合

格后，由当地兽医主管部门向原发布封锁令的机关申请发布解除封锁

令。

4.2.4处理记录

对处理疫情的全过程必须做好完整的详细记录，建立档案。

5预防与控制

5.1环境控制

饲养、生产、经营场所和屠宰场必须符合《动物防疫条件审核管

理办法》（农业部[2002]15号令）规定的动物防疫条件，建立严格的

卫生（消毒）管理制度。

5.2免疫接种

5.2.1各省根据当地疫情流行情况，按农业部制定的免疫方案，

确定免疫接种对象、范围。

5.2.2使用国家批准的炭疽疫苗，并按免疫程序进行适时免疫

接种，建立免疫档案。

5.3检疫

261

5.3.1产地检疫

按GB16549和《动物检疫管理办法》实施检疫。检出炭疽阳性

动物时，按本规范4.2.2规定处理。

5.3.2屠宰检疫

按NY467和《动物检疫管理办法》对屠宰的动物实施检疫。

5.4消毒

对新老疫区进行经常性消毒，雨季要重点消毒。皮张、毛等按照

附件2实施消毒。

5.5人员防护

动物防疫检疫、实验室诊断及饲养场、畜产品及皮张加工企业工

作人员要注意个人防护，参与疫情处理的有关人员，应穿防护服、戴

口罩和手套，做好自身防护。

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附件1

聚合酶链式反应（PCR）技术

1试剂

1.1消化液

1.1.11M三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH8.0)

三羟甲基氨基甲烷12.11g

灭菌双蒸水80mL

浓盐酸调pH至8.0

灭菌双蒸水加至100mL

1.1.20.5M乙二铵四乙酸二钠(EDTA)溶液(pH8.0)

二水乙二铵四乙酸二钠18.61g

灭菌双蒸水80mL

氢氧化钠调pH至8.0

灭菌双蒸水加至100mL

1.1.320%十二烷基磺酸钠(SDS)溶液(pH7.2)

十二烷基磺酸钠20g

灭菌双蒸水80mL

浓盐酸调pH至7.2

263

灭菌双蒸水加至100mL

1.1.4消化液配制

1M三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH8.0)2mL

0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0)0.4mL

20%十二烷基磺酸钠溶液(pH7.2)5mL

5M氯化钠4mL

灭菌双蒸水加至200mL

1.2蛋白酶K溶液

蛋白酶K5g

灭菌双蒸水加至250mL

1.3酚/氯仿/异戊醇混合液

碱性酚25mL

氯仿24mL

异戊醇1mL

1.42.5mmol/LdNTP

dATP(100mmol/L)20µL

dTTP(100mmol/L)20µL

dGTP(100mmol/L)20µL

dCTP(100mmol/L)20µL

264

灭菌双蒸水加至800µL

1.58pmol/µLPCR引物

上游引物ATXU（2OD）加入701µl灭菌双蒸水溶解，下游引

物ATXD（2OD）加入697µL灭菌双蒸水溶解，分别取ATXU、ATXD

溶液各300µL，混匀即为8pmol/µL扩增引物。

1.60.5单位TaqDNA聚合酶

5单位TaqDNA聚合酶1µL

灭菌双蒸水加至10µL

现用现配。

1.710×PCR缓冲液

1.7.11mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH9.0)

三羟基甲基氨基甲烷15.8g

灭菌双蒸水80mL

浓盐酸调pH至9.0

灭菌双蒸水加至100mL

1.7.210倍PCR缓冲液

1mol/L三羟基甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH9.0)1mL

氯化钾0.373g

曲拉通X-1000.1mL

265

灭菌双蒸水加至100mL

1.8溴化乙锭(EB)溶液

溴化乙锭0.2g

灭菌双蒸水加至20mL

1.9电泳缓冲液(50倍)

1.9.10.5mol/L乙二铵四乙酸二钠(EDTA)溶液(pH8.0)

二水乙二铵四乙酸二钠18.61g

灭菌双蒸水80mL

氢氧化钠调pH至8.0

灭菌双蒸水加至100mL

1.9.2TAE电泳缓冲液(50倍)

三羟基甲基氨基甲烷(Tris)242g

冰乙酸57.1mlL

0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0)100mL

灭菌双蒸水加至1000mL

用时用灭菌双蒸水稀释使用

1.101.5％琼脂糖凝胶

琼脂糖3g

TAE电泳缓冲液(50倍)4mL

266

灭菌双蒸水196mL

微波炉中完全融化，加溴化乙锭（EB）溶液20µL。

1.11上样缓冲液

溴酚蓝0.2g，加双蒸水10mL过夜溶解。50g蔗糖加入50ml水

溶解后，移入已溶解的溴酚蓝溶液中，摇匀定容至100mL。

1.12其它试剂

异丙醇(分析纯)

70%乙醇

15mmoL/L氯化镁

灭菌双蒸水

2器材

2.1仪器

分析天平、高速离心机、真空干燥器、PCR扩增仪、电泳仪、

电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、液氮或-70℃冰箱、微波

炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2µL、20µL、200µL、

1000µL）。

2.2耗材

眼科剪、眼科镊、称量纸、20mL一次性注射器、1.5mL灭菌

离心管、0.2mL薄壁PCR管、琼脂糖、500mL量筒、500mL锥形

267

瓶、吸头(10µL、200µL、1000µL)、灭菌双蒸水。

2.3引物设计

根据GenBank上已发表的炭疽杆菌POX1质粒序列，设计并合

成了以下两条引物：

ATXU：5’-AGAATGTATCACCAGAGGC-3’ATXD：

5’-GTTGTAGATTGGAGC

CGTC-3’，此对引物扩增片段为394bp。

2.4样品的采集与处理

2.4.1样品的采集

病死或扑杀的动物取肝脏或脾；待检的活动物，用注射器取血

5～10mL，2～8℃保存，送实验室检测。

2.4.2样品的处理

每份样品分别处理。

2.4.2.1组织样品处理

称取待检病料0.2g，置研磨器中剪碎并研磨，加入2mL消化液

继续研磨。取已研磨好的待检病料上清100µL加入1.5mL灭菌离心

管中，再加入500µL消化液和10µL蛋白酶K溶液，混匀后，置55℃

水浴中4～16h。

2.4.2.2待检菌的处理

268

取培养获得的菌落，重悬于生理盐水中。取其悬液100µL加入

1.5mL灭菌离心管中，再加入500µL消化液和10µL蛋白酶K溶液，

混匀后，置55℃水浴中过夜。

2.4.2.3全血样品处理

待血凝后取上清放于离心管中，4℃8000g离心5分钟，取上

清100µL，加入500µL消化液和10µL蛋白酶K溶液，混匀后，置

55℃水浴中过夜。

2.4.2.4阳性对照处理

取培养的炭疽杆菌，重悬于生理盐水中。取其悬液100µL，置

1.5mL灭菌离心管中，加入500µL消化液和10µL蛋白酶K溶液，

混匀后，置55℃水浴中过夜。

2.4.2.5阴性对照处理

取灭菌双蒸水100µL，置1.5mL灭菌离心管中，加入500µL消

化液10µl蛋白酶K溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。

2.5DNA模板的提取

2.5.1取出已处理的样品及阴、阳对照，加入600µL酚/氯仿/

异戊醇混合液，用力颠倒10次混匀，12000g离心10分钟。

2.5.2取上清置1.5mL灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混

匀，置液氮中3分钟。取出样品管，室温融化，15000rpm离心15

269

分钟。

2.5.3弃上清，沿管壁缓缓滴入1ml70%乙醇，轻轻旋转洗一

次后倒掉，将离心管倒扣于吸水纸上1分钟，真空抽干15分钟(以无

乙醇味为准)。

2.5.4取出样品管，用50µL灭菌双蒸水溶解沉淀，作为模板备

用。

2.6PCR扩增

总体积20µl，取灭菌双蒸水8µl,2.5mmol/LdNTP、8pmol/µL扩

增引物、15mmol/L氯化镁、10×PCR缓冲液、0.5单位TaqDNA聚

合酶各2µL，2µL模板DNA。混匀，作好标记，加入矿物油20µL覆

盖(有热盖的自动DNA热循环仪不用加矿物油)。扩增条件为94℃3

分钟后，94℃30s，58℃30s，72℃30s循环35次，72℃延伸5

分钟。

2.7电泳

将PCR扩增产物15µL混合3µL上样缓冲液，点样于1.5%琼脂

糖凝胶孔中，以5V/cm电压于1×TAE缓冲液中电泳，紫外凝胶成像

仪下观察结果。

2.8结果判定

在阳性对照出现394bp扩增带、阴性对照无带出现(引物带除外)

270

时，试验结果成立。被检样品出现394bp扩增带为炭疽杆菌阳性，

否则为阴性。

271

附件2

无害化处理

1炭疽动物尸体处理

应结合远离人们生活、水源等因素考虑，因地制宜，就地焚烧。

如需移动尸体，先用5％福尔马林消毒尸体表面，然后搬运，并将原

放置尸地及尸体天然孔出血及渗出物用5%福尔马林浸渍消毒数次，

在搬运过程中避免污染沿途路段。焚烧时将尸体垫起，用油或木柴焚

烧，要求燃烧彻底。无条件进行焚烧处理时，也可按规定进行深埋处

理。

2粪肥、垫料、饲料的处理

被污染的粪肥、垫料、饲料等，应混以适量干碎草，在远离建筑

物和易燃品处堆积彻底焚烧，然后取样检验，确认无害后，方可用作

肥料。

3房屋、厩舍处理

开放式房屋、厩舍可用5%福尔马林喷洒消毒三遍，每次浸渍2

小时。也可用20％漂白粉液喷雾，200mL/m2作用2小时。对砖墙、

土墙、地面污染严重处，在离开易燃品条件下，亦可先用酒精或汽油

喷灯地毯式喷烧一遍，然后再用5％福尔马林喷洒消毒三遍。

对可密闭房屋及室内橱柜、用具消毒，可用福尔马林熏蒸。在室

272

温18℃条件下，对每25～30m3空间，用10％浓甲醛液（内含37％

甲醛气体）约4000mL，用电煮锅蒸4小时。蒸前先将门窗关闭，通

风孔隙用高粘胶纸封严，工作人员戴专用防毒面具操作。密封8～12

小时后，打开门窗换气，然后使用。

熏蒸消毒效果测定，可用浸有炭疽弱毒菌芽孢的纸片，放在含组

氨酸的琼脂平皿上，待熏后取出置37℃培养24小时，如无细菌生长

即认为消毒有效。

也可选择其它消毒液进行喷洒消毒，如4％戊二醛（pH8.0～8.5）

2小时浸洗、5％甲醛（约15％福尔马林）2小时、3％H2O22小时

或过氧乙酸2小时。其中，H2O2和过氧乙酸不宜用于有血液存在的

环境消毒；过氧乙酸不宜用于金属器械消毒。

4泥浆、粪汤处理

猪、牛等动物死亡污染的泥浆、粪汤，可用20％漂白粉液1份

（处理物2份），作用2小时；或甲醛溶液50～100ml/m3比例加入，

每天搅拌1～2次，消毒4天，即可撒到野外或田里，或掩埋处理(即

作深埋处理)。

5污水处理

按水容量加入甲醛溶液，使其含甲醛液量达到5％，处理10小

时；或用3％过氧乙酸处理4小时；或用氯胺或液态氯加入污水，于

273

pH4.0时加入有效氯量为4mg/L，30分钟可杀灭芽孢，一般加氯后

作用2小时流放一次。

6土壤处理

炭疽动物倒毙处的土壤消毒，可用5％甲醛溶液500mL/m2消毒

三次，每次2小时，间隔1小时。亦可用氯胺或10％漂白粉乳剂浸

渍2小时，处理2次，间隔1小时。亦可先用酒精或柴油喷灯喷烧

污染土地表面，然后再用5％甲醛溶液或漂白粉乳剂浸渍消毒。

7衣物、工具及其它器具处理

耐高温的衣物、工具、器具等可用高压蒸汽灭菌器在121℃高压

蒸汽灭菌1小时；不耐高温的器具可用甲醛熏蒸，或用5％甲醛溶液

浸渍消毒。运输工具、家具可用10％漂白粉液或1％过氧乙酸喷雾

或擦拭，作用1～2小时。凡无使用价值的严重污染物品可用火彻底

焚毁消毒。

8皮、毛处理

皮毛、猪鬃、马尾的消毒，采用97～98％的环氧乙烷、2％的

CO2、1％的十二氟混合液体，加热后输入消毒容器内，经48小时渗

透消毒，启开容器换气，检测消毒效果。但须注意，环氧乙烷的熔点

很低（＜0℃），在空气中浓度超过3％，遇明火即易燃烧发生爆炸，

必须低温保存运输，使用时应注意安全。

骨、角、蹄在制作肥料或其它原料前，均应彻底消毒。如采用

274

121℃高压蒸汽灭菌；或5％甲醛溶液浸泡；或用火焚烧。