sterile

分类号：Ｒ９

密级：

单位代码：１０４２２

学号：２０１１２２１３９８

∥▲东’，吞

ＳＨＡＮＤｏＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文

ＴｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒ

Ｄｅｇｒｅｅ

（专业学位）

论文题目：非最终灭菌无菌原料药无菌保证

的建立与验证

ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆ

Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

Ａｓｓｕｒａｎｃｅｏｎ

Ｎｏｎ．ｔｅｒｍｉｎａｌ

ＳｔｅｒｉｌｉｚｅｄＳｔｅｒｉｌｅＡＰＩ

作者姓名

培养单位

专

业

名称

指导教师

合作导师

颜宾

药学院

制药工程

王唯红教授

２０１３年１１月２０日

原创性声明

本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独

立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不

包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研

究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明

的法律责任由本人承担。

论文作者签名：＝耋鑫麈日

关于学位论文使用授权的声明

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内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段

保存论文和汇编本学位论文。

（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名锥导师签名：叠赴日期：型

目录

摘要………………………………………………………………………………ｌ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ…………………………………………………………………………４

符号说明…………………………………………………………………………７

第一章绪论……………………………………………………………………８

１．１无菌、无菌药品的概念…………………………………………………８

１．２无菌药品生产工艺的划分………………………………………………８

１．３国内外研究现状…………………………………………………………９

１．４本论文的选题依据、特色与意义………………………………………９

第二章非最终灭菌无菌原料药生产工艺流程及工艺控制点………………１１

２．１非最终灭菌无菌原料药生产工艺流程图……………………………．．１１

２．２非最终灭菌无菌原料药生产过程控制点和控制项目………………．１４

２．３非最终灭菌无菌原料药生产特殊要求………………………………．１９

２．４本章小结………………………………………………………………．１９

第三章非最终灭菌无菌原料药生产工艺的主要风险分析及控制措施………２１

３．１产品灭菌／除菌前微生物污染水平的控制……………………………．２２

３．２灭菌／除菌工艺的可靠性………………………………………………．２７

３．３包装容器密封完整性…………………………………………………．．２８

３．４无菌原料药工艺模拟试验……………………………………………一２９

３．５无菌保证管理体系主要风险和控制措施……………………………一３０

３．６本章小结………………………………………………………………一３ｌ

第四章非最终灭菌无菌原料药无菌保证的验证………………………………３２

４．１洁净厂房与空调净化系统验证………………………………………一３２

４．２灭菌／除菌工艺的可靠性验证…………………………………………．３５

４．２．１湿热灭菌工艺的可靠性验证……………………………………．３５

４．２．２干热灭菌工艺的可靠性验证……………………………………．３９

４．２．３除菌过滤工艺验证¨８１…………………………………………一４２

４．３包装容器的密封性验证………………………………………………．．５４

４．４非最终灭菌无菌原料药的无菌工艺模拟验证………………………．５６

４．５清洁消毒与环境监控的相关验证……………………………………．６８

４．５．１过滤前料液的微生物负荷检查方法验证………………………６８

４．５．２表面的微生物负荷检查方法学验证……………………………．７ｌ

４．５．３人员出入洁净区验证……………………………………………．７４

４．５．４消毒剂消毒效果验证……………………………………………．７７

４．５．５环境菌的分离与鉴别……………………………………………．８０

４．６本章小结………………………………………………………………一８３

本课题研究的结论…………………………………………………………………８６

参考文献……………………………………………………………………………８７

致｛射………………………………………………………………………………８９

攻读硕士期间发表的文章…………………………………………………………９０

ＣｏＮＴＥＮＴＳ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ………………………………．．．…．．………．．………………………．．４

Ｓｙｍｂｏｌ

ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．’７

Ｃｈａｐｔｅｒ

ＩＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．８

Ｉ．１Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｏｆ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｎｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｄｒｕｇｓ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．８

１．２

Ｄｉｖｉｓｉｏｎ

ｏｆ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ

ｏｆｓｔｅｒｉｌｅ

ｄｒｕｇｓ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．８

１．３Ｒｅｓｅａｒｃｈｓｔａｔｕｓａｔｈｏｍｅａｎｄａｂｒｏａｄ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９

１．４

Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ．ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ

ａｎｄ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ｏｆｔｈｉｓｔｈｅｓｉｓ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９

Ｃｈａｐｔｅｒ

ＩＩＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｌｏｗａｎｄ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｃｏｎｔｒｏｌ

ｐｏｉｎｔｓ

ｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ

ｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１１

２．１Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｌｏｗｃｈａｒｔｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ………………１１

２．２

Ｉｎ—－ｐｒｏｃｅｓｓ

ｃｏｎｔｒｏｌ

ｐｏｉｎｔｓ

ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｉｔｅｍｓｉｎｎｏｎ・－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ………………………………………………………………………………１４

２．３

Ｓｐｅｃｉａｌｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ

ｉｎ

ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ

ｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ．．．１９

２．４

Ｃｈａｐｔｅｒ

ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ…………………………………………………………１９

Ｃｈａｐｔｅｒ

ＩＩＩＭａｊｏｒｒｉｓｋｓ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｍｅａｓｕｒｅｓｉｎｔｈｅ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ

ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：１１

３．１Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｂｅｆｏｒｅｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ………………２２

３．２

Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｏｆｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ…………………………………………２７

３．３

Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ

ｏｆｃｏｎｔａｉｎｅｒｃｌｏｓｕｒｅ………………………………………………２８

３．４ＰｒｏｃｅｓｓｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｔｅｓｔｆｏｒｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ………………………………………２９

３．５Ｍａｊｏｒｒｉｓｋｓａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｍｅａｓｕｒｅｓ

ｏｆ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔ

ｓｙｓｔｅｍ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．３（）

３．６

Ｃｈａｐｔｅｒ

ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ…………………………………………………………３１

Ｃｈａｐｔｅｒ

ＩＶＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｆｏｒｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ

．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：；：１

４．１Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｃｌｅａｎ

ｗｏｒｋｓｈｏｐ

ａｎｄａｉｒ

ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ……３２

４．２Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｏｆｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ……………………………３５

４．２．１Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｏｆｍｏｉｓｔｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ……………３５

４．２．２Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙｏｆ＆ｙ

ｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ………………３９

４．２．３Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ……………………………４２

４．３Ｃｏｎｔａｉｎｅｒｃｌｏｓｕｒｅ

ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ………………………………………５４

４．４

Ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ…………………………………………………………………………………５６

４．５Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｃｌｅａｎｉｎｇ．ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ

ａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ

ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ…………６８

４．５．１Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｏｆ

ｌｉｑｕｉｄ

ｂｅｆｏｒｅｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ………６８

４．５．２Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄ…………………７１

４．５．３Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｐｅｒｓｏｎｎｅｌ

ｅｎｔｅｒｉｎｇ

ｉｎａｎｄ

ｏｕｔｏｆｃｌｅａｎａｒｅａ……………７４

４．５．４Ⅷｉｄａｔｉｏｎｏｎｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ………………………７７

４．５．５

Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａ

ｉｎｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ………………８０

４．６

Ｃｈａｐｔｅｒ

ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．｛｝：；

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｔｈｉｓｔｈｅｓｉｓ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．８６

Ｂｉｂｌｉｏｇｒａｐｈｙ………………………………………………………………………８７

Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅｍｅｎｔ…………………………………………………………………８９

Ａｒｔｉｃｌｅｓ

ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅ

ｓｔｕｄｙ

ｏｆｍａｓｔｅｒ

ｄｅｇｒｅｅ……………………………９０

山东大学硕士学位论文

非最终灭菌无菌原料药无菌保证的建立与验证

研究生：颜宾

指导老师：王唯红教授

摘要

在无菌药品的生产中，防止微生物污染、内毒素污染、颗粒物污染一直是

无菌药品生产企业关注的重点。灭菌不仅要实现杀灭或除去所有微生物繁殖体

和芽孢，最大限度是提高药物的安全性和有效性，同时还要保证药物的稳定性

及临床疗效，因此选择适宜的灭菌方法对保证产品质量具有重要意义。

本人所在工作单位是以生产非最终灭菌无菌原料药为主的药品生产企

业，随着《药品生产质量管理规范》（２０１０年修订）的实施以及本企业与欧盟

ＧＭＰ和ＦＤＡｃＧＭＰ等国际高端市场认证的接轨，需要建立非最终灭菌无菌原料药

无菌保证体系并进行相应的验证

１非最终灭菌无菌原料药的工艺特点

在研究本公司生产的各个非最终灭菌无菌原料药工艺流程的基础上，归纳

出非最终灭菌无菌原料药的基本工艺流程：粗品溶解后经无菌过滤后进入结晶

罐结晶，然后进行过滤、洗涤、干燥、颗粒、包装。在无菌过滤后的各工序生

产中采用的是无菌生产工艺，对空调净化系统、灭菌和除菌系统、人员无菌操

作要求非常高。无菌产品直接进入人体血液，应在整个无菌工艺过程中控制微

生物、内毒素和微粒污染，由于无法对半成品进行灭菌处理，并且该类工艺在

生产过程中有暴露带来的污染风险，因此在该类工艺中应更关注无菌工艺的失

败带来的风险。

２非最终灭菌无菌原料药的主要风险

非最终灭菌无菌原料药无菌保证的ＪｘＬ险主要来自于产品灭菌／除菌前微生

物污染水平的控制、灭菌／除菌工艺的可靠性、包装容器的密封完整性、无菌工

艺模拟验证和无菌保证管理体系。本文基于企业的实际情况和作者的个人经验

结合ＧＭＰ实施指南，分析了影响非最终灭菌的主要风险并制定了主类风险的控

制措施。

山东大学硕士学位论文

３非最终灭菌无菌原料药无菌保证的验证

验证是ＧＭＰ的基本要求，是制药企业质量保证体系的一部分。验证能够确

保制药企业有关操作的关键要素得到有效控制，确保产品质量符合要求，从而

保护患者的生命安全。世界各国ＧＭＰ均对验证给出了明确的定义。我国ＧＭＰ（９．０１０

版）中验证的定义为：“证明任何操作规程（或方法）、生产工艺或系统能够达

到预期结果的一系列活动”。在制药行业发展历程中，验证是ＧＭＰ不断创新发展

的里程碑，是质量管理体系持续稳定运行的必要基础，是更高的质量保证方法。

验证在ＧＭＰ中所体现的价值和所发挥的作用有：符合法规要求，降低患者风险；

优化生产工艺，保证药品质量；降低质量成本，提高经济效益。

对于非最终灭菌的无菌原料药，为使生产过程符合预定的标准，保证工艺

稳定运行，所做的验证主要有洁净厂房与空调净化系统验证、灭菌设备验证、

无菌过滤系统验证、包装密封完整性、无菌工艺模拟试验、人员出入Ｂ级洁净

区验证、消毒剂消毒效果验证、为支持验证所做的生物指示剂含菌量复核，查

出检的菌落纯化、分离和鉴定；为进行环境监控做了表面微生物擦拭法验证等。

尤其对除菌过滤工艺验证和无菌工艺模拟试验进行了探索，对无菌过滤器的细

菌挑战、化学兼容性试验、溶出物验证在工业化生产中如何具体实施验证进行

了研究，对非最终灭菌无菌原料药的无菌工艺模拟试验具体如何实施进行了研

究，同时对环境监测中发现的的菌落进行了分离并委托山东省药品检验所进行

了鉴别。

本课题研究的意义和结论

ｌ非最终灭菌产品的无菌保证是基于风险分析和系统的理念，在各系统均

处于有保证的前提下，无菌才能够有保证。

２基于《药品生产质量管理规范》（２０１０年修订）（简称：ＧＭＰ）的基本原

则，参考国际通行的技术指导原则，将非最终灭菌无菌原料药的无菌保证体系

建立的方法及验证方法作为ＧＭＰ的附录，有利于我国制药企业更好地建立无菌

保证体系和验证手段。

２对非最终灭菌无菌原料药影响无菌保证的关键因素进行重点分析和验

证：（１）产品灭菌前微生物污染水平的控制；（２）灭菌／除菌工艺的可靠性；（３）

包装容的密封性：（４）无菌工艺模拟验证（５）良好的生产质量管理等。

４随着我国制药企业对非最终灭菌无菌保证的认识不断提高，通过系统的

，

山东人学硕士学位论文

验证和良好的生产质量管理，我国非最终灭菌无菌药品的无菌保证水平会不断

的提高并与国际制药水平接轨，非最终灭菌的无菌药品的质量更有保证，人民

用药更安全，也有利于我国非最终灭菌的无菌药品更多地参与国际竞争。

关键词：非最终灭菌无菌原料药；验证；ＧＭＰ；无菌保证

山东大学硕士学位论文

ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆ

Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

Ａｓｓｕｒａｎｃｅｏｎ

Ｎｏｎ．ｔｅｒｍｉｎａｌＳｔｅｒｉｌｉｚｅｄＳｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ

Ａｕｔｈｏｒ：ＢｉｎＹａｈ

Ａｄｖｉｓｏｒ：Ｄｏｃ．ＷｅｉｈｏｎｇＷａｎｇ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ

Ｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ

ｏｆｓｔｅｒｉｌｅｍｅｄｉｃｉｎａｌ

ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｔｈｅ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ

ａｌｗａｙｓ

ｆｏｃｕｓｏｎａｖｏｉｄｉｎｇ

ｍｉｃｒｏｂｉａｌ

ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ，ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ

ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄ

ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ

ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉ叩．Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｎｏｔ

ｏｎｌｙ

ｋｉｌｌｏｒｅｌｉｍｉｎａｔｅａ１１ｍｉｃｒｏｂｉａｌ

ｐｒｏｐａｇｕｌｅ

ａｎｄ

ｓｐｏｒｅ

ｔｏｉｍｐｒｏｖｅ

ｔｈｅ

ｓａｆｅｔｙ

ａｎｄ

ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌ

ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｂｕｔ

ａｌｓｏ

ｓｈｏｕｌｄｅｎｓｕｒｅｔｈｅ

ｓｔａｂｉｌｉｔｙ

ａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｏｆ

ｔｈｅ

ｍｅｄｉｃｉｎａｌ

ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ

ｉｓ

ｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｃｈｏｏｓｅ

ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｔｏｅｎｓｕｒｅｔｈｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ

ｑｕａｌｉｔｙ．

ＴｈｅｃｏｍｐａｎｙｗｈｅｒｅＩａｍ

ｗｏｒｋｉｎｇ

ｉｓａｄｒｕｇｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｆｏｃｕｓｉｎｇｏｎ

ｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ．Ｗｉｔｈｔｈｅ

ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ

ｏｆＧｏｏｄＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ

Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２０１０），ａｓｗｅｌｌａｓｉｎｌｉｎｅ、Ⅳｉｍｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ

ｈｉｇｈ－ｅｎｄ

ｍａｒｋｅｔｓｓｕｃｈ丛

ＥＵＧＭＰａｎｄＦＤＡｃＧＭＰ，ｔｈｅｒｅｉＳｎｅｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｓｙｓｔｅｍｏｎ

ｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩａｎｄｃｏｎｄｕｃｔ

ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｓ．

Ｉ．ＴｅｃｈｎｏｌｅＩｇｉｅａｌ

ｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ

Ｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｆｌｏｗｆｏｒｔｈｅｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩｉｎ

ｍｙ

ｃｏｍｐａｎｙ，ｗｅ

ｃａｎｍａｋｅａｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｔｈａｔｔｈｅｂａｓｉｃ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｆｌｏｗｉｓｃｒｕｄｅａｆｔｅｒ

ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇｅｎｔｅｒｉｎｇ

ｉｎｔｏｔｈｅ

ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｉｎｇ

ｔａｎｋｆｏｒｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈａｓｅｐｔｉｃ

ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｎ

ｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｗａｓｈｉｎｇ，ｄｒｙｉｎｇ，ｍｉｌｌｉｎｇ

ａｎｄ

ｐａｃｋａｇｉｎｇ．Ｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇａｆｔｅｒ

ａｓｅｐｔｉｃｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ

ｉｓ

ａｄｏｐｔｅｄ

ｗｈｉｃｈｈａｓ

ｈｉｇｈｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｎａｉｒ

ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ

ａｎｄ

ａｓｅｐｔｉｃ

ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｐｅｒａｔｏｒｓ．１１１ｅ

ｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔｃａｎｅｎｔｅｒｈｕｍａｎｂｌｏｏｄ

ｄｉｒｅｃｔｌｙ，

ｍｉｃｒｏｂｉａｌ，ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ

ａｎｄ

ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ

ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ

ｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅ

ｗｈｏｌｅ

ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．Ａｓ

ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎＣａｎｎｏｔｂｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｏｎｓｅｍｉ－ｆｉｎｉｓｈｅｄ

ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄ

ｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｈａｓ

ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ

ｒｉｓｋｄｕｅｔｏ

ｅｘｐｏｓｕｒｅｄｕｒｉｎｇ

４

山东大学硕士学位论文

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ

ｓｈｏｕｌｄ

ｐａｙ

ｍｏｒｅａｔｔｅｎｔｉｏｎｔｏｔｈｅｒｉｓｋｄｕｅｔｏｆａｉｌｕｒｅｏｆ

ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．

２．Ｍａｊｏｒｒｉｓｋ

ｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ

Ｔｈｅｒｉｓｋｏｆ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ

ｍａｉｎｌｙ

ｃｏｍｅｓ

ｆｒｏｍｃｏｎｔｒｏｌｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｂｅｆｏｒｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｏｆ

ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ，ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ

ｏｆｃｏｎｔａｉｎｅｒ

ｃｌｏｓｕｒｅ，ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓｙｓｔｅｍ．１１１ｉｓ

ｔｈｅｓｉｓ．ｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆ

ｔｈｅ

ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ’Ｓ

ａｃｔｕａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｎｄ

ｍｙｗｏｒｋｉｎｇｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ，ａｎｄａｃｃｏｒｄｉｎｇ

ｔｏｔｈｅ

ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｇｕｉｄａｎｃｅｏｎＧＭＰ，ｍａｋｅｓａｎａｎａｌｙｓｉｓｏｎｔｈｅｍａｊｏｒｒｉｓｋｓｏｆ

ｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄ

ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｓ

ｃｏｎｔｒｏｌｍｅａｓｕｒｅｓｏｎｔｈｅｒｉｓｋｓ．

３．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ

Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｉｓｔｈｅｂａｓｉｃ

ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ

ｉｎＧＭＰ，ａｎｄｉｓａｐａｒｔ

ｏｆ

ｑｕａｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅ

ｓｙｓｔｅｍ

ｉｎ

ｄｒｕｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ．ＶａｌｉｄａｔｉｏｎＣａｎｅｎｓｕｒｅｔｈｅ

ｐｒｏｄｕｃｔｑｕａｌｉｔｙ

ｉｎ

ｄｒｕｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓｍｅｅｔ

ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ．ＳＯａｓｔｏ

ｐｒｏｔｅｃｔ

ｔｈｅｌｉｆｅ

ｓａｆｅｔｙ

ｏｆ

ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ

ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｏｆｖａｌｉｄａｔｉｏｎｉｎＣｈｉｎａＧＭＰ（２０１０）ｉｓａｓｅｒｉｅｓｏｆａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ

ｔｈａｔａｎ

ｏｐｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅ（ｍｅｔｈｏｄ），ｐｒｏｃｅｓｓｏｒｓｙｓｔｅｍ

ｗｉｌｌ

ｐｒｏｄｕｃｅａｒｅｓｕｌｔ

ｍｅｅｔｉｎｇ

ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｃｃｅｐｔａｎｃｅｃｒｉｔｅｒｉａ．Ｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

ｏｆ

ｄｒｕｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ，

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｉｓａｍｉｌｅｓｔｏｎｅｏｆｔｈｅｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

ｏｆＧＭＰ，ｉｓｔｈｅ

ｎｅｃｅｓｓａｒｙ

ｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅ

ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ

ａｎｄｓｔａｂｌｅ

ｏｐｅｒａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｑｕａｌｉｔｙｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄｉｓａ

ｈｉｇｈｅｒｑｕａｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｏｌｅ

ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｖａｌｉｄａｔｉｏｎｉｎＧＭＰｉｓ

ｍｅｅｔｉｎｇｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ

ｏｆ

ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ

ｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｒｉｓｋｏｆ

ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓ

ｔｏｅｎｓｕｒｅｄｒｕｇｑｕａｌｉｔｙ，ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｑｕａｌｉｔｙｃｏｓｔｔｏｉｍｐｒｏｖｅ

ｅｃｏｎｏｍｉｃｂｅｎｅｆｉｔ．

Ａｓｔｏｔｈｅｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ，ｉｎ

ｏｒｄｅｒｔｏｍａｋｅｔｈｅ

ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｔｏｍｅｅｔｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ａｎｄｅｎｓｕｒｅｔｈｅｓｔａｂｌｅ

ｏｐｅｒａｔｉｏｎ

ｏｆｔｈｅ

ｐｒｏｃｅｓｓ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｓ

ｎｅｅｄｅｄｉｎｃｌｕｄｅ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｃｌｅａｎ

ｗｏｒｋｓｈｏｐ

ａｎｄａｉｒ

ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｅｑｕｉｐｍｅｎｔｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ａｓｅｐｔｉｃ

ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ

ｓｙｓｔｅｍｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ｃｏｎｔａｉｎｅｒ

ｃｌｏｓｕｒｅ

ｉｎｔｅｇｒｉｔｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎｐｅｒｓｏｎｎｅｌ

ｅｎｔｅｒｉｎｇ

ｉｎａｎｄｏｕｔｏｆＣｌａｓｓＢ

ａｒｅａ，ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｎ

ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ

ａｎｄＳＯｏｎ．Ｔｈｉｓ

ｐａｐｅｒｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ

ｍａｋｅｓｒｅｓｅａｒｃｈ

ｏｎｔｈｅｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄ

ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ

ｔｅｓｔ，

ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ

ｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌ

ｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ

ｔｅｓｔ，ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｓ

ｏｆ

ａｓｅｐｔｉｃ

ｆｉｌｔｅｒｓｉｎｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ

ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ

ｏｆ

ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｔｅｓｔ

ｏｆｎｏｎ．ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ＡＰＩ，ａｓ

ｗｅｌｌａｓｓｅｐａｒａｔｉｏｎ

ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌ

山东大学硕士学位论文

ｃｏｌｏｎｙ

ｆｏｕｎｄ

ｉｎｔｈｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ

ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ．

Ｔｈｅ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ａｎｄｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｊｅｃｔ

１Ｔｈｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｏｆｔｈｅｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ

ｉｓ

ｂａｓｅｄ

ｏｎｔｈｅ

ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ

ｏｆ

ｒｉｓｋ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ａｎｄ

ｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄ

ｔｈｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙＣａｌｌｂｅｅｎｓｕｒｅｄｗｈｅｎ

ｅａｃｈ

ｓｙｓｔｅｍＣａｌｌｂｅｅｎｓｕｒｅｄ．

２

Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ

ｔｏｔｈｅｂａｓｉｃ

ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ

ｏｆＣｈｉｎａＧｏｏｄＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ

Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２０１０）

（ＧＭＰｆｏｒｓｈｏｒｔ）ａｎｄ

ｉｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌ

ｔｅｃｈｎｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅ，ｔａｋｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒ

ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅ

ｓｙｓｔｅｍ

ａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆｎｏｎ—ｔｅｒｍｉｎａｌ

ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩａｓｔｈｅ

ａｐｐｅｎｄｉｘ

ｏｆＧＭＰｉｓｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒ

ｄｒｕｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓｔｏ

ｂｅｔｔｅｒ

ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅｓｙｓｔｅｍ

ａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．

３

Ｔｏ

ａｎａｌｙｚｅ

ａｎｄ

ｖａｌｉｄａｔｅｔｈｅ

ｋｅｙ

ｆａｃｔｏｒｓ

ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ

ｔｈｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅｏｆ

ｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ：（１）ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｌｅｖｅｌ

ｂｅｆｏｒｅｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｏｎ；（２）ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ；（３）ｉｎｔｅｇｒｉｔｙｏｆｔｈｅ

ｃｏｎｔａｉｎｅｒｃｌｏｓｕｒｅ；（４）ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ；（５）ｇｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ

ｑｕａｌｉｔｙｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．

４Ａｓｔｈｅｄｏｍｅｓｔｉｃ

ｄｒｕｇ

ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓｍｏｒｅａｎｄｍｏｒｅｒｅａｌｉｚｅｔｈｅ

ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ

ｏｆ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ，ｔｈｅ

ｓｔｅｒｉｌｉｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅ

ｌｅｖｅｌｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ

ｗｉｌｌｃｏｎｔｉｎｕｅｔｏｉｍｐｒｏｖｅ

ａｎｄｂｅ

ｌｉｎｅ

、析ｔｌｌｔｈｅｉｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌ

ｔｈｒｏｕｇｈｓｙｓｔｅｍ

ｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄ

ｇｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｑｕａｌｉｔｙ

ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，ｔｈｅｑｕａｌｉｔｙ

ｏｆｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ

ａｎｄ

ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ

ｕｓａｇｅｓａｆｅｔｙ

ｗｉｌｌｂｅｍｏｒｅ

ｇｕａｒａｎｔｅｅｄ，ａｎｄｉｔｉｓａｌｓｏｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｆｏｒｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ

ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅ

ｐｒｏｄｕｃｔ

ｉｎＯｕｒｃｏｕｎｔｒｙｔｏ

ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ

ｉｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ

ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎｏｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ

ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄｓｔｅｒｉｌｅＡＰＩ；ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ；ＧＭＰ；ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅ

６

山东大学硕＋学位论文

符号说明

ＦＤＡ（Ｆｏｏｄａｎｄ

ＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）：美国食品药品监督管理局

ＩＣＨ（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅｏｎＨａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＴｅｃｈｎｉｃａｌ

Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ

ｆｏｒ

Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ

ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｆｏｒｔｔｕｍａｎＵｓｅ）：人用

药品注册技术要求国际协调会

ＧＭＰ（ＧｏｏｄＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉ

ｎｇ

Ｐｒａｃｔｉｃｅ）：药品生产质量管理规范

ＣＦＵ／ｍｌ：每毫升液体中含有的细菌菌落

ＣＦＵ／ｇ：每克物体中含有的细菌菌落

ＣＩＰ（ＣｌｅａｎｉｎｇＩｎＰｌａｃｅ）：在线清洗

ＳＩＰ（ＳｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎＩｎＰｌａｃｅ）：在线消毒

ＱＭＳ（Ｑｕａｌｉｔｙｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓｙｓｔｅｍ，ＱＭＳ）：质量管理体系

ＱＡ（Ｑｕａｌｉ

ｔｙａｓｓｕｒａｎｃｅ，ＱＡ）：质量保证

ＨＶＡＣ（ＨｅａｔｉｎｇＶｅｎｔｉｌａｔｉｏｎａｎｄＡｉｒＣｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）：供热通风与空调工程

ＳＡＬ（ｓｔｅｒｉｌｉ

ｔｙ

ａｓｓｕｒａｎｃｅｌｅｖｅｌ）：无菌保障值

Ｈ１４：指高效过滤器的过滤级别

Ｆ０值：蒸汽来菌程序赋予被灭菌物在１２１℃下的等效灭菌时间，通常用于不同

灭菌程序灭菌能力的评价。

Ｆ。值：灭菌过程中灭菌对象接受的换算为等比温度（１７０℃）后的总灭菌时间，

或称标准温度（１７０。Ｃ）下的等效时问。（１７０。Ｃ）。

ＴＳＢ（ＴｒｙｐｔｉｃａｓｅＳｏｙ

Ｂｒｏｔｈ）：胰蛋白胨大豆肉汤

ＤＰＣ（ｄｉｌｕｔｅ

ｐｌａｔｅ

ｃｏｕｎｔ）＝稀释平板计数法

ＴＳＡ（ＴｒｙｐｔｉｃＳｏｙＡｇａｒ）＝胰蛋白胨大豆琼脂平板

ＬＲＶ（ＬｏｇＲｅｄｕｃｔｉｏｎＶａｌｕｅ）＝对数减少值

ＳＬＢ（ＳａｌｉｎｅＬａｃｔｏｓｅＢｒｏｔｈＭｅｄｉｕｍ）＝盐乳糖肉汤培养基

ＬＢ（ＬａｃｔｏｓｅＢｒｏｔｈ）＝乳糖培养基

山东大学硕士学位论文

第一章绪论

我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生

物达８００～３５００个／ｍ３，在土壤中达１～５００×１０８个／ｇ，在严重污染的水中可达

１０７个／ｍｌ。微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但

在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品

的安全有效，需要对其进行控制。消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操

作，是控制微生物的最基本的手段。

１．１无菌、无菌药品的概念

无菌是指不存在活的生物（ＧＭＰ指南）。“无菌”从定义上来说是一个绝对

的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不

到，也无法加以证实。然而，无菌药品的安全性要求设定相对的无菌标准。

ＦＤＡ（美国食品药品监督管理局）、欧盟将“百万分之一”微生物污染率作

为灭菌产品“无菌”的相对标准，如今己为世界各国普遍接受和采用Ⅲ。

无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药“１。无菌

药品需要对可能引起微粒、微生物和内毒素的潜在污染进行严格控制，无菌工

艺的本质就是减少或者消除这些潜在的污染源“１。

１．２无菌药品生产工艺的划分

根据药品无菌性的获得，无菌药品的生产工艺一般分为最终灭菌的无菌生

产工艺和非最终灭菌的无菌生产工艺，二者之间存在本质区别。“’

最终灭菌的无菌生产工艺通常要求在严格的生产环境中进行产品灌装和容

器的密封。在这种环境下进行灌装和密封能够尽可能降低中间产品的微生物和

微粒污染，结合后续的无菌工艺，将更好的确保产品的无菌保证水平。在最终

灭菌前，药品、容器和密封组件可以将灭菌前药品的微生物污染水平控制在较

低的范围内，但不能过到无菌状态，所以产品在最终容器中密封后需要接受灭

菌处理，比如热力学灭菌或辐射灭菌。

在非最终灭菌的无菌生产工艺中，药品、容器和密封组件首先以适当的方

式分别灭菌或除菌，然后组合到一起，因为产品在最终容器中密封后不再进行

灭菌处理，所以必须在更为严格的生产环境中进行产品灌装和容器的密封。相

山东大学硕士学位论文

对于最终灭菌的无菌生产工艺，非最终灭菌的无菌生产工艺存在更多的可变因

素，在组合成最终的无菌药品之前，产品的每个部分通常都要接受不同的灭菌

处理。如铝瓶容器进行干热灭菌，胶塞进行湿热灭菌，药液进行过滤除菌、与

无菌产品接触的气体要过滤除菌ｂ１等。以上生产工艺均要求验证并进行过程控

制，任何一个工序发生失误，都可能导致产品受到污染。因此以无菌生产工艺

生产的无菌产品更应该建立严格的无菌保证体系。

表卜１最终灭菌无菌生产工艺和非最终灭菌无菌生产工艺对比表

１．３国内外研究现状

我国《药品生产质量管理规范》（２０１０年修订）己基本与欧盟ＧＭＰ和ＦＤＡｃＧＭＰ

接轨，在无菌药品附录中对无菌药品生产质量管理的基本原则、洁净度级别及

监测、厂房设施及设备等方面提出了原则性要求，以非最终灭菌无菌工艺生产

的粉针剂如何进行无菌生产工艺的验证，在该附录中有较为具体的要求，但是

对于非最终灭菌无菌工艺生产的无菌原料药如何进行无菌生产工艺的验证，则

没有提出原则性要求。只有美国注射剂协会于２００６年颁布了第２８号技术报告，

即无菌原料药的工艺模拟试验，对非最终灭菌的无菌原料药如何进行相应的无

菌工艺验证提出了原则性要求¨１。这就要求国内的无菌原料药生产企业在风险

分析的基础上，结合各企业的实际情况建立相应的无菌保证体系并进行相关的

验证。

１．４本论文的选题依据、特色与意义

经历了安徽华源的“欣弗”等药品不良反应事件后，人们对用药安全的要

求与我国药品生产实际水平的矛盾越来越突出，随着《药品生产质量管理规范》

（２０１０年修订版）ｕ１的要求与欧盟ＧＭＰ和ＦＤＡｃＧＭＰ的要求逐步接轨以及ＩＣＨＱ９

山东大学硕士学位论文

的颁布实施，制药行业对药品风险的识别能力逐步提高，逐步认识到无菌药品

的最大风险是微粒、微生物和内毒素的污染。

因我公司的产品是不能耐受高温或其它方式的最终灭菌的无菌原料药，因

此我公司的无菌产品的生产工艺选择的是非最终灭菌工艺的无菌生产工艺。为

严格执行新版ＧＭＰ的要求，生产出安全高效的药品，保证人民的用药安全，建

立非最终灭菌工艺的无菌原料药的无菌保证体系并进行相关的验证，对我公司

顺利实施新版ＧＭＰ，保证药品质量具有实际的指导意义；因此本文对“非最终

灭菌无菌原料药无菌保证的建立与验证”进行了探讨。

本论文基于我公司非最终灭菌的无菌生产工艺的无菌原料药生产工艺流

程，制订了相应的生产过程控制项目和控制点，根据无菌保证的风险，从产品

灭菌／除菌前微生物污染水平的控制、灭菌／除菌工艺的可靠性、包装容器的密

封完整性、无菌工艺模拟验证和无菌保证管理体系制定相应的控制措施。

在初步探讨如何建立无菌保证的基础上，本文重点探讨了如何进行灭菌／

除菌工艺的的可靠性验证，包装容器的密封性验证，非最终灭菌无菌原料药的

无菌工艺模拟试验以及环境菌的分离与鉴别，尤其对除茵过滤工艺验证和无菌

工艺模拟试验进行了探索，对无菌过滤器的细菌挑战、化学兼容性试验、溶出

物在工业化生产中如何具体实施验证进行了研究，对非最终灭菌无菌原料药的

无菌工艺模拟试验如何实施进行了研究，同时对洁净区环境监测中发现的的菌

落进行了分离并委托山东省药品检验所进行了鉴别。

随着本论文所探讨事项的实施，我公司的无菌原料药的无菌保证能力得到

了国内外客户的高度评价，尤其是得到了国际高端市场（欧盟、美国、Ｆ１本）

客户的认可，在我公司２０１３年７月通过日本ＰＭＤＡ官方审计的基础上，为更好

地迎接欧盟成员国荷兰官方的ＧＭＰ审计提供良好的基础。为我公司无菌原料药

成功进入欧盟和日本市场提供了前置条件，为国内其它无菌原料药生产企业进

入国际高端市场具有借鉴意义。

山东大学硕士学位论文

第二章非最终灭菌无菌原料药生产工艺流程及工艺控制点

非最终灭菌无菌原料药的无菌保证主要通过严格控制每一重要操作步骤及

其生产环境来完成的。由于无菌产品直接进入人体血液，应在整个无菌工艺过

程中控制微生物、内毒素和微粒污染，由于无法对成品进行灭菌处理，并且该

类工艺在生产过程中有产品暴露带来的风险，因此在该类工艺中应更关注无菌

工艺的失败带来的风险。根据我公司现有非最终灭菌无菌原料药的生产工艺，

归纳出非最终灭菌无菌原料药的工艺流程，并根据生产实践经验，总结出非最

终灭菌无菌原料药的工艺控制项目和工艺控制点。希望能够为非最终灭菌无菌

原料药无菌生产过程的控制提供一些借鉴和帮助，提高非最终灭菌无菌原料药

的产品质量，更好地为患者服务。

２．１非最终灭菌无菌原料药生产工艺流程图

我公司以非最终灭菌无菌生产工艺生产的无菌原料药有氨曲南、头孢地嗪

钠、盐酸头孢噻呋等，其无菌生产工艺见下表：

表２—１公司主要产品工艺过程对比表

山东大学硕士学位论文

根据本表中所列的我公司的主要非最终灭菌无菌原料药的生产工艺，归纳

出非最终灭菌无菌原料药的普遍性的生产工艺流程见下图

山东大学硕十学位论文

无菌室

图２—１非最终灭菌无菌原料药生产丁：艺流程图

山东大学硕士学位论文

２．２非最终灭菌无菌原料药生产过程控制点和控制项目

根据图２—１可知，非最终灭菌无菌无菌原料药的无菌保证系统除正常生产

工艺外，主要由无菌过滤系统、干热与湿热灭菌系统、空气净化系统、洁净区

的环境与清洁、人员无菌操作组成。

２．２．１无菌过滤系统工艺控制点和控制项目

无菌过滤系统的目的是通过无菌过滤器将产品溶液中携带的微生物截留

下，因此无菌过滤器是非最终灭菌无菌原料药的无菌保证的关键工艺控制项目，

其工艺控制要求见下表：

表２—２无菌过滤系统工艺控制点

２．２．２空气净化系统工艺控制点和控制项目¨１

在药品生产中，空气净化系统是一个关键系统，主要作用是通过对药品生

产环境的空气温度、相对湿度、悬浮粒子、微生物等的控制，确保药品生产环

境满足《药品生产质量管理规范》的要求，避免空气污染和交叉污染的产生并

为操作人员提供适宜的工作环境，以减少人员的发尘量和产菌量，减少对洁净

区环境的污染和破坏，其主要控制点见下表：

山东大学硕士学位论文

２．２．３洁净服的灭菌控制

为避免洁净区操作人员对洁净区环境的污染和交叉污染，需要将在洁净区

工作的人员用洁净工作服进行“包裹”，因此，洁净服的无菌性就非常重要，需

要对洁净服进行清洗和灭菌，灭菌要求见下表：

表２－４洁净服清洗灭菌控制表

２．２．４洁净区的清洁和消毒

ＧＭＰ的核心内容是防止污染、交叉污染、混淆和差错，清洁和消毒是防止

污染、交叉污染的重要方法。不同级别的洁净区对生产环境、设备和人员有不

同的清洁和消毒的要求，为保证药品生产质量，防止对药品生产造成污染，根

据生产实践经验，建立洁净区清洁和消毒的具体内容和方法，具体要求见下表：

表２—５洁净区清洁内容及清洁方汇总表

清洁

区域

清洁场所设备器具清沾方法

∞浸有７５％酒精的ｊ｜，‘湿丝光毛¨Ｊ擦拭，清除各类污迹

级

地面、操作平台、阶梯

区

浸有７５％酒精的、卜湿丝光毛¨Ｊ擦拭，清除各类污迹

山东大学硕士学位论文

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭。

门窗、桌椅

消毒剂喷雾后用浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦干。

墙壁

房顶灯具

消毒剂喷雾后用浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦干。

标识

清理清洗

废物贮器

用消毒剂刷洗，晾干

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭内部外部

传递柜

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭内部外部

结晶罐

三合一灭菌柜粉粹机

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

混合机轧盖机

百级层流外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

各类管道外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

控制盘ＰＨ计、浊度仪

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭

更衣架穿衣镜置物架

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭

浸有纯化水的半湿绸布毛巾拧干擦拭内部、外部

更衣橱

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭内部、外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

消手器

漫有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭外部

烘手器

浸有７５％酒精的ｊ卜湿绸布毛巾擦拭外部

将水池内壁、上缘、外壁刷洗干净，用纯化水将脏物冲

更衣室水池

去。用０．２％新洁尔灭泡刷５分钟。进行消毒后，用纯化水

冲洗干净。

先打开封盖，用纯化水冲洗表面污物，再拿下花板，用

纯化水将脏物冲去。倒入０．２％新洁尔灭泡刷５ｍｉｎ，进行

更衣室地漏

消毒，最后朋纯化水冲洗干净，灌入消毒液，盖上花板

和外盖，注意检查水封内消毒液要足量，防止废气倒灌。

浸有纯化水的ｉＦ湿丝光毛巾擦拭，清除各类污迹

ｎ

地面

级

浸有７５％酒精的？卜湿丝光毛巾擦拭。

洁

净

门窗、玻璃、墙壁虏

消毒剂喷雾后刚绸布毛巾擦干。

区

项、灯具、标识

废物贮器清理清洗

１６

山东大学硕士学位论文

用消毒剂刷洗

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭内部外部

传递柜

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭内部外部

先打开封盖，』＝ｆｊ纯化水冲洗表面污物，再拿下花板，用

纯化水将脏物冲去。倒入０．２％新洁尔灭泡刷５ｍｉｎ，进行

地漏

消毒，最后用纯化水冲洗干净，灌入消毒液，盖上花板

和外盖，注意检查水封内消毒液要足量，防止废气倒灌。

将水池内壁、上缘、外壁刷洗干净，用纯化水将脏物冲

水池

去。用０．２９６新沽尔灭泡刷５分钟，进行消毒后，用纯化水

冲洗干狰。

过滤器灭菌柜洗瓶机

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭外部

洗农机百级层流外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有纯化水的半湿绸布毛巾拧干后擦拭

各类管道外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛ｌ｜Ｊ擦拭

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭

更衣架穿衣镜

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭

衣橱桌椅浸有纯化水的半湿绸布毛『ｎ擦拭

浸有纯化水的半湿丝光毛巾擦拭，清除各类污迹

地面、操作平台、阶梯

浸有７５％酒精的半湿丝光毛Ｉ｜Ｊ擦拭。

门窗、玻璃、墙壁房

每日喷雾后，川绸布毛ＩｆＪ擦干。

顶、灯具

用０．２％新洁尔灭或１％苯酚喷雾后用绸布毛巾擦

干。

清理清洗

废物贮器

用消毒剂刷洗

浸有纯化水的ｊ｜，．湿绸布毛巾擦拭内部外部

。

传递柜

级

洁

浸有７５％酒精的！ｌ，湿绸布毛＇ｌＪ擦拭内部外部

净

先打开封盖，用纯化水冲洗表面污物，再拿下花板，

区

用纯化水将脏物冲去。倒入Ｏ．２％新洁尔灭泡刷５ｍｉｎ，进

地漏行消毒，最后用纯化水冲洗干净，灌入消毒液，盖上花

板和外盖，注意检查水封内消毒液要足量，防止废气倒

灌。

将水池内壁、上缘、外肇刷洗干净，用纯化水将脏

水池

物冲去。川０．２％新沽尔灭泡刷５分钟后用纯化水冲洗干

净

过滤器溶解罐计量罐

浸有纯化水的？卜湿绷布毛巾擦拭外部

贮罐等洗衣机

浸有７５％酒精的、卜湿绸布毛巾擦拭外部

山东大学硕士学位论文

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭外部

ＰＨ计

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭外部

各类管道外部

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭外部

浸有纯化水的半湿绸布毛巾擦拭

更衣架穿衣镜

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭

浸有７５％酒精的半湿绸布毛巾擦拭

托盘

浸有消毒剂的半湿绸布毛巾擦拭

表２—６洁净区环境消毒汇总表

级别周期杀菌剂杀菌方法质量标准

７５％酒精每班喷雾２—３次，喷雾水（１％苯酚或Ｏ．２％

每班１％苯酚新洁尔灭）要定期更换；半湿酒精绸布毛巾

Ｏ．２％新洁尔灭擦洗墙壁、门窗玻璃，擦地。

田

每日

臭氧通入臭氧，密闭循环３０ｍｉｎ。

级

洁

每周

７５％酒精７５％酒精擦洗各房间房顶。

净

区

根据环

境监测

甲醛

洁净区彻底清场后升温４０＂（２左右，通入甲

结果决醛闷消ｌＯｈ以上，排风１２ｈ以上。

定周期

纯化水

每班喷雾（１％苯酚或０．２％新洁尔灭）２次；

每班１％苯酚

Ｏ．２％新洁尔灭

用纯化水擦洗门窗玻璃，消毒水擦地。

环境沉降

ｎ每日

臭氧通入臭氧，密闭循环３０ｍｉｎ。

菌测试合

级格

洁

每周

Ｏ．２％新沽尔

用７５％酒精擦洗各房间墙壁。

净

灭７５％酒精

区

根据环

境监测洁净区彻底清场后升温４０＂Ｃ左右，通入甲

结果决

甲醛

醛闷消１２ｈｒ以上，排风８ｈｒ以上。

定周期

纯化水

ｏ

每班ｌ％苯酚

每班喷雾（纯化水）１次；用７５％酒精擦洗门

级

０．２％新洁尔灭

窗玻璃，消毒水擦地。

洁

净

每目臭氧

通入臭氧，密闭循环３０ｍｉｎ。

区

０．２％新沽尔灭

每周用纯化水擦洗各房间墙壁。

７５％酒精

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表２—７清洁工具的清洁方法汇总表

清洁用具Ｂ级洁净区Ｃ级洁净区Ｄ级洁净区

擦设备内壁使用

使用后退出Ｂ级区，在

使用后在工具清洗间用

Ｃ级区清洗、晾干后经湿

注射用水彻底冲洗干

使用后在工具清洗

绸布和绸布毛巾净，用７５％酒精消毒后

间用注射用水彻底

热灭菌后传入冲洗干净后晾干

晾干

擦设备外壁、擦使用后退出Ｂ级区，存使用后在洁具间用纯化使用后在洁具间用

墙和天花板的绸Ｃ级区清洗、晾干后经湿水彻底冲洗干净，用纯化水彻底冲洗干

布毛巾热灭菌后传入７５％酒精消毒后晾干净后晾干

用浸有７５％酒精的半湿用浸有注射用水的半湿

用浸有纯化水的半

“Ｔ”型架湿绸布毛巾擦拭干

绸布毛巾擦拭干净绸布毛巾擦拭干净

净

用注射用水冲洗，再用

先用注射用水冲洗，再

用纯化水冲洗，把内

冲洗软管７５％酒精浸泡消毒后把用７５％酒精浸泡消毒后

部存水排空。盘好

内部酒精排空，盘好把内部酒精排空，盘好

２．３非最终灭菌无菌原料药生产特殊要求

（１）非最终灭菌的无菌产品使用无菌生产工艺进行生产，产品直接进入

人体血液，应在整个无菌工艺过程中控制微生物、内毒素和微粒污染，由于无

法对半成品进行灭菌处理，并且该类工艺在生产过程中有暴露带来的污染风险，

因此在该类工艺中应更关注无菌工艺的失败带来的风险。

（２）生产过程所用的洁净厂房与空调净化设施、工艺设备、灭菌系统、

工艺用水系统均应建立ＳＯＰ（标准操作规程），按照ＳＯＰ进行操作并记录。

（３）洁净厂房与空调净化系统、关键工艺设备、灭菌系统、无菌过滤系

统、工艺用水系统均应按照设定的验证方案进行验证和定期再验证。

（４）无菌生产工艺应进行验证验证和定期再验证。

（５）应建立适当的监控系统，对人员、空气及表面进行悬浮粒子、沉降

菌、浮游菌的监测

（６）从事无菌生产工艺的操作人员是无菌生产过程中的最大污染源，因

此应对从事无菌操作的人员进行卫生学、微生物学和相关ＳＯＰ的培训和再培训；

从事无菌生产的人员应定期体检并建立健康档案。

（７）任何影响验证状态的变更，应进行适当的风险评估并验证，经有资

质的人员批准后才能实施，以保证建立的无菌状态得到保持。

２．４本章小结

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对于非最终灭菌无菌原料药的生产，生产过程监控对保证产品无菌性至关

重要。本文通过作者的工作经验总结，结合实际详细介绍了非最终灭菌无菌原

料药生产工艺流程及其生产控制点，概括总结了非最终灭菌无菌原料药的无菌

体系的工艺控制点和控制项目。

通过对无菌生产工艺流程的的介绍和灭菌和除菌过滤系统以及清洁消毒系

统的过程控制，有效的保证了非最终灭菌产品的产品质量，确保产品的无菌性

符合ＧＭＰ的要求。

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第三章非最终灭菌无菌原料药生产工艺的

主要风险分析及控制措施

欧美国家和ＩＣＨ等国际组织及我国２０１０版ＧＭＰ均提出了质量风险管理的要

求。《药品生产质量管理规范》（２０１０年修订）第十三条质量风险管理是在整

个产品生命周期中采用前瞻或回顾的方式，对质量风险进行评估、控制、沟通、

审核和系统过程。第十四条应当根据科学知识及经验对质量负险进行评估，以

保证产品质量。第十五条质量负险管理过程所采用的方法、措施、形式及形成

的文件应当与存在的风险的级别相适应。

一套有效的质量风险管理方法可以在生产过程中提供一主动的方法以对可

能的质量问题进行标识和控制，以进一步确保患者所用药品的高质量。有效的

质量风险管理可以促进更好的决策。质量风险管理的两大主要原则是：制药企

业质量风险评估的最终目的在于保护患者的利益；质量风险管理程序实施的力

度、形式和文件的要求应科学合理，并与风险的程度相匹配。质量风险管理的

基本流程见下图阳１

图３－１质鼙风险管理程序幽

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无菌生产工艺质量保证的重点在于无菌保证、细菌内毒素和微粒污染的控

制，需要特别关注防止污染、交叉污染以及混淆、差错等风险。无菌生产人员

的技能、所接受的培训及其工作态度是控制上述风险的关键因素，设施和公共

系统的验证需重点关注洁净厂房与空调净化系统，生产必须按以风险分析和控

制为基础精心设计并经验证的方法和规程进行，产品无菌及其他质量特性也不

能仅依赖于任何形式的最终处理或成品检验。质量风险管理的理念贯穿于生产

与质量管理的全过程。

非最终灭菌无菌原料药的生产工艺过程主要包括粗品溶解、无菌过滤、结

晶、过滤洗涤干燥、包装等过程。因此其无菌保证的风险主要来自于产品灭菌／

除菌前微生物污染水平的控制、灭菌／除菌工艺的可靠性、包装容器的密封完整

性、无菌工艺模拟验证和无菌保证管理体系。

３．１产品灭菌／除菌前微生物污染水平的控制

产品灭菌前通常都存在一定程序的微生物污染，对于非最终灭菌的无菌原

料药而言，其除菌过滤前微生物污染水平一般用ＣＦＵ／ｍｌ表示，即每毫升溶液中

含有多少个细菌菌落。产品灭菌／除菌前微生物污染的原因分析采用鱼骨图法：

人

机

料

２２

法环

图３—２产品灭菌／除菌前微生物污染控制鱼骨图

料

品灭菌／除菌前

生物污染

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由图３—２可知，产品灭菌／除菌前微生物污染的因素有：原材料和包装材料中的

微生物；生产环境；生产设备；人员操作；微生物在产品中的增殖。

３．１．１原材料和包装材料中的微生物

原材料和包装材料中的微生物；存在于原材料和包装材料中的微生物可能

进入产品。而固体原料中的微生物分布可能是不均匀的，导致样品检验结果不

一定能代表该批原料的整体情况。通常采用的控制方法有：

（１）制定原辅料采购标准，规定微生物限度。通常应不超过ｌＯＯＣＦＯ／ｇ，

（借鉴纯化水微生物限度标准，不得过ＩＯＯＣＦＵ／ｍ１）并不得检出致病菌；

（２）对供应商进行审计时应重点关注供应商的生产过程对微生物的污染、

细菌内毒素污染、产品混淆和交叉污染风险的控制措施：

（３）对供应商及其供应的原料进行年度质量回顾分析，以评估其质量状

况。对有质量不良趋势的供应商应采取针对性的措施，如增加现场检查的频率，

更严格的取样方案。严格管理仓储条件，确保原料储存过程中质量受控。如干

燥、防虫、防鼠等；

（４）包装材料如玻璃瓶应定点采购，其包装应能防止昆虫等异物进入，

储存过程防止受潮长霉。

３．１．２生产环境微生物污染的控制

非最终灭菌无菌原料药的精制工序一般是从粗品衡量溶解开始直至完成密

封，都应分别在相应的洁净区中进行。上述生产步骤中都存在药物直接暴露于

环境的环节，存在来自于生产环境中的微生物污染的风险。为控制上述风险，

包括我国在内，国际上普遍采用Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ四个等级的洁净区控制标准，分别

对应无菌生产的各个工序。

ＧＭＰ（２０１０年修订）附录一第九条规定，无菌药品生产所需的洁净区可分

为以下４个级别“”：

Ａ级：高ＪｘＬ险操作区，如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞

口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域，应当用单向流操作台（罩）

维持该区的环境状态。单向流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为

０．３６一Ｏ．５４ｍ／ｓ（指导值）。应当有数据证明单向流的状态并经过验证。

在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用较低的风速。

Ｂ级：指无菌配制和灌装等高风险操作Ａ级洁净区所处的背景区域。

２３

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ｃ级和Ｄ级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区。

以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：

表３－１悬浮粒子标准

悬浮粒子最大允许数／立方米

洁净度级别

静态动态‘３）

≥０．５ｌａｍ≥５．０ｌａ

ｍ（２）≥０．５ｕｍ≥５．０ｌａｍ

Ａ级‘１）３５２０２０３５２０２０

Ｂ级３５２０２９３５２０００２９００

Ｃ级３５２０００

２９００

３５２００００

２９０００

Ｄ级３５２００００２９０００不作规定不作规定

药品暴露的环节应符合相应洁净区的“动态标准”，来自环境的微生物污染

风险是可接受的。通常采用的控制方法有：

（１）应配置维护良好并经定期验证合格的洁净厂房与空调净化系统。空

调净化系统应保证持续稳定地运行，洁净区新风险和人员数量的关系，应至少

达到规定的室内每人新鲜空气量应不少于４０ｍ３／ｈ的标准。国际通行标准为８Ｌ／

人／秒新鲜空气［１１１。这需要对洁净厂房与空调净化系统进行验证。

（２）应精心设计、实施动态环境监控方案，保证监控数据能反映洁净区的

实际情况。环境监控包括悬浮粒子监控、尘降菌监控和浮游菌监控，其采样点

的选择应基于风险评估得到。悬浮粒子、沉降菌、浮游菌监控点风险分析示例

见下表

表３－２悬浮粒子、沉降菌、浮游菌监控点风险分析

采样点位置分析

采

是否

是否

是否

样是否

是否是否是否是否有被

为粉

确定

房间名称重点位于接近接近回风

尘暴

为动

点重点

操作工作人流物流污染态检

号房间露区

测点区域面通道通道的风

域

险

ＡＢ级洁净区

结晶间２撑√√

结晶间３拌＿√

√

√

结晶间７拌√、，√

缓冲间８撑√

三合一间１３撑√

√√√√

三合一问１４＃√√

三合一问１８捍√√√＿

３０１车间Ａ级分装隔离区

缓冲１室１撑√√√√√

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采样点位置分析

采

是否

是否

是否

样

是否

是否是否

是否是否

有被

为粉

确定

房间名称重点位于接近接近回风

尘暴

为动

点

重点

操作工作人流物流污染态检

号房间露区

区域皿通道通道的风测点

险

域

缓冲１室２拌

√√

√√

√

分装室３撑√√√√√√

分装室４拌√√√

√

√√

轧盖室５拌√√、，√√

轧盖室６群√√

√√√

缓冲２室７拌√√√√√

缓冲２室８群√√√√√

（３）对环境监控结果进行回顾分析，根据环境监控数据、制定环境监控

警戒限和纠偏限，确保能及时发现、纠正环境恶化的趋势。

表３—３沉降菌、浮游菌动态监控标准表

洁净沉降菌（ｃｆｕ／４小时）浮游菌（ｃｆｕ／ｍ３）

级别

标准纠偏限警戒限

标准警戒限纠偏限

Ａ级＜１＜ｌ＜１＜１＜１＜１

Ｂ级５４３ＩＯ５３

Ｃ级５０３０

２０１００５０３０

因沉降菌的监控要求是动态４小时，因此需要验证含有培养基的沉降碟在

放置４小时仍具备捕捉细菌的能力；为准确监控洁净区内沉降菌、浮游菌的真

实数据，应消除生产过程中抗生素粉尘的影响，在制作沉降碟时应加入Ｂ内酰

胺酶，Ｂ内酰胺酶加入量的多少，应进行验证。

３．１．３生产设备微生物污染的控制

非最终灭菌无菌原料药的生产通常采用固定的专用设备，一般安装有在线

清洗（ＣＩＰ）和在线灭菌（ＳＩＰ）系统，以减少生产设备的微生物污染风险。常采

用的控制方法有：

（１）设备在线清洁和在线灭菌的方法应足够详细，应包含所有影响清洗

效果的参数，如水温、清洁剂浓度、流速、时间、阀门的开闭次序和时间、蒸

汽温度、压力等，以确保清洗效果的重现性。

（２）设备清洁与灭菌方法，包括清洁、灭菌后最长存放时间应经过验证。

（３）认真执行、记录清洁和灭菌过程，发生偏差应及时调查和整改。

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（４）应制定、执行可靠的设备状态管理措施，保证设备的状态受控。

（５）最好采用经验证的计算机化系统，自动执行、记录清洁和灭菌程序，

设备状态管理由计算机完成。

３．１．４人员操作中微生物污染的控制

人员及其活动是洁净区最大的污染源，一方面通过人员对环境的污染间接

影响产品带菌量，另一方面，某些生产操作中，人员与物料或药液有可能相互

接触，从而直接污染产品。通常采用的控制方法有：

（１）无菌操作人员应进行卫生学、微生物学、出入洁净区程序和无菌操作

的培训，养成良好的卫生习惯和无菌操作意识。对于进入Ｂ级洁净区的人员，

应进行出入Ｂ级洁净区的验证，同时所有进入Ｂ级洁净区的人员均应参加无菌

工艺模拟试验，包括维修人员、监督人员和管理人员。

（２）应配备质地良好的个人防护服装。无菌衣是用来“包裹”操作人员

的，无菌衣的材质（布料）和缝合部位的密封性就非常重要。应制定无菌衣的

清洗和灭菌次数，避免无菌衣的完好性“失效”。

洁净室内的粉尘主要来自于室内流动的空气及在室内活动的人体。当设备

条件确定后，提高洁净度也就是要求最大限度地将人体产生的微小尘埃控制在

洁净服内，阻止它穿过面料进入到空气中去。这就是所谓的面料的滤尘率要高。

提高滤尘率是以牺牲面料的透气性为代价的，因此针织面料以及织得比较疏松

的机织面料是不适用于洁净室的。洁净工作服常用的面料有含导电丝面料、华

达昵、纱卡、ＴＹＶＥＫ（防酸防碱）等。常规可选面料有５ｍｍ条型、５ｍｍ网格、２．５ｍｍ

网格面料导电绸，按顺序其防尘防静电效果是越来越来强；这也是根据洁净室

等级来选定的，一般ｃ级及以下的洁净室应采用５ｍｍ条型导电绸，Ｂ级洁净室

应采用５ｍｍ网格；Ａ级洁净室应采用２．５ｍｍ网格面料导电绸。

３．１．５微生物在产品中的增殖

微生物在适宜的条件下能迅速繁殖而使产品带菌量急剧增加。充足的水分

是必要条件。不同的微生物适宜的繁殖温度跨度很大。药液的性质，如有无抑

菌性，ＰＨ等也能显著影响微生物的繁殖速度。通常采用的控制方法有：

制定并验证各工艺步骤的时限，并在生产过程中严格执行各步骤的时限，

当超过规定的时限时，应重新进行清洗和灭菌。

对产品灭菌／除菌前微生物污染水平的控制，应对产品在灭菌／除菌前和微

２６

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生物负荷进行控制，其控制水平为不超过ＩＯＣＦＵ／ＩＯＯｍｌ药液（注射用水标准）¨１，

微生物负荷的取样位置宜选择在预过滤之后、第一级无菌过滤之前进行。

３．２灭菌／除菌工艺的可靠性

灭菌工艺的目的是使具有一定微生物污染水平的产品，经灭菌后达到残存

微生物概率不超过百万分之一的水平“柚。

３．２．１灭菌设备的适用性

灭菌设备的适用性是指灭菌设备执行灭菌工艺的能力，即灭菌设备对灭菌

工艺各参数和控制准确度和精确度能否使灭菌室内任一位置的被灭菌物品的

Ｆｏ／Ｆ。值满足灭菌工艺的需要。通常采用的控制措施有：

灭菌设备的选型应能满足需要；定期进行灭菌设备的再验证，对关键仪表

定期进行校验。

３．２．２灭菌／除菌工艺的可靠性

灭菌工艺的可靠性是指按照预定的灭菌工艺能够使具有一定微生物污染水

平的产品，经灭菌后达到残存微生物概率不超过百万分之一的水平。灭菌工艺

的可靠性是通过灭菌设备的验证进行控制。常见的灭菌工艺有湿热灭菌、干热

灭菌。

非最终灭菌的无菌原料药，因其不能采用最终灭菌工艺，而采用无菌过滤

工艺，因此其无菌过滤系统的可靠性更为重要，需要对无菌过滤系统进行充分

的验证。

３．２．３灭菌／除菌工艺的执行

应确保灭菌设备执行了设定的灭菌程序、完成了灭菌工艺，其主要风险在

于：灭菌设备中的温度传感器准确度发生漂移，使记录的灭菌数据与真实值不

符导致的偏差；意外事件如停电等导致的灭菌中断和数据丢失。通常采用的控

制措施有：

对灭菌柜的温度传感器每年进行一次校验，以确保灭菌柜数据的可靠性；

灭菌全过程通过两套互相独立的监控系统控制和记录探头，在操作人员的监督

下，通过与控制探头的对比，来确保灭菌柜的数据的可靠性。采用在线监控灭

菌温度和灭菌压力，每次灭菌均打印在线记录。对无菌过滤系统，使用前与使

用后均进行过滤系统的完整性检测，确保过滤系统的完整性。

３．２．４防止二次微生物污染

，７

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产品经灭菌后再污染微生物称为二次微生物污染。二次污染的主要原因是

高温灭菌完成后用于冷却产品的介质中存在的微生物穿过密封屏障进入产品。

高温状态时产品的密封可能和平时存在差异。通常采用的控制措施有：

灭菌设备设计应充分考虑二次微生物污染的风险。应采用经可靠灭菌的直

接接触产品的冷却介质。如灭菌后用无菌过滤的氮气进行保压，安装呼吸器

（０．２２ｕｍ滤芯，并定期做完整性测试）。干热灭菌柜的补风口、排湿口均安装

了高效过滤器，并在再验证过程中进行检漏。所有灭菌设备和灭菌物品均规定

了存放的有效期，并通过了培养基模拟灌装试验。

３．３包装容器密封完整性

无菌药品的容器应能在整个药品有效期内有完好的密封性，应能防止微生

物的侵入。最理想、最直接的方法是逐瓶测试容器的密封完整性。限于工业发

展的现状和成本较高等原因，目前国内工业界还没有好的办法对无菌原料药的

铝瓶包装进行逐件非破坏性检测。国际上普遍接受基于容器密封系统设计一密封

组件生产一密封完成一密封完整性验证的质量保证过程，以证明成品的密封特性。

造成密封完整性失控的潜在风险因素主要有密封系统设计缺陷、容器或密封组

件存在质量偏差、密封工艺过程偏差、密封完整性验证方法不严谨。通常采用

的控制方法有：

１密封系统应设计严谨，应尽量采用符合国际通行标准的密封构件；无菌

原料药采用铝瓶包装，由内盖套丁基橡胶材质的胶圈密封，套外盖压紧，然后

外套两层无菌膜并热合密封，作为对铝瓶包装的防护。

２密封组件，如胶圈、铝瓶供应商经过定期审计，保证其质量稳定可靠：

根据供应商审计的要求，铝瓶为直接接触药品的包装材料，每年均对生产商进

行现场质量审计，并签定质量保证协议。

３应制定铝瓶轧盖的合格标准，并制定抽样监测计划；因无菌原料药的包

装量相对较少，目前工业界没有成熟的轧盖设备，公司自行设计了一套轧盖密

封设备，使用压缩空气先压紧内外盖，再轧实的方法。该轧盖方式工艺可控，

具有可重现性。

４密封系统的完好性应经过验证，验证应挑战最差条件；通常采用的验证

方法有压力挑战法、亚甲基蓝溶液法和微生物侵入法。

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５当密封系统发生变更时，应评估该变更对密封系统完好性的影响，必要

时应重新进行密封完好性验证。

３．４无菌原料药工艺模拟试验

对于非最终灭菌的无菌生产工艺，即使所有与产品相关的设备均应过了灭

菌和除菌，但当药品、包装容器、密封件在实际工艺条件下组合一起时，仍有

可能因各种原因导至产品被污染，无菌性能得不到保证的风险。因此对于非最

终灭菌的无菌生产工艺，评估其无菌性能是不能仅通过最终产品的无菌检验，

必须从工艺整体考虑，进行无菌工艺模拟试验。无菌工艺模拟试验就是采用微

生物培养基替代产品，对无菌生产工艺进行评估的验证技术。

２０１０版ＧＭＰ无菌药品附录第四十七条规定“无菌生产工艺的验证应当包括

培养基模拟灌装试验”，ＦＤＡ无菌药品指南中也有类似要求：“为确保无菌产品

的无菌性，灭菌和无菌灌装工艺须经过充分验证”，“应采用培养基代替药品进

行无菌灌装对无菌工艺进行验证”。

为证明整个无菌生产过程无菌性处于稳定受控状态，无菌原料药工艺模拟

试验应验证以下内容：

无菌工艺具有生产无菌产品的能力的适用性；

无菌工艺生产无菌药品的能力与重现性；

检验在工艺模拟期间，能维持己建立的环境监控和人员监控参数；

清洁规程和清洁方法不会影响产品的无菌性；

验证无菌过滤前的微生物负荷；

评估无菌操作人员的熟练程度；

说明与现行ＧＭＰ符合性；

说明无菌操作规程是否恰当；

确定物品、器具、设备和过滤器从灭菌到使用的间隔时间；

评估生产操作干扰事件和最差情况对产品无菌性的影响；

为做好培养基模拟灌装试验，应制定《培养基模拟灌装标准操作规程》，将

培养基模拟产品无菌生产过程中的溶解、过滤、结晶、干燥、分装、称量、取

样、压盖工艺过程的准备、模拟操作进行详细的描述；将《无菌工艺模拟验证

方案》的风险控制和不利因素的模拟全部融入《培养基模拟灌装标准操作规程》，

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附有记录，供模拟灌装试验的追溯。

为做好培养基模拟灌装试验的清场工作，应制定《培养基模拟灌装清场操

作规程》，避免培养基对设备、管道、环境的污染。并进行培养基模拟灌装清洁

验证，规定了残留限度，以验证清场方法的可行性。

试验过程按照《培养基模拟灌装标准操作规程》进行操作，有原始记录，

记录试验过程，有在线打印记录，记录过滤系统、结晶罐、三合一、分装系统、

湿热灭菌柜、干热灭菌柜测试灭菌的过程。按照《培养基模拟灌装清场操作规

程》进行清场清洁，有清洁记录，记录清场过程，有取样记录，记录清洁验证

取样的过程，有ＱＣ检验报告，证明清场结果。

模拟试验完成后，应形成《培养基模拟灌装试验报告》和《培养基模拟灌

装清洁验证报告》，通过与模拟灌装记录、清场清洁记录汇总和评价，说明无菌

生产过程、设备和包装形式、人员操作等整个体系能够生产出符合要求的无菌

产品，满足无菌生产的要求。

３．５无菌保证管理体系主要风险和控制措施

无菌保证管理体系涉及ＧＭＰ各个方面的管理，对非最终灭菌的无菌原料药

其最大风险是防止已灭菌产品的污染，应从生产管理和质量管理两个方面进行

重点控制。

３．５．１生产管理

为防止已灭菌物品与未灭菌物品的混淆，采用双扉灭菌柜，双扉灭菌柜门

采用互锁系统，防止柜门对开；已灭菌物品挂有明显的状态标识，标有品名和

灭菌时间、有效期等。

已清洗和灭菌设备设有状态标识，标明灭菌时间和有效期等。已灭菌并进

行完整性测试的无菌过滤器，标明灭菌时间和完整性测试时问。

３．５．２质量管理

对生产过程及其环境实施严格的微生物学监控，而可能导致微生物监控失

败的主要风险有监控方法不科学、监控点没有代表性、培养基失活等。

以采用残存概率灭菌及无菌过滤除菌的生产工艺，需要特别强调的措施有

以下几个方面：

（１）在产品开始无菌过滤前，进行过滤料液的微生物负荷的监控；

（２）在进行热力学灭菌后发现的污染菌，应进行菌落纯化、分离和鉴定，

３ｎ

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并进行污染菌耐热性试验。

（３）偏差管理和变更管理是质量管理至关重要的部分。非最终灭菌无菌

原料药应重点从微生物污染风险的角度判断有关偏差和变更。建立严谨的偏差

报告和处理程序，所有微生物污染的偏差均经微生物专业人员审核。建立严谨

的变更管理程序，对于有可能增加微生物污染风险的变更，微生物专业人员参

与程序的评审。

（４）建立严格的质量评价程序，批生产记录必须经过审核；中间控制记

录、批检验记录必须经相应的负责人审核。在此基础之上，ＱＡ人员对批生产记

录和批检验记录进行双重审核。设计了科学合理的批生产记录确认记录；所有

偏差经过了调查；与微生物有关的偏差经过专业人员审核，如与无菌质量相关，

必须成立包括微生物专业人员在内的调查组对偏差进行调查，撰写偏差调查报

告，质量放行人根据调查报告的意见决定产品是否放行；质量管理人员具有相

应的资质和经验。

３．６本章小结

本章从产品灭菌／除菌前微生物污染水平的控制、灭菌／除菌工艺的可靠性、

包装容器的密封完整性、无菌工艺模拟验证和无菌保证管理体系共五个方面存

在的风险进行分析并讨论了相应的控制措施，以确保患者用药安全为目标，并

明确了进一步验证的相关要求。

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第四章非最终灭菌无菌原料药无菌保证的验证

验证是ＧＭＰ的基本要求，是制药企业质量保证体系的一部分。验证能够确

保制药企业有关操作的关键要素得到有效控制，确保产品质量符合要求，从而

保护患者的生命安全。美国在２０世纪７０年代发生的导致多起败血症的大输液

污染事件，ＦＤＡ经过调查将导致该药害事件的原因归结为“过程失控”。制药企

业在生产过程中，没有建立明确的控制生产全过程的运行标准，以致工艺运行

状态出现了危及产品质量的偏差。经过该次药害事件，ＦＤＡ采取了一个重要的

过程控制措施，这就是验证。

世界各国ＧＭＰ均对验证给出了明确的定义。我国ＧＭＰ（２０１０版）中验证的

定义为：“证明任何操作规程（或方法）、生产工艺或系统能够达到预期结果的

一系列活动”。在制药行业发展历程中，验证是ＧＭＰ不断创新发展的里程碑，是

质量管理体系持续稳定运行的必要基础，是更高的质量保证方法。验证在ＧＭＰ

中所体现的价值和所发挥的作用有：符合法规要求，降低患者风险：优化生产

工艺，保证药品质量；降低质量成本，提高经济效益。

对于非最终灭菌的无菌原料药，为使生产过程符合预定的标准，保证工艺

稳定运行，应做的验证主要有洁净厂房与空调净化系统验证、灭菌设备验证、

无菌过滤系统验证、包装密封完整性、无菌工艺模拟试验、人员出入Ｂ级洁净

区验证、消毒剂消毒效果验证、为支持验证所做的生物指示剂含菌量复核，查

出检的菌落纯化、分离和鉴定；为进行环境监控做了表面微生物擦拭法验证等。

４．１洁净厂房与空调净化系统验证

ＧＭＰ的核心是防止药品生产中的污染、交叉污染、混淆和差错。其构成包

括软件和硬件两方面的内容，硬件包括合格的厂房，生产环境和设备。其中洁

净厂房与空调净化系统是药品生产中最核心的硬件之一，是保证药品无菌生产

的关键硬件。

洁净厂房与空调净化系统验证的主要项目包括风速、风量测定，压差测定，

高效过滤器检漏，甲醛消毒效果确认，悬浮粒子、沉降菌、浮游菌检测。

４．１．１风速、风量测定

洁净厂房与空调净化系统风速、风量的测定包括空调系统风量的测量和高

效过滤器风速风量的测定。

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（１）空调净化系统风量的测定¨¨

ＨＶＡＣ系统风量的测定主要包括测定总送风量、回风量和排风量，根据公式

Ｌ＝Ｖ，ｍ２＊３６００（其中Ｌ代表风量、Ｖ代表风速、ｍ２风管截面积）换算各个系统的送

风风量、回风量和排风量，与设计风量进行对比，如达不到设计要求，则应调

整新风阀、回风阀、排风阀开度或送风机、排风机的电机频率。

测定仪器使用ＡＤＭ一８７０Ｃ多功能空气参数测量仪。测定结果见下表：

表４—１空调净化系统风量检测汇总表示例

送风口同风口排风口

正压泄

空调机编号

设计风测试风设计风测试风设计风测试风

露

量量量里量鱼

ｍ３／ｈ

ｍ３／ｈｍ３／ｈｍ３／｝ｌｍ３／ｈｍ３／ｈｍ３／ｈ

ＡＨＵ一１（Ｂ级空调）５１９２３５２４２ｌ２４１７９２４９５１２５０９３２４８１０２６６０

ＡＨＵ－４（Ｃ２级空调）１７８１９１８３４６１４０６２１４７１１２４１９２２９７１３３８

ＡＨＵ一５（Ｃ１级空调）２０１８０２１３４０５２０６５３１８１３５６０１４６０８１００１

结论：本空调系统的实际风量大于设计要求，能够满足净化厂房的需要，

符合要求。

（２）高效过滤器风速风量的测定

对洁净厂房各房问高效过滤器送风的送风量进行测定，并计算各房间的换

气次数。直接将风量罩套住风口读数得该风口风量，各房间所有高效送风量总

和除以房间体积即得各房间的换气次数。

测定仪器使用ＡＤＭ一８７０Ｃ多功能空气参数测量仪。测定如果示例如下：

表４—２洁净厂房各房间送风量及换气次数汇总表示例

设计要求实际

房间体吊

序

房问名称积ｍ

换气

号

次数

风速风量

效

高效尺寸

风量

换气

ｍ／ｓＣＨ．ｍ／ｈ编ＣＵ．ｍ／ｈ次数

ｎ。／ｈ

号

０．４５Ｂ２０１２２０＊６１０７６４

０．４５Ｂ２１１２２０＊６１０７７ｌ

０．４５Ｂ２２１２２０＊６１０７５４

１５分装间９６．９４５—６５０．４５５．３４２Ｂ２３１２２０＊６１０７６２５５

０．４５Ｂ２４１２２０＊６１０７７４

０．４５Ｂ２５

１２２０＊６１０７５９

０．４５Ｂ２６

１２２０＊６１０７６４

结论：各高效的送风量满足设计要求，房问的换气次数符合要求。

４．１．２压差测定

根据ＧＭＰ要求，洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之问的压差应当

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不低于１０帕斯卡。必要时，相同洁净度级别的不同功能区域（操作问）之间应

当保持适当的压差梯度。

根据洁净区设计要求，对各房间压差进行调整。调整压差时应遵循先高级

别洁净区再低别洁净区、先高风压区再低风压区、相对固定送风阀调整回风阀

的原则调整各房间的相对压差，形成压差梯度。测定结果示例如下表：

表４－３洁净区和房间压差检测汇总表示例

压差计编号相对房间名称和压差标准（Ｐａ）检测值（Ｐａ）

Ｂ．１５示数气闸室一内走廊＞５８

Ｂ．１６示数内走廊一分装间＞５７

Ｂ．１７示数分装间一外包间＞２０２２

Ｂ－１８示数分装间一外走廊＞３５３８

结论：各房间相对压差符合设计要求。

４．１．３高效过滤器检漏

各高效过滤器的送风风速及各级别洁净区的压差调整符合要求后，对每个

高效过滤器进行检漏。高效过滤器的检漏方法是使用ＴＤＡ－２Ｈ过滤器检漏仪一光

度计进行检漏。在高效过滤器的进风侧（上游）引入ＰＡ０气溶胶，然后用光度

计的扫描探头以０．０５ｍ／ｓ的扫描速度进行扫描，扫描探头离高效过滤器断面约

２．５４ｃｍ，扫描位置：高效过滤器与静压箱的密封面、高效过滤器的边框，高效过

滤器送风面。光度计上显示数据不大于Ｏ．０１％（过滤级为Ｈ１４的高效高滤器的泄

漏标准）时说明合格［１４１若大于Ｏ．０１％时声光报警，说明此过滤器有漏点。检漏

结果示例如下表：

表４—４高效过滤器检漏汇总表示例

泄漏率（％）

序号

房间名称高效编号高效尺寸结论

密封面边框送风面

１２三合一控制室Ｂ１４６１０＊３０５０．００４０．００３０．００２合格

高效过滤器检漏结论：各高效过滤器检漏结果符合要求。

４．１．４甲醛消毒效果确认

非最终灭菌洁净区由非无菌状态到无菌状态的消毒，目前最环保的方式是

采用过氧化氢消毒，但过滤氧化氢发生器价格高昂，对彩钢板、设备及密封等

材质的要求较高，一般的洁净区还是采用传统的消毒方式，即用甲醛进行消毒。

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甲醛的用量¨硝为ｌＯｍｌ／ｍ３：Ｉ＝３（其中３为安全系数），然后根据拟消毒的洁净区

体积，计算出该洁净区消毒所需要的甲醛总量。为利于甲醛挥发，在通入甲醛

前，洁净区内的温度应保持在３５—４０。Ｃ。闷消８小时，热排１２小时后，进入

正常送风状态，检查各房间压差符合设定要求。在通入甲醛前，选择Ｂ区有代

表性的房问（三合一问、结晶问、内走廊、分装问、准备问）用含菌量为

５．０．１０乙５．０．１０６的枯草芽孢杆菌黑色变种菌片（ＡＴＣＣ９３７２）对消毒效果进行挑

Ｊ＿一

战性试验，菌片放置位置及数量为√爿，其中Ａ为房间面积。排风结束后，将已

消毒的菌片放入枯黑芽孢培养液中，在３７。Ｃ下培养１６８小时，观察培养结果，

均未见有细菌生长，表明本次消毒符合要求。

４．１．５验证结论

洁净厂房及空调净化系统经风速风量测定、压差测定、高效过滤器检漏、

甲醛消毒效果确认，证明本洁净厂房能够满足无菌药品的生产需要，可用于无

菌药品的Ｊ下常生产。

４．２灭菌／除菌工艺的可靠性验证

灭菌是指杀灭一切活的微生物；灭菌方法是指应用物理和化学等方法杀灭

或除去一切存活的微生物繁殖体或芽孢，使之达到无菌的方法。

在无菌药品的生产中，防止微生物污染是药品生产企业关注的重点，根据

不同的被灭菌对象，应选择适宜的灭菌工艺。

本文就湿热灭菌的验证、十热灭菌的验证和过滤除菌的验证作初步探讨。

４．２．１湿热灭菌工艺的可靠性验证

湿热灭菌的原理是使微生物的蛋白质及核酸变性导致其死亡。常见湿热灭

菌程序包括脉动真空灭菌程序（或称织物程序）、蒸汽一空气混合物灭菌程序（或

称液体程序）和过热水灭菌程序。本文就脉动真空灭菌程序的验证作简述说明。

【１６】

（１）肋试验

ＢＤ试验的目的是验证湿热灭菌柜空气排除的效果。将ＢＤ试验包放在湿热

灭菌柜内，将写有“ＴＨＩＳＳＩＤＥＵＰ”的一面朝上放置。在空载状态下，选择ＢＤ

实验程序，设置参数为脉动三次，灭菌温度为１２１．０℃，灭菌时问为６００秒，

干燥时间０秒，内压限度１１５Ｋｐａ。选择程序运行中ＢＤ按钮，进行ＢＤ实验。实

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验结束后，将ＢＤ试验包取出后打开，查看ＢＤ试验包中的指示卡，若指示卡呈

现均匀变色，说明灭菌器内的空气成功排除。

图４—１ＢＤ试验包一试验前指示卡样本

图４２ＢＤ试验包一试验后指示卡样本

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（２）气密性试验

气密性试验的目的是验证湿热灭菌柜的密封效果。设定湿热柜保压程序参

数：保压限度一９０Ｋｐａ，时间９００ｓ，泄露限度２Ｋｐａ。启动保压程序进行保压测试，

不应超出１．３ｋＰａ／ｌＯｍｉｎ。气密性试验为设备自身程序运行和判断。

（３）

空载热分布测试

空载热分布的目的是确认灭菌室内的温度均匀性，测定灭菌室内不同位置

的温差状况，确定可能存在的最冷点。

空载运行状态下连续运行三次，找出灭菌柜内最冷点，证明脉动真空灭菌柜

腔内各点（包括最冷点）的温度在每次灭菌的过程中与指定灭菌温度温差应不

大于１℃。

在灭菌器腔室内按规定位置安放温度记录仪的１６支经过校正的标准热电

阻探头，连接好温场巡检仪，温场探头应均匀分布在灭菌器腔室内且不接触腔

壁，其中灭菌器的进汽口、排汽口（温度控制点）处必须放置温度探头，其他探

头均匀排布。三次空载热分布数据汇总见下表：

表４—５三次空载热分布数据汇总表

运行次数最冷点

最冷点温度

平均温度温差最冷点Ｆｏ值平均Ｆｏ值

第一次１６号传感器１２１３７℃１２１．６９℃一０．３２℃４５．７９４９３０

第二次１６号传感器１２１．６８℃１２１．９５℃一０．２７℃４０．４０４３．４８

第三次１６号传感器１２１．６５℃１２１．９５℃一０３０℃４０．６２４４．１６

经三次空载热分布，灭菌柜内各点的平均温度与保温期问平均温度在灭菌

过程中差值的绝对值均小于ｌ℃，最冷点为蒸汽冷凝水排放点。

（４）满载热分布和热穿透性试验

脉动真空灭菌器达到日常工作最大装载量。取６套无菌内衣和６套无菌外

衣，分别在其内部放入一个温控探头，位置见下图的脉动真空灭菌器的最大装

量摆放图，另外在灭菌器的进汽口、排汽口（温度控制点）和最冷点处放置温度

探头，另一探头任意放置，满载运行三次，证明最大负载下，热穿透试验的结

果达到最冷点灭菌物品的暴漏时间为１２１．０℃＞１２ｍｉｎ，即Ｆ。＞１２。三次满载热

分布数据汇总见下表：

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表４—６三次满载热分布数据汇总表

最冷点Ｆｏ

运行次数

最冷点

最冷点温度平均温度

温差

平均Ｆｏ值

值

第一次１６号传感器１２１．３７℃１２１．６９℃．Ｏ－３２℃４５．７９４９．３０

第二次１６号传感器１２１．５２℃１２１．８８℃．Ｏ．３６℃４５．５１

４９．６６

第三次

１６号传感器１２１．４５℃１２１．７６℃．０．３１℃４５．５２４９．６０

经三次满载热分布，灭菌柜内在满载状态下，蒸汽能够穿透被灭菌物品内

部，被灭菌物品内部一最冷点温度与平均温度的差值小于１℃。

（５）微生物挑战试验

热穿透数据只能确认温度，不能确认真实杀灭微生物的能力，微生物挑战

试验可以证明在满载情况下，灭菌柜内的各位置具有同样的杀灭效率。通常情

况下微生物挑战试验和热穿透试验同时进行。

用已经过Ｄ值复核和含菌量复核的非致病性嗜热脂肪芽孢（ＡＴＣＣ７９５３），含

菌量１．６５×１０６ｃｆｕ／支。将生物指示剂和被灭菌物品一起放置在灭菌柜内，在

灭菌柜内的上、中、下各设一点，另在蒸汽进口处、排汽口（温度控制点）、灭

菌柜的“冷点”区各设一点（共６点），进行灭菌操作，温度设定１２１℃，灭菌

时间设定３０分钟。且所有生物指示剂与测温探头的放置的位置要有对应的编号

标记。运行结束后，将经灭菌的生物指示剂取出，置于５６～６０＂Ｃ培养４８小时，

另取一支未经过灭菌的生物指示剂同时进行培养，作为阳性对照。根据颜色变

化情况判断灭菌效果，培养后全部生物指示剂保持紫色为灭菌合格。若生物指

示剂由紫色变为黄色则判为灭菌不合格，对照指示剂由紫色变黄色为该指示剂

有效。

表４－７热穿透数据汇总表

运行次

１（上）２（中）３（下）

４（进５（排６（控７（冷

８对照

数汽）汽）制）点）

第一次＋

第二次＋

第三次＋

注：“．”为无菌生长，“＋”为有菌生长。

三次微生物挑战的菌片在培养４８小时后均保持紫色，对照菌片由紫色变为

黄色，微生物挑战合格。

（６）验证结论

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湿热灭菌柜经ＢＤ试验、气密性试验、三次空载热分布、三次满载热分布和

热穿透、微生物挑战，证明该湿热灭菌柜能够满足灭菌的要求，能够用于无菌

原料药生产中需要湿热灭菌的物品的灭菌。

４．２．２干热灭菌工艺的可靠性验证

干热灭菌是利用高温使微生物或脱氧核糖核酸酶等生物高分子产生非特异

性氧化而杀灭微生物的方法。干热灭菌适用于耐高温物品的灭菌，如玻璃、金

属设备、器具等；同时干热也可用于除热原。ｎ７１

（１）高效过滤器完整性测试

干热灭菌器出风系统必须保证符合Ａ级洁净空气的标准，其高效过滤器应

进行完整性检测，其检测方法与空调净化系统的高效过滤器一样，均是采用ＰＡＯ

测试。即在在高效过滤器的进风侧（上游侧）引入ＰＡＯ气溶胶，使用经校验合

格并在校验有效期内的ＴＤＡ一２ｔｔ过滤器检漏仪一光度计进行检漏，用光度计的扫

描探头以约０．０５ｍ／ｓ的扫描速度呈Ｓ型进行扫描，扫描探头离高效过滤器表面

约２ｃｍ。扫描位置为高效过滤器密封面、高效过滤器边框及送风面。扫描方法

采用缓慢步进重叠法。光度计上显示数据不大于０．０１（过滤级为Ｈ１４的高效高

滤器的泄漏标准）时说明合格，若大于０．０１时声光报警，说明此处有漏点。更

换过滤器或进行堵漏，堵漏时一定要使用同耐高温高效过滤器的边框同质量的

耐高温密封胶，堵漏后需凝固半小时以上再启动灭菌柜的风机，然后重新进行

检漏。干热灭菌柜高效过滤器检漏结果见下表：

表４—８干热灭菌柜高效过滤器检漏结果汇总表

泄漏率（％）

高效位置结论

密封面边框送风面

进风高效过滤器ｏ．００４ｏ．００３０．００２合格

排风高效过滤器０．００６０．００５０．００２合格

高温高效过滤器０．００５０．００５０．００３合格

经对干热灭菌柜进风高效过滤器、排风高效过滤器、高温高效过滤器的完

整性进行检测，其泄漏率均小于０．０１％，满足高效过滤器过滤级别为Ｈ１４的过

滤效率≥９９．９９９６的要求。

（２）悬浮粒子测试

干热灭菌器的高效过滤器经检漏符合要求后，使用悬浮粒子计数器对灭菌

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器内腔体进行悬浮粒子测试，测试标准为动态百级，检测时，将悬浮粒子采样

头通过采样口放入干热灭菌柜内部，前后门均关闭，手动启动循环风机，自净

３０ｍｉｎ后，连续采样三次，每次采样采样量ｌｍ３，检测结果见下表：

表４—９干热灭菌柜腔内洁净度检测结果汇总表

检测结果

检测次数检测标准结论

０．５ｕｒｎ５．Ｏｕｍ

第一次

≥Ｏ．５ｕｍ粒子≤３５２０个／１０３Ｏ合格

第二次

ｍ３；≥５．Ｏｕｍ粒子≤２０，９５Ｏ合格

第二次ｍ３１２２Ｏ合格

注：干热灭菌柜腔体内悬浮粒子检测是在常温下。

经过于热灭菌柜腔体内的悬浮粒子进和查测，三次检测结果均能满足动态

百级的要求。

（３）空载热分布测试

在干热灭菌柜腔室内按规定位置安放温场巡检仪的１２支经过校正的标准

热电阻探头，连接好温场巡检仪，温度探头应均匀分布在灭菌柜腔室内且不接

触腔壁，其中灭菌柜的送风口、排风口、温度控制点处必须放置温场巡检仪探

头，其他探头均匀排布，温场巡检仪探头分布图见下图。灭菌温度定为１８５℃，

时间为３０ｍｉｎ，连续运行三次以检查其重现性：合格标准为各点的温度在每次灭

菌的过程中差值不大于５℃。三次空载热分布数据汇总见下表：

表４—９干热灭菌柜三次空载热分布验证数据汇总表

运行次数最冷点最冷点温度温差最冷点ＦＨ值平均ＦＨ值

第一次２．Ｄ．ｆ１８４．６７℃２．２２℃２０５．４０２７７．７７

第二次２．Ｄ．ｆ１８５．１９℃２．１１℃２１５．６９２８７．２０

第三次２．Ｄ．ｆ１８５．３ｌ℃

２．１７℃２２１．１０２９８。６４

空载状态下连续运行三次，干热灭菌柜腔内各点（包括最冷点）的温度在

每次灭菌的过程中差值≤±５℃。空热分布验证合格。

（４）满载热分布

采用最大负载情况下的热分布试验来研究干热灭菌柜内物品的装载情况对

热分布的影响，用于进行满载热分布试验的热电偶分布时应防止与固体表面接

触，以测定空气热分布的状况。

最大装量下，满载运行三次，证明干热灭菌柜腔内各点（包括最冷点）的

温度在每次灭菌的过程中差值≤±５℃。控温功能良好，ＦＨ符合ＧＭＰ要求。

ａ在灭菌柜腔室内按最大装载量，按规定位置安放温度记录仪的１２支经

４０

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过校正的标准热电阻探头放入铝瓶内部，连接好温度验证仪，其中灭菌柜的送

风口、排风口、温度控制点处必须放置温度探头，其他探头均匀排布，温度探

头分布图见上图。

ｂ接通验证仪电源灭菌温度定为１８５。Ｃ，时间为１５０分钟，然后进行操作。

Ｃ连续运行三次以检查其重现性：满载运行状态下连续三次试验证明干热

灭菌柜腔内各点的温度在每次灭菌的过程中差值≤±５℃。灭菌结束后，打印验

证结果，填写运行记录。

表４一１０干热灭菌柜三次满载热分布验证数据汇总表

运行次数最冷点最冷点温度温差最冷点ＦＨ值平均ＦＨ值

第一次３．Ａ．Ｅ１８３．０４℃２．０２℃８８０．２４９８５．５５

第二次３．Ａ．Ｅ１８４．１２℃Ｏ．２４℃９７４．３４１０５３

第三次３—Ａ．Ｅ１８５．３ｌ℃２．１７℃８７７．５７９７４．４１

满载状态下连续运行三次，干热灭菌柜腔内各点（包括最冷点）的温度在

每次灭菌的过程中差值≤±５。Ｃ。控温功能良好，Ｆ。符合ＧＭＰ要求。满载热分布

验证合格。

（５）微生物挑战试验

将经菌落数量复核的枯草杆菌黑色变种芽胞（ＡＴＣＣ９３７２）菌片，分别置于

干热灭菌柜上、中、下各一片，另在进风口处、腔内最冷点、灭菌柜温度控制

探头旁各放一片，在满载的条件下，经灭菌后，取出菌片投入５ｍｌ营养肉汤培

养基中，３７℃条件下培养１６８小时，并设置一支未经消毒的菌片作阳性对照，

一支未放菌片的培养基作为阴性对照。培养结果汇总见下表：

４—１０干热灭菌柜微生物挑战检测结果汇总表

运行次

上中下送风处控制点最冷点

阴性对阳性对

数昭昭

第一次＋

第二次＋

第三次＋

注：“．”为无菌生Ｋ，“＋”为有菌生长。

经三次微生物挑战试验，干热灭菌柜内各点放置的枯草杆菌黑色变种芽孢

均程阴性，阴性对照程阴性，阳性对照程阳性，说明千热灭菌柜灭菌功能符合

要求。

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（６）细菌内毒素挑战试验

干热灭菌柜除了可以对耐高温的物体进行干热灭菌外，还可以进行去除物

体附带的细菌内毒素。当进行细菌内毒素去除验证时，根据ＦＨ值计算公式：

Ｒ＝ｔ半１０（ｎ—Ｉ）圮，其中ｔ为灭菌时间，Ｔ。为运行温度，Ｔ。一般选１７０，干热灭

菌柜用于灭菌时，ｚ值选２０，干热灭菌柜用于除热原时，ｚ值选５４。

将细菌内毒素标准品（单位１０００ＥＵ）置于灭菌柜内的“冷点”，按设定温

度和时间运行。结束后将该灭菌的细菌内毒素标准由Ｑｃ进行检测，检测结果见

下表：

４－ｉ１干热灭菌柜细菌内毒素挑战检测结果汇总表

运行

次数

阴性对照阳性对照供试品阳性对照供试品结论

第一次＋

＋＋＋合格

第二次＋

＋

‘

＋合格

第三次＋＋＋

＋合格

备注：“一”为细菌内毒素检测结果为阴性；“＋”为细菌内毒素检测结果为阳性

检测结果小于１ＥＵ，则说明细菌内毒素灭活符合要求，由公司

％＝ｒ木ｌＯ‘五一正’心可得，制药企业在完全由干热灭菌柜除热原时，选择的温度和

时间应高于用于灭菌时的温度和时间。

对于非最终灭菌的无菌原料药生产企业，其需要去除细菌内毒素的工序有

粗品溶解和铝瓶传递。在粗品溶解工序是通过活性炭的吸除来去除的。在铝瓶

由非洁净区传递进入Ａ／Ｂ区用于包装时，首先是清洗，对于在低于２００℃以下

运行的干热灭菌柜，铝瓶所含细菌内毒素的去除主要是通过注射用水的洗涤去

除的。

（７）验证结论

干热灭菌柜经高效过滤器完整性测试、悬浮粒子测试、三次空载热分布、

三次满载热分布和热穿透、微生物挑战和细菌内毒素挑战，证明该干热灭菌柜

能够满足灭菌和除热源的要求，能够用于无菌原料药生产中需要干热灭菌的物

品的灭菌。

４．２．３除菌过滤工艺验证ｎ盯

除菌过滤是指除去流体中微生物的工艺过程，无菌药品生产中采用的除菌

４２

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过滤器的孔径一般不超过０．２２ｕｍ（或者０．２ｕｍ，这两种标称没有区别）。因除菌

过滤器缺乏统一的标准，孔径的标称对预测微生物截留没有实际的意义，且不

同产品因其组分不同，对不同过滤器的孔径及过滤器材质的影响不同。因而，

需要用微生物截留能力来定义除菌过滤器。通常，除菌过滤器是指在工艺条件

下对缺陷假单胞菌（ＡＴＣＣ１９１４６）的截留能力不低于１０７ＣＦＵ／ｃｍ２的过滤器。因

此，针对不同产品的实际工艺条件，应分别进行除菌过滤的工艺验证，以保证

无菌产品的无菌性。

灭菌级膜式过滤器通常被用于去除药物和溶液中的细菌和颗粒物。已被证

实测试液体对细菌细胞的尺寸大小有很大影响。因为膜式过滤器是根据体积排

阻的原理来阻止细菌通过，任何由于组成成分、渗透压或离子强度的限制作用

导致细胞尺寸的改变都会影响滤膜截留细菌的能力

（１）无菌过滤面临的最差工艺条件

根据无菌过滤器拟过滤的产品的实际工艺条件，在风险分析的基础上，制

定无菌过滤面临的最差工艺条件。

４—１２无菌过滤最差工艺条件汇总表

参数单位最差Ｊ二艺条件值

流速Ｌ／ｒａｉｎ

３０

ｐＨ值４．Ｏ

化学接触

小时２

灭菌次１５

批次人小Ｌ１２００

接触／ＤＤｌ：时间小时２

灭菌压力

Ｍｐａ

Ｏ．１４

灭菌温度℃１２５

Ｉ：作压力ＭＰａＯ．３

Ｉ．作温度℃≤３０℃

（２）细菌存活性

非杀菌（Ｎｏｎ—ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ）：与料液接触工艺时问后，细菌ｌｏｇＴｒ＜ｌ（死

亡率＜９０％）

山东大学硕士学位论文

杀菌（Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ）：与料液接触６０ｍｉｎ内，细菌ｌｏｇＴｒ＞ｌ（死亡率＞９０％）

中度杀菌（Ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ

Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ）：与料液接触６０ｍｉｎ内，细菌

ｌｏｇＴｒ＜ｌ（死亡率＜９０％），同时与料液接触工艺时间后，细菌ｌｏｇＴｒ＞ｌ（死亡

率＞９０％）

图４—３药物溶液对挑战细菌活性决策树

在进行任何细菌挑战测试之前，必须对细菌进行活力研究，以保证药物溶

液对挑战微生物缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）没有不利影响。

从ＴＳＡ平板上挑取缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ

１９１４６）单菌落，然后在无菌环境

下转接到２０ｍＬ无菌ＴＳＢ培养基中，ＴＳＢ培养基在３０±２。Ｃ静止培养２４±４

小时。将２ｍＬ缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ

１９１４６）发酵培养液转接到ｌＯＯｍＬＳＬＢ培

养基中，ＳＬＢ培养基在３０±２’Ｃ静止培养２４±２小时。

取２ｍＬ缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）／ＳＬＢ菌悬液接种至ｌＯＯｍＬ药品溶

液中，另取２ｍＬ该菌悬液接种至ｌＯＯｍＬ０．８５％盐溶液中，作为对照组。标准的

接触时间为６０分钟，其为进行细菌挑战测试时微生物需维持活力的时间。

在３个不同时间点（０，１５和３０分钟），分别取ｌｍＬ接种后的药品溶液进行

稀释平板计数（ＤＰＣ）试验。

用０．８５％无菌盐溶液替代药品溶液重复步骤，作为对照试验。

培养２天后，分别对实验组和对照组进行菌落计数，其数目（重复试验取

平均值）均在３０—３００范围内。样品液与对照组相比，该平均值的减少高于卜ｌｏｇ，

说明缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）在药品溶液中无活力，不能用药品溶液进行

细菌挑战试验，需选择０．８５％盐溶液作为替代测试溶液。

（３）细菌截留试验ｎ盯

４４

山东大学硕士学位论文

取１０英寸０．２ｕｍ聚四氟乙烯过滤器（Ｐ，Ｉ’ＦＥ）和１０英寸０．４５ｕｍ聚四氟乙烯

过滤器，按生产工艺条件要求时行联接，按最差工艺条件运行，１２１℃，３０分

钟纯蒸汽灭菌后备用。咖１

因挑战细菌在药品溶液中不存活，因此选用０．８５％ＮａＣｌ溶液进行挑战测试，

从而证实其处理条件并没有改变过滤器除菌过滤的能力。选用０．８５％ＮａＣＩ溶液

进行挑战测试的原因为：不建议改变样品溶液，对液体组份作任何的添加或去除

都会改变液体的物理参数因而不具有代表性：没有确定一个作用或功能相当的

可供选择的溶液；根据ＡＳＴＭＦ８３８—０５要求Ｏ．８５％无菌ＮａＣＩ盐溶液被选定为挑

战测试最合适的溶液。乜ｎ

细菌挑战过滤器的阳性对照：滤膜／过滤器的某些区域或点若不能对细菌完

全截留都能通过挑战测试检测到，需采用０．４５１ｍ膜片进行阳性对照。对膜片

进行细菌悬浮液挑战测试，任何通过膜片的细菌都是可以计量的。通过检测挑

战微生物对０．４５９ｍ膜片的穿透作用（在下游０．２９ｍ试验膜片上生长）来指示

细菌细胞尺寸足以用于检测滤膜中过大的孔径。该实验能在缺陷假单孢杆菌最

低生长条件下进行。ｎ２’

取ＩＯＯｍ］悬浮液样品，经０．４５¨ｍ预除菌膜片过滤。将滤出液流经另一０．２ｐ，ｍ

膜片。将这两种膜片置于９０ｍｍＴＳＡ平板中。３００Ｃ±２。Ｃ培养２天并计数。

培养结果表明，缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）能够通过０．４５ｕｍ的滤膜，但

不能透过０．２２ｕｍ的无菌滤膜。

①工艺系统最大生物负荷量＝最大过滤料液体积（ｍ１）＊ＩＯＯＣＦＵ／ｍＩ＊安全

系数（１０００）

②无菌过滤器最少应使用的挑战用的缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）≥无

菌过滤器的过滤面积（ｃｍ２）＊１０７ＣＦＵ／ｃｍ２

缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）的用量为①②中的最大量；

缺陷假单孢杆菌（ＡＴＣＣ１９１４６）的体积

＝缺陷假单陷假单（ＡＴＣＣ１９１４６）的用量／茵液浓液

根据最差工艺条件，本验证的工艺系统最大生物负荷量：

－１２００（Ｌ）＊１０００（ｍｌ／Ｌ）木１００ＣＦＵ／ｍ１木１０００＝１．２．１０“ＣＦＵ

材质为ＰＴＦＥ的无菌过滤器的过滤面积为０．６３ｍ２／１０英寸，即６．３．１０３ｃｍ２／１０

英寸，材质为ＰＴＦＥ的１０英寸无菌过滤器的最小挑战菌落

４５

山东大学硕士学位论文

＝６．３＂１０３ａｍ２，１０７＝６．３．１０‘ｏ

根据上述计算结果本次最小挑战用缺陷假单孢菌最少为１．２．１０”ＣＦＵ，将含

菌量为５．１０７／ｍｌ的０．８５％ＮａＣｌ盐溶液２．４．１０３ｍｌ对已经过最恶劣工艺条件运行，

已灭菌并通过完整性检测的无菌过滤器进行细菌挑战，过滤液全量接种ＴＳＢ培

养基，取未接种的ＴＳＢ培养基进行阴性对照，取未过滤的缺孢假单孢杆菌进行

阳性对照，取通过０．４５ｕｍ过滤器但未通过０．２２ｕｍ过滤器的菌液进行细菌通过

阳性对照。以上试验复重三次，检测结果见下表：

表４—１３细菌截留试验检测结果汇总表

过滤器材质：ＰＴＦＥ过滤器：１０英寸

挑战菌液浓度：５＊１０７ＣＦＵ／ｍ１

细菌

验证挑战体总挑战菌下降阴性阳性通过

无菌结果结论

次数积（ｍ１）（ｃｆｕ）Ｌｏｇ值对照对照阳性

对照

第一

３．０．１０３１．５．１０１１１１．１７＋上通过

次

第二

３．２．１０３２．２４．１０１１１１．３５＋

＋通过

挑战

次合格

第三

２．８．１０３１．４．１０“１１．１５＋＋通过

次

说明：“＋”表示有菌生长，“一”表示无菌生长。

阴性对照显示所有测试的过滤器在７天培养后系统仍为无菌；

过滤器都挑战过了最少１．２．１０“ｃｆｕ微生物；

使用Ｏ．４５微米和０．２微米过滤器做的阳性对照有效；

三次试验用过滤器都完全阻隔住了挑战的微生物。

结论：测试结果显示每套过滤器都完全阻隔住了挑战菌缺陷短波单胞菌，

所有对照样品呈阳性，说明本细菌挑战通过。

（４）化学兼容性

化学兼溶性是用工艺条件下的完整性来证明。模拟最恶劣工艺条件下运行

的三支１０英寸０．２ｕｍ聚四氟乙烯过滤器（ＰＴＦＥ）无菌液体过滤器，用无水乙醇

充分润湿，分别测试其完整性，检测结果见下表：

表４一１４无菌过滤器完整性检测结果汇总表

充分的最大扩散过滤器１过滤器２过滤器３

流（ｍｌ／ｍｉｎ）（ｍｌ／ｍｉｎ）（ｍｌ／ｍｉｎ）（ｍｌ／ｍｉｎ）

结论

９９．１１３．０９１５．１２１３．９９通过

试验结论：在最恶劣条件下运行后，三支无菌过滤器的完整性是良好的，

４５

山东大学硕士学位论文

说明该药品与聚四氟乙烯过滤器（ＰＴＦＥ）具有化学兼容性，该材质过滤器可用

于该药品的无菌生产。完整性检测报告单附后。

．乞＝：－、．逦多ＰａｌＩｔｒｏｎｉｃＦｌｏｗｓｔａｒＩｖ滁潴果

日期

页码

货号

序列号

功能

测试程序

操作员

过滤器型号

过澹器数量

过滤器序列号

润湿液体

测试气体

测试压力

测试时间

最大流量

：２５／Ｍａｙ／２０Ｊ．３

：第ｉ页．共１页

：ＦＦ￥０４Ｂ

：１５０５１９４４，１．０ｆ

：前进流

：鲡Ｄ

’－－．．／

：２３

：ＺＣＭＴｌ．０２０Ｃ－ＰＰ

：ｌ

：Ｙｉｃｈｕｎ

：Ｎ２

：５０７ｍｂａｒ

：６００ｓ（Ａｕｔｏ）

：９９．１ｍｌ／ｍｉｎ

结果

实测流量

实测时问

测试完成时间

：通过

流量在限度内

：１３．０９ｍＶｍｌｎ

：１２０ｓ

：２５／Ｍａｙ／２０１３

１２：０９：１３

注释

１．签名

４７

山东大学硕士学位论文

一乞：●、

ｌ—。－、㈣ＰａｌｌｔｒｏｎｉｃＦｌｏｗｓｔａｒＩＶ潮式结果

日期

页码

货号

序列号

功能

测试程序

操作员

过滤器型号

过滤器数量

过滤器序列号

润湿液体

测试气体

测试压力

测试时间

最大流量

：２５／ＩＶｌａｙ／２０１

３

：第１页，共１页

：ＦＦＳ０４Ｂ

：１５０５１９４４，１．０ｆ

：前进流

：ｇ吾雨

■＿－－—＿，

：２３

：ＺＣＭＴｉ－０２０Ｃ－ＰＰ

：１

：Ｙｉｃｈｕｎ

：Ｎ２

：５０７ｍｂａｒ

：６００Ｓ（Ａｕｔｏ）

：９９．１ｍｌ／ｍｉｎ

结果

实测流量

实测时间

测试完成时问

：通过

流量在限度内

：１５．１２ｍｌ／ｍｉｎ

：１２０Ｓ

２５ｍｌａｙ／２０１３

１２：３９：１９

注释

１．签名

山东大学硕士学位论文

Ｚ￡、⑩ＰａＩＩｔｒｏｎｉｃＦｌｏｗｓｔａｒＩＶ测试结果

日期

：２５／Ｍａｙ／２０１３

页码

货号

序列号

功能

测试程序

操作员

过滤器型号

过滤器数量

过滤器序列号

润湿液体

测试气体

测试压力

测试时间

最大流量

：第ｉ页，共１页

：ＦＦＳ０４Ｂ

：１５０５１９４４／１．ｏｆ

：前进流：毓、－－．．－一，

：２３

：ＺＣＭＴｌ－０２０Ｃ－ＰＰ

：１

：Ｙｉｃｈｕｎ

：Ｎ２

：５０７ｍｂａｒ

６００ｓ（Ａｕｔｏ）

９９．１ｍｌ／ｍｌｎ

结果

：通过

流量在限度内

实测流量：１３．９９ｒｎｌ／ｍｉｎ

实测时间：１２０Ｓ

测试完成时间：２Ｓ／Ｍａｙ／２０１３１３：１２：２５

——————————————————————————————～．

一

注释：

●……●－＿●…●●……●●－●●●●－…●－●……………●●……．．

ｉ．签名：

’。－－●●●…●●－。‘。●●●●‘‘●●●●－●●●●●●●●●－●●●●－●－●…●●●●●●●＿●●●＿－

（５）溶出物

溶出物是用在最恶劣工艺条件下通过过滤器的药液和不通过过滤器的药液

进行红外比对。

模拟最恶劣工艺条件下，以最大工艺体积和最长工艺时问分别使用０．２２ｕｍ

无菌过滤器和不使用过滤器对头孢地嗪钠进行过滤，按正常工艺条件进行结晶、

抽滤、干燥，对通过无菌过滤和不通过无菌过滤的头孢地嗪钠样品进行红外分

山东大学硕士学位论文

析，相似度不得小于９８０。分别取三个批号的头孢地嗪钠按上述方法重复三次，

若三次红外分析的相似度均大于９８０，说明没有检出溶出物。检验结果见下表：

表４—１５红外相似度汇总表

序号批号相似度结果结论

１１３０５０１９９９合格

２１３０５０２９９８合格没有检出溶出物

３１３０５０３９９２合格

合格标准：相似度不小于９８０

试验结论：在最恶劣工艺条件下通过无菌过滤与未通过无菌过滤的头孢地

嗪钠相比，没有产品不可接受的溶出物，说明过滤器与产品是匹配的，该材质

过滤器可用于正常工艺的生产。检验报告单附后。

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４．３包装容器的密封性验证

无菌产品的容器密封系统应能防止微生物侵入。因无菌检查不足以说明产

品密封完整性，而应进行密封完整性验证。最理想、直接的方法是逐瓶测试容

器的密封完整性，但限于工业发展的现状，目前对无菌药品的逐瓶完整性测试

设备尚不普遍，因此制药行业基于容器密封系统验证的质量保证过程，以证明

成品的包装密封性。无菌原料药一般采用铝瓶包装，本文分别采用了压力挑战

法、亚加基蓝溶液法和微生物浸入法来验证铝瓶的包装密封性能［２３１０

４．３．１压力挑战法验证铝瓶包装密封性

压力挑战法试验的目的是检查密封后的包装容器在一定压力条件下的密封

效果。取３个容积为１５升的铝瓶，分别放入已干燥好的变色硅胶约ｌｋｇ，按照

操作规程加胶圈、轧盖，浸入放有水的罐内，上紧罐盖，开氮气加压０．１ｍＰａ

至０．１２Ｍｐａ，保压１２０分钟后取出，观察铝瓶是否变形、铝瓶内硅胶是否有变

色现象。

经试验后观察，试验用铝瓶未发生变形、铝瓶内硅胶无变色现象，说明铝

瓶经正常密封后能够耐受一定的压力。

４．３．２亚加基蓝溶液法验证铝瓶包装密封性

亚加基蓝溶液法试验的目的是检查密封后的包装容器在一定真空条件下的

密封效果。取３个容积为１５升的铝瓶，分别放入１０００ｍｌ０．１５％的亚加基蓝溶

液，按照操作规程加胶圈、轧盖，浸入放有水的罐内，上紧罐盖，抽真空至不

低于－０．０８ＭＰａ，保压１２０分钟后取出，观察铝瓶是否变形、罐内水是否有变蓝

色现象

经试验后观察，试验用铝瓶未发生变形、罐内水无变蓝色现象，说明铝瓶

经正常密封后能够耐受一定的真空条件。

４．３．３微生物浸入法验证铝瓶包装密封性¨们

微生物浸入法试验的目的检查在一定浓度挑战菌的条件下的包装容器的密

封效果。取５个容积为１５升的铝瓶（编号为①～⑤），分别放入湿热灭菌的促

生长能力符合要求的ＴＳＢ肉汤培养基约２０００ｍ１，按照操作规程加胶圈、轧盖，

③～⑤铝瓶瓶口朝下浸泡于浓度≥１０６ｃｆｕ／ｍｌ的黏质沙雷菌菌液中，持续浸泡

约４小时结束，从菌液中取出，除去外残留的菌液，然后用７５％酒精擦拭消毒

山东大学硕士学位论文

容器外表面。②号铝瓶为阴性对照样品。在Ａ级洁净环境下打开编号①的铝瓶，

将稀释的含有ｌＯ～ｌＯＯｃｆｕ黏质沙雷菌的ＴＳＢ肉汤培养基倒入，混匀，轧盖，

作为阳性对照样品。将编号①～⑤铝瓶（１５Ｌ）置于３０～３５。Ｃ培养箱培养１４天。

培养期过后，将包材外表面用７５％酒精擦拭消毒并检查样品细菌生长情况。合

格标准为以下两个条件：

条件‘：在培养１４天后，观察各铝瓶内养基中细菌的生长情况，编号为①

的阳性对照样品应有菌生产，编号为②～⑤的样品应显示均没有细菌的生长。

条件二：培养期后，取未长菌的样品，对培养基进行营养检查，均应有接

种菌生长。

４．３．４验证结果汇总

表４一１６包装密封性验证结果汇总表

验证项目合格标准验证结果验证结论

压力挑战法铝瓶内硅胶无变色现象铝瓶内硅胶无变色现象合格

亚加基蓝溶液法罐内水无变蓝色现象

罐内水无变蓝色现象

合格

阳性对照样品应有菌生①②③④⑤

长，阴性对照和测试样品

应显示均没有细菌的生Ｋ

＋

微生物浸入法

则为合格。

合格

取未长菌的样品，对培养

基进行营养检查，均应有＋

接种凶生长为合格。

备注“．”表示无菌生Ｋ，“＋”表示有菌生长

４．３．５验证结论

经压力挑战试验、亚加基蓝法挑战以及微生物挑战并通过，说明铝瓶的包

装密封性良好，可正常用于生产。

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４．４非最终灭菌无菌原料药的无菌工艺模拟验证

２０１０版ＧＭＰ无菌药品附录第四十七条规定“无菌生产工艺的验证应当包括

培养基模拟灌装试验”，ＦＤＡ无菌药品指南中也有类似要求：“为确保无菌产品

的无菌性，灭菌和无菌灌装工艺须经过充分验证”，“应采用培养基代替药品进

行无菌灌装对无菌工艺进行验证”。

对于非最终灭菌的无菌生产工艺，即使所有与产品相关的设备均应过了灭

菌和除菌，但当药品、包装容器、密封件在实际工艺条件下组合一起时，仍有

可能因各种原因导至产品被污染，从而使无菌性能得不到保证。“５１因此对于非

最终灭菌的无菌生产工艺，评估其无菌性能不能仅通过最终产品的无菌检验，

必须从工艺整体考虑，进行无菌工艺的验证。无菌工艺模拟试验就是采用微生

物培养基替代产品，对无菌生产工艺进行评估的验证技术。本文就无菌原料药

的无菌工艺模拟试验进行探讨。

无菌工艺的模拟试验是在无菌生产设施，包括洁净厂房和空调净化系统、

工艺用水系统、主要生产设备、无菌过滤系统验证合格后，在进行生产工艺验

证前进行的。使用培养基模拟无菌原料药无菌生产过程中的溶解、过滤、结晶、

干燥、分装、称量、密封包装过程，进行模拟无菌工艺和无菌操作，通过对模

拟无菌生产后的培养基进行无菌培养，确认无菌生产工艺、无菌操作规程、无

菌操作人员能够满足无菌产品生产的要求。

４．４．１培养基选择依据

因３％的大豆酪蛋白肉汤培养基（ＴＳＢ）适应广谱微生物生长，在常温条件

下具有较好的澄清度，较小的粘度，可过滤除菌，对模拟的无菌工艺微生物具

有促生长作用。因此一般选择ＴＳＢ培养基作为模拟灌装用的培养基。

４．４．２模拟介质的选择依据

根据被模拟产品的生产工艺，选择与该生产工艺接近的物料。通常情况下

选择培养基或／和安慰剂。对于选择的培养基应做促生长实验，证明所选用的培

养基促生长良好，对于选择的安慰剂应做抑菌试验，证明所选用的安慰剂无抑

菌性。对于选定的培养基或安慰剂在做促生长试验或抑菌性试验时应充分考虑

其浓度和溶解性，能够适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌，具有较好的澄

明度和较小的粘度，易于除菌过滤。除非在微生物试验中发现厌氧菌，否则一

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般情况下不选择使用厌氧培养基。

因大豆酪蛋白肉汤培养基具备对模拟的无菌工艺微生物生长不会产生抑制

作用，并能代表被模拟物料的物化状态和工艺操作要求；３％大豆酪蛋白肉汤培

养基有较好的澄清度，便于培养观察。

４．４．３无菌模拟试验风险分析¨盯

４一１７无菌模拟试验风险分析评估表

项目风险点模拟验证控制条什风险评估

模拟验证过程进入无菌室人数超

人员增多，风险大于正常生

人员出入

过规定的最大数量

产

人员疲劳

模拟验证中将分装操作安排在夜人员疲劳程度增大，无菌风

人员

班险大于正常生产

部分操作人员安排指定人员换班，验证对无菌的临时人员调动，风险大于正

临时调整影响常生产

无菌衣的微生使用前存放时间延长，无菌

物繁殖

无菌农灭菌２４小时后使用

风险人于正常生产

无菌过滤系统

无菌过滤器灭菌２４小时后使用

使用前存放时间延长，无菌

微生物繁殖风险大于正常生产

无菌设备微生结晶罐、三合一灭菌２４小时后使

使用前存放时间延长，无菌

设备

物繁殖用风险大于正常生产

模拟验证过程维修人员进洁净区增加维修工作的干扰，无菌

设备维修

操作风险大于正常生产

采用纯化水配制培养基，增加模拟便用里易梁园的堵乔量胥代

工艺用水、溶剂

过程微生物污染水平溶剂，更利于微生物生长

对模拟验证用的培养基进行使用确保培养基促生长能力合

培养基

前和使用后的促生产试验格，

助溶剂验证中采用纯化水模拟

避免助溶剂对微生物的影

物料

响，更利于微生物生长

工艺用气

验证中采用压缩空气替代氮气压空气代替氮气更利于微生物

滤的存活

便川史易梁豳的坩乔量瞀代

粗品

采用培养基模拟粗品溶解

粗品

无菌内包材的铝瓶、胶圈、内外盖灭菌２４小时使用前存放时间延长，无菌

微生物繁殖后使１｜｛』风险大于止常生产

通过对照各个品种无菌一艺，选择

工艺路线的复

。Ｉ：艺时间最长、ｌ：艺步骤最多、料确保无菌生产所有设备均进

杂程度

液体积最大的品种的【：艺进行模

行模拟验证

拟

料液的温度模拟料液不进行降温（升温）处理

采用常温控制，保证微生物

工艺

生长最佳条件

料液的酸碱度模拟料液不进行酸碱凋１，保证微生物生长最佳条件

避免Ｋ时间极限真空对微生

干燥真空控制模拟干燥过程不抽真空

物的破坏

模拟料液的细分装后将剩余的培养基经灭菌后培养基中的微生物均能被滤

菌培养并检测完整性合格的过滤器过滤芯截留，真实反应培养基的

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项目风险点模拟验证控制条件风险评估

后排放，取出滤芯进行培养微生物污染程度

洁净区的温湿验证过程中Ｂ区温湿度超出控制增加环境控制的干扰，风险

度范围各３０分钟大于正常生产

环境每批对洁净区进行沉降菌、设备表

监控并记录验证过程的环境浩净区环境监

面、擦拭菌的检测，每天进行悬浮

测洁净度，确保符合要求

粒子在线检测

４．４．４干扰因素

无菌工艺模拟试验应包括无菌过程中发生的一般活动，如设备调试、容器／

密封件传递，以加强这些活动在日常操作中的可接受性，非日常干扰也纳入到

工艺模拟中，模拟生产过程中产生的非计划的干扰，且有必要对液体泄露、设

备故障等进行纠正。从一定程度上说，这些在无菌工艺模拟试验过程中发生的

干扰及采取的纠正措施，可以认为在正常操作中是可以接受的。即当正常生产

时发生已经模拟过的干扰，是可以放行该批无菌产品的。瞄１

４－１８无菌模拟试验干扰因素评估表

分类具体事项模拟方法模拟目的

验证班组人员改变对产

人员换班指定两人换班

品无菌性的影响

按规定频次和时间进行沉验证环境监测对产品无

固有干扰环境监测

降菌监测菌性的影响

按规定频次和时间更换空验证更换空调新风口滤

更换空调新风口滤布

调新风口滤布布对产品无菌性的影响

在模拟干燥过程中停热水验证干燥过程中停热水

干燥时停热水

２小时对产品无菌性的影响

模拟灌装过程分别使Ｂ／Ｃ

区温度超限和相对湿度超

Ｂ／Ｃ区温湿度超限限

验证Ｂ／Ｃ区温湿度超限对

模拟灌装过程使Ｂ／Ｃ区温

产品无菌性的影响

度超限和相对湿度均超限

维修结晶罐电机结晶过程维修结晶罐电机

特殊干扰ｔ煤辽程维修二合一传感

维修三合一仪表

器

维修整粒机电机干燥过程维修整粒机电机

验证非接触物料部位的

结晶过程维修浊度计传感

维修对产品无菌性的影

维修浊度计传感器

响

器

维修ｐＨ计传感器

结晶过程维修ｐＨ计传感

器

维修灭菌冷凝水排放

灌装过程维修灭菌冷凝水

管上的温度压力传感排放管上的温度压力传感

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１分类具体事项

模拟方法

模拟目的

器器

４．４．５最差条件

采用“最差条件”的目的是对工艺、系统、设备在更高的挑战条件下进行

验证。如果在“最差条件”的挑战卜Ｊ，仍能够达到预期的可接受标准，那么在

正常条件下，对系统的可靠性将有更高的信心。无菌工艺模拟试验应进行“最

差条件”的挑战，最差条件一般是通过人为干扰取得的，如：使用最长时间间

隔的容量、设备、取样工具等；使用最大数量的人员；模拟员工最疲备时的操

作（夜班操作）；延长完成灭菌至开始过程模拟的时间，无菌设备或仪表出现的

故障等。

４一１９无菌模拟试验最差条件评估表

内包材灭菌超过内包材灭菌超过

２４小时２４小时再使用

无菌农灭菌超过无菌衣灭菌超过

验证２４小时的

２４小时２４小时再使用

灭菌效期内内包

过滤器、结品罐、过滤器、结晶罐、

材、无菌衣、设

三合一及分装系二合一及分装系

备的无菌性是有

统灭菌超过２４统灭菌超过２４

保障的

小时小时再使用

最若条件

进入Ｂ区的人员

数量超出规定的

验证在规定人员

安排ｊＦ洁净区人

人数

专门使进入人员

数量内对产品的

员模拟外来人员

进入Ｃ区的人员

数量超出规定人

无菌性是有保障

数餐超出规定的

数的进入程序进入

的

人数

将分装操作安排模拟主要操作受

夜班操作

在夜班操作人员精力的影响

４．４．６制定无菌原料药无菌生产工艺的模拟工艺

根据图２１非最终灭菌无菌原料药生产工艺流程图实际生产工艺，基于风

险分析和“最差条件”制定无菌工艺试验的模拟工艺流程（图）。

用纯化水替代无菌生产用的溶剂，按工艺量模拟使用，用大豆酪蛋白肉汤

培养基粉木替代粗品和活性炭，最终配制浓度为３％。

培养基经过滤系统进入结晶罐模拟结晶后转入三合一，模拟三合一干燥后，

通过自动分装系统，将定量的培养基分装至铝瓶。

５９

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进行模拟分装、取样、称量、压盖、密封；分装数量为不少于最大批量的

瓶数，剩余培养基通过无菌过滤器排至母液罐，并对无菌过滤器进行无菌培养。

６０

山东大学硕士学位论文

图４３无菌工艺模拟生产流程图

６ｌ

山东大学硕士学位论文

４．４．７无菌工艺模拟试验的批量

无菌工艺模拟试验的批量应最大程度地接近实际批量，当实际批量的容积

超过所用设备容积的７０％时，无菌工艺模拟试验的批量以实际批量的７０％进行折

算。当实际批量的容积过小时，如按实际批量灌装的培养基不足以覆盖所用包

装容器的所有表面时，无菌工艺模拟试验的批量应适当增大。

４．４．８无菌工艺模拟试验灌装容器的数量

无菌工艺模拟时灌装容器的数量不少于被模拟产品的实际包装量。

４．４．９无菌工艺模拟试验灌装容器的装量

无菌工艺模拟的装量应最大程度地接近实际装量，当实际装量的体积超过

所用容器的７０％时，无菌工艺模拟灌装的装量按７０％分装，当实际装量的体积较

小时，即当容器倒置或旋转时，容器中的培养基不足以与容器的所有表面接触

时，应适当增加灌装体积，当灌装容器倒置或旋转时，使培养基的数量足以覆

盖培养容器的所有内表面。灌装容器中的培养基数量应能够满足微生物的生长。

４．４．１０无菌工艺模拟试验的持续时间

在进行无菌工艺模拟时，每一工序应采用被模拟工艺的实际最长时间，在

这最长的时间内，对如换班、不同操作者以及日常生产中发生的事件进行模拟。

工艺模拟试验时间应充足，包含实际生产灌装操作中可能发生的干扰的代表性

数量。工艺模拟试验运行期间应确定实际时问。

４．４．１１人员

在参与无菌工艺模拟试验前，生产人员、过程监督人员、取样人员、生产

管理人员、电仪维修人员的资质已确认合格。人员应进行操作知识、微生物知

识、无菌生产操作的培训。所有参与工艺模拟试验的操作者和主管人的姓名都

将记录在每个批记录中。工艺模拟试验期间所有进入生产区域的人员（包含执

行环境监控人员在内）都必须正确着装。工艺模拟试验的员工数量不得小于正

常生产条件下该区域允许的最大员工数量。工艺模拟试验中，应把员工参与次

数以及相关事项记录在批生产记录里，包括进出次数等。操作者的操作任务应

与正常灌装实施期间的任务相同。

４．４．１２无菌模拟灌装的实施

根据已批准的无菌模拟灌装方案，生产单位起草模拟灌装ＳＯＰ和模拟批生

产记录并组织实施，在实施的过程中如实记录实施过程和发生产偏差，并形成

Ｒ９

山东人学硕士学位论文

无菌模拟灌装批生产记录。工艺时间及过程控制点见下表

表４－２０模拟工艺控制点汇总表

模拟生产控

模拟生产控制结果备注

工艺参数

制范围

第一批第二批第三批

投料温度

２０～２５℃２１．０℃２１．８℃

２２．０℃确保最佳培养温度

避免加碱影响培养基

溶解ｐＨ

未调节未调节未调节

培养条件

脱色时间２０分钟２０分钟２０分钟２０分钟为生产工艺最长时间

料液

超过２．５小时

２小时４０分

２小时４０

２小时４０

超过生产工艺料液过

模拟

钟

分钟分钟滤最长时间

过滤酸液超过１小时

１小时２０分１小时１０１小时１０超过生产工艺酸液过

时间

钟分钟分钟滤最长时间

超过生产工艺洗液过

洗液超过３０分钟６０分钟４５分钟５０分钟

滤最长时间

避免加酸影响培养基

结晶调ｐＨ

未调节未调节未调节

培养条件

结晶温度２０～２５℃２２．Ｏ℃２１．６℃２１．５℃确保最佳培养温度

养品温度２０～２５℃２２．Ｏ℃２１．７℃２１．８℃确保最佳培养温度

８小时２０分８小时１０９小时５超过生产工艺最长时

养品时问８小时以上

钟分钟分钟间

干燥时间２４小时２４小时２４小时２４小时为生产工艺最长时间

干燥温度２０～２５℃２１．２２℃２１．２４℃２２．２４℃确保最佳培养温度

避免高真空影响培养

真空度未调节未调节未调节

基培养条件

４．４．１３取样

在无菌模拟灌装的实施过程中，应在无菌过滤前对过滤介质进行取样并检

测微生物负荷。在包装后，应根据实际取样原则由取样人员模拟取样，并进行

同条件培养。

表４－２１过滤前微生物负荷检测结果汇总表

过滤系统名称

微生物负荷

料液过滤

灌装批号

洗液过滤ＣＦＵ／ｍｌ酸过滤ＣＦＵ／ｍｌ

ＣＦＵ／ｍｌ

第一批２６９２７４２８１

第一二批２５１

２１４

２９３

第三批２８９３０２３１０

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４．４．１４培养

在生产设备中培养的，在前七天的培养条件为２０－２５。Ｃ，在后七天的培养

条件为３０—３５＂Ｃ。将已灌装容器转移至微生物实验室进行培养的，将装灌装容

器旋转，使灌装容器的所有内表面与培养基充分接触，先在２０—２５。Ｃ培养至少７

天。在培养期末，转移至３０—３５。Ｃ的条件下培养至少７天。在培养过程中，第５

天将铝瓶倒置，第１０天再正过来，确保铝瓶的所有部位都能得到培养。所有培

养基灌装容器数量必须与培养数量一致，丢弃的容器应说明理由并记录。

４．４．１５观察检测

微生物专业人员每天对培养容器进行观察和记录，如出现潜在阳性或阳性，

由专业人员检查任何潜在的污染源，必要时，使用科学方法确定污染菌的种类。

对于被隔离的不合格容器或在培养期间发现的不合格容器，若这些容器显阳性，

应由微生物专业人员和ＱＡ人员进行调查，确认这些容器显阳性的原因是否由不

合格的原因引起。以确定这些阳性是否反映了培养基模拟灌装的结果。在工艺

模拟试验期间，所有不合格的容器都必须记录在批生产记录中。除非经ＱＡ审核

和批准移除容器，否则培养阶段不得移除任何容器。必须将移除原因和其支持

依据记入文件。无菌模拟试验观察结果见下表。

表４－２２无菌模拟试验观察结果汇总表

批号名称

数量结果结论促生长试验

１５Ｌ铝瓶５６未浑浊符合要求

西林瓶５７未浑浊符合要求

第一批ｌＯＯｍｌ铝瓶１０未浑浊符合要求合格

取样用品ｌ未浑浊符合要求

滤芯１未浑浊符合要求

１５Ｌ铝瓶５６未浑浊符合要求

西林瓶５７未浑浊符合要求

第二批ｌＯＯｍｌ铝瓶１０未浑浊符合要求合格

取样用品１未浑浊符合要求

滤芯１末浑浊符合要求

１５Ｌ铝瓶５６未浑浊符合要求

第三批合格

西林瓶５７未浑浊符合要求

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批号名称数鼍结果结论促生长试验

ｌＯＯｍｌ铝瓶１０未浑浊符合要求

取样用品１未浑浊符合要求

滤芯１未浑浊符合要求

４．４．１６无菌模拟试验灌装培养基的促生长试验

在培养周期术，取出培养基，由微生物专业人员对培养基进行微生物的促

生长试验。

４．４．１７可接受标准

所有用到的设备均已通过验证；所有用到的仪器、仪表、包括实验室仪器、

仪表均己校验且在校验周期内；因无菌原料药模拟试验灌装的数量少，不允许

出现阳性，若因微生物试验造成的阳性，应有充分的调查证据证明。

４．４．１８环境监控㈣

每次工艺模拟试验进行环境监控，包括悬浮粒子、沉降菌、浮游菌、洁净

厂房、设备表面监控和人员监控。也要对相对温度和湿度进行监控和记录。

４．４．１９模拟批数

新无菌系统至少三批，当出现下列变更时应至少再验证一次：

ａ影响无菌关键设备发生重大变更时。

ｂ空气净化系统发生重大变更时。

Ｃ过滤方式发生变更时。

ｄ灭菌方式发生变更时。

ｅ生产工艺发生影响无菌的变更时。

ｆ操作规程发生重大变更时。

ｇ工艺管道发生影响无菌的变更时。

ｈ无菌操作人员发生重大变更时。

ｉ出现无菌检测失败或无菌原因的投诉，未查清具体原因时。

ｋ无菌生产设备出现３个月以上的停产时。

ｌ连续生产一年时。

４．４．２０失败调查

工艺模拟试验中如果出现阳性结果，应对其开展调查，确定失败的最可能

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的原因。必须对调查进行记录，至少包括对以下内容的检查：

ａ工艺模拟试验中沉降菌、浮游菌、悬浮粒子监测数据。确定空气监测结

果与工艺模拟试验污染是否存在联系。

ｂ工艺模拟试验中表面擦拭菌监控数据。确定监测结果与工艺模拟试验污

染是否存在联系。

ｃ使用的设备、物品、组件的灭菌数据。

ｄ操作者的技术和培训（如：若培养基灌装被视频记录下来了，检查视频）。

ｅ工艺模拟试验中出现的，列在批生产记录或有关文件里的任何不正常事

件。

ｆ工艺模拟试验中使用的无菌组件、设备、物品的储存条件。

ｇ工艺模拟试验中产生的灭菌和维护日志。

ｈ过滤前后完整性测试数据，和过滤器壳体装配。

ｉ工艺缺陷和检测工艺限值。

ｊ最后读数之前丢弃的容器记录材料。

ｋ评估是否遵循操作规程和检验操作规程。

调查应以报告的形式记录在文件中，且必须指明采取的纠正措施。调查应

作为偏差的一部分。报告必须审核和审批。根据工艺模拟试验的调查结果和纠

正措施的执行情况，应重新开展相应的工艺模拟试验。

４．４．２ｌ无菌模拟试验后的清洁

无菌模拟操作结束后，应进行清洁，以避免培养基或安慰剂的存在对下步

生产产品质量的影响，清洁方法应进行验证。

４．４．２２无菌模拟试验结论

通过无菌工艺模拟验证，无菌生产过程的人员资质、设备设施、物料、无

菌工艺、环境控制和监测系统均符合要求，灭菌效期验证均符合要求，具体确

认如下：

ａ从事无菌生产人员（包括生产操作、生产管理、过程监督、取样、维修

电仪）在经过ＧＭＰ法规培训、微生物和卫生学培训、洁净区出入培训、洁净区

人员行为规范、岗位操作ＳＯＰ等相关知识的培训后，具备了从事无菌操作的资

质；

ｂ无菌生产设备设施，包括洁净厂房和空调净化系统、无菌结晶罐、三合

ＲＲ

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一、分装系统、灭菌柜等在验证效期内均可以正常使用，满足无菌生产要求；

Ｃ无菌过滤前的微生物负荷大于ＩＯＣＦＵ／ＩＯＯｍｌ（最高３１０ＣＦＵ／ｍ１）的情况下，

除菌过滤后料液可以达到无菌水平；说明微生物负荷按ＩＯＣＦＵ／ＩＯＯｍｌ进行控制

是可行的：

ｄ无菌工艺具有生产无菌产品的能力的适用性；具有生产无菌药品的能力，

并具有重现性；

ｅ在无菌生产期间，能够维持已建立的环境监控和人员监控参数；

ｆ洁净区清洁规程和清洁方法可以保证达到相应的洁净级别要求，不会影

响产品的无菌性；

ｇ证明无菌操作规程是恰当，无菌操作人员的熟练程度达到无菌工艺生产

的要求：

ｈ无菌设备和无菌过滤系统在线湿热灭菌至使用的有效期为２４小时是适

用的；

ｉ湿热灭菌和干热灭菌物品、器具灭菌有效期为２４小时是适用的；

ｊ生产操作特定干扰事件对产品的无菌性没有影响。包括生产过程洁净区

温湿度超标约４０分钟、干燥过程停热水约２小时、经培训的维修电仪人员进入

洁净区等：

ｋ生产操作特定最差情况对产品的无菌性没有影响，包括进入Ｃ级洁净区

人员总数７人，Ｂ级区人员总数１２人等；

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４．５清洁消毒与环境监控的相关验证

清洁是ＧＭＰ的重要环节，ＧＭＰ活动中的宗旨是“在最大程序地降低药品生

产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续稳定地生产出符合

预定用途和注册要求的药品”。

药品生产必须保持清洁卫生环境，不同洁净级别的洁净区对生产环境、设

备和人员卫生有不同的清洁卫生要求，应进行适当的清洁和消毒。ＧＭＰ（２０１０

年修订）无菌药品附录明确规定“应当按照操作规程对洁净区进行清洁和消毒，

应当定期进行环境监测，及时发现耐受菌株及污染情况”。

４．５．１过滤前料液的微生物负荷检查方法验证

为控制过滤料液中引入的微生物污染，降低无菌过滤前微生物负荷，更好

地保护无菌过滤器，对无菌过滤前的微生物负荷进行监控，因此需要对过滤液

的微生物负荷的检验方法进行验证。

（１）培养基：生物负荷检验所用培养基有：液体培养基Ａ（大豆酪蛋白

消化肉汤、ＴＳＢ）、琼脂培养基Ｂ（大豆酪蛋白消化琼脂培养基、ＴＳＡ）、琼脂培

养基Ｃ（沙氏葡萄糖琼脂培养基、ＳＤＡ）、Ｒ２Ａ琼脂培养基。

（２）微生物负荷检查法

试验用菌株的传代次数不得超过５代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌

种为第０代）。试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验

菌株的生物学特性。

表４－２３试验用菌汇总表

菌种名称ＡＴＣＣ代号ＣＭＣＣ代号

铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ

ａｅｍｇｉｎｏｓａ）

ＡＴＣＣ９０２７ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４

金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ

ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ６５３８ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３

枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ａ‘Ｉ℃Ｃ６６３３ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０ｌ

白色念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）ＡＴＣＣ１０２３１ＣＭＣＣ（Ｆ）９８ｏｏｌ

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）

ＡＴＣＣ１６４０４ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００３

（３）菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、

环境检出菌的新鲜培养物至大豆酪蛋白消化琼脂培养基中，３０～３５。Ｃ培养１８～

６８

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２４小时；接种白色念珠茵、黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，

２０～２５℃培养，白色念珠菌培养２４～４８小时，黑曲霉培养５～７天，上述培养

物用０．９％无菌氯化钠溶液制成每ｌｍｌ含菌数小于１００ｃｆｕ（菌落形成单位）的菌

悬液；制备好的菌液于冰箱内（２～８℃）保存，有效期为２４ｈ，黑曲霉孢子悬

液的有效期暂定为２周。

（４）检查法验证

供试品溶液配制：粗品取ｌＯｇ于ｌＯＯｍｌ稀释剂中混匀溶解，料液如有必

要，可按１０倍比例稀释混匀后作为供试品溶液。

试验组：取供试品溶液适量至装有ｌＯＯｍｌ稀释剂的滤器中，过滤，用０．１％

的蛋白胨水分次冲洗滤膜，每次冲洗量不大于ｌＯＯｍｌ，在最后一次冲洗液中加

入ｉｍｌ＜ｌＯＯｃｆｕ的试验菌，过滤完毕，将滤膜取下，正面朝上贴于琼脂培养基

中。

菌液组：取菌液ｌｍｌ，接种至琼脂培养基中，涂布均匀，培养，测定所加

的试验菌数。

供试品对照组：取与５．３．３．１中相同量的供试液至滤器中，过滤，用０．１％

的蛋白胨水分次冲洗滤膜，每次冲洗量不大于１００ｍｌ，总冲洗量与５．３．３．２中

相同，过滤完毕，将滤膜取下，正面朝上贴于琼脂培养基中培养，按菌落计数

方法测定供试品本底菌数。

铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌用大豆酪蛋白消化琼脂培

养基，白色念珠菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备２

个平皿。菌液回收率＝望塑筌堕壁鼋募蓦雾篓雾等×－。。％

结果判断：若试验组的菌回收率均不低于７０％，照该方法测定供试品的细

菌、霉菌及酵母菌数；若任一次试验中试验组的菌回收率低于７０％，应采用适

宜的方法（例如培养基中加青霉素酶、增加冲洗量）消除供试品的抑菌活性，

并重新进行方法验证。

（５）检查法

（５．１）采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于０．４５ｃｍ，直径约为４７ｒａｍ或

５０ｒａｍ。按照５．３．３中验证的方法进行检验操作，冲洗方法和冲洗量同“计数方

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法的验证”。每次冲洗量不大于ｌＯＯｍｌ，每片滤膜的总过滤量不宜过大，以避

免滤膜上的微生物受损伤。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于大豆酪蛋白消化琼

脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。

（５．２）阴性对照试验取试验用的稀释液ｌｍｌ，照上述薄膜过滤法操作，

作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

（５．３）培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过

１００ｃｆｕ。

（５．４）

菌数报告规则：以相当于ｌｇ、ｌｍｌ或ｌＯｃｍ２供试品的菌落数报告

菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜ｌ报告菌数（每张滤膜过滤ｌｇ、ｌｍｌ或ｌＯｃｍ２

供试品），或＜１乘以最低稀释倍数的值报告菌数。

４—２４头孢地嗪钠无菌过滤液微生物负荷检测结果汇总表

头孢地嗪钠

细菌菌落数（ｃｆｕ／ｌｍ）真菌菌落数（ｃ削皿）

过滤液

金黄色葡萄球菌

白色念珠菌

验证次数试验组供试品对照组试验组供试品对照组

ｌ＃８００８４Ｏ

ｌ２＃８９Ｏ８２Ｏ

平均８４．５

Ｏ８３Ｏ

回收率（％）９２．９９５．４

１＃

７５０８２０

２２＃８３Ｏ９０Ｏ

平均７９０８６０

回收率（％）８７．８９２．５

１＃

７８Ｏ７６

Ｏ

３

２＃

８９Ｏ８５

０

平均８３．５Ｏ８０．５Ｏ

回收率（％）８８．８

８７．５

４—２５无水乙醇无菌过滤前微生物负荷检测结果汇总表

细菌菌落数（ｃｆⅣｍ１）真菌菌落数（ｃｆｗｌ］］１）

无水乙醇

金黄色葡萄球菌

白色念珠菌

验证次数试验组供试品对照绸试验组供试品对照组

７０

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１＃７２

０９０Ｏ

ｌ

２＃

８３Ｏ７８Ｏ

平均７７．５０８４０

回收率（％）８５．２９６．６

１＃８２０９０Ｏ

２２＃８９０

８７０

平均８５．５０８８．５０

回收率（％）９５９５．２

ｌ＃８００８４０

３２＃９２０

９３

０

平均８６０

８８．５

０

回收率（％）９１．５９６．２

由以上结果可知，头孢地嗪钠过滤液和无水乙醇洗液回收率均能大于７５％

以上，表明按照验证方案中供试品对照组检验方法进行头孢地嗪钠料液和无水

乙醇洗液的微生物限度检查，检验结果是合理可信的。

本次验证证明，头孢地嗪钠料液每膜取ｌＯｍｌ，冲洗量为８００ｍｌ，无水乙醇洗

液每膜取５０ｍｌ，冲洗量为３００ｍｌ，均能有效消除两种供试品溶液的抑菌性，以金

黄色葡萄球菌和白色念珠菌作为试验菌，菌液回收率均能达到７５％以上，满足

合格标准。

４．５．２表面的微生物负荷检查方法学验证

为监控洁净厂房和设备表面的微生物负荷，需要对洁净厂房和设备表面进

行采样培养，以确认表面的微生物负荷量，为确保表面微生物污染采样方法的

准确性，进行表面微生物擦拭方法学验证。

（１）试验菌种

所用的菌株传代次数不得过超过５代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌

种为第０代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特征。

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４—２６表面微生物检查用菌信息汇总表

名称代号培养基

金黄色葡萄球菌ⅣｒＣＣ６５３８ＴＳＡ

环境菌Ｂ．１１０８０２Ｉ：３ＴＳＡ

白色念珠菌ＡＴＣＣ１０２３１ＳＤＡ

（２）菌液制备

ａ接种金黄色葡萄球菌和环境菌的新鲜培养物至大豆酪蛋白消化琼脂培养

基中，３０～３５℃培养１８～２４小时：

ｂ接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，２０～２５＂Ｃ培

养３～５天，上述培养物用０．９％无菌氯化钠溶液制成每ｌｍｌ含菌数小于ｌＯＯｃｆｕ

（菌落形成单位）的菌悬液。

Ｃ制备好的菌液于冰箱内（２～８℃）保存，有效期为２４ｈ。

（３）制板

将各种板材清洗干净后灭菌，所有板材表面均用７５％酒精擦拭，用无菌袋

包扎，放入湿热灭菌柜，１２１℃灭菌３０分钟，将经灭菌处理后的板材放置生物

安全柜中，将０．５ｍｌ菌悬液装入无菌注射器内，均匀的点在板上５ｃｍ×５ｃｍ即

２５ｃｍ２左右的面积内，自然干燥。

（４）擦拭

握住棉签柄，将湿润的无菌棉签用力使其弯曲，以３０度角与取样表面接触，

平稳而缓慢擦拭点过试验菌的板材表面，擦拭面积同制板面积。在向前移动的

同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整个取样表面。翻转棉签，让棉

签的另一面也进行擦拭；但与前次擦拭移动方向垂直（如下图）。

（５）擦拭完后，将棉签用无菌剪刀剪断弃去手持柄部，投入装有ｌＯｍｌ

灭菌生理盐水的试管中，混合振荡１０分钟使菌悬液洗脱，将洗脱液薄膜过滤，

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用生理盐水冲洗试管３次并过滤，将滤膜取出正面朝上贴在培养基上（金黄色

葡萄球菌、环境分离菌用ＴＳＡ培养基３０－３５度培养３天，白色念珠菌用ＳＤＡ琼

脂培养基２０一２５度培养５天）。

（６）每种试验菌用培养５天后的培养基测试本底菌数，每０．５毫升本底

菌数应＜ｌＯＯｃｆｕ。

（７）阴性对照：取消后空白棉签，投入１０ｍｌ灭菌生理盐水中，同法操作，

薄膜过滤后，取出滤膜贴在培养基上培养，作为阴性对照。擦拭回收率＝塑塑篙雾碧善擎×，。。％

（８）判断标准：当擦拭回收率＞７０％时，则判断此取样方法和检验方法符

合规定。

（９）结果记录

（９．１）验证结果第一次汇总表

本底菌数

各种材质回收率（％）

菌液名称

（ｃｆｕ／ｍ１）

３０４不锈钢３１６Ｌ不锈钢彩钢板铝桶

金黄色葡萄球菌６１８６．９９６．７８３．６７７．０

环境菌６８８０．９８２．４８６．８７５．０

白色念珠菌４２

７６．２

７８．６７１．４７３．８

结论合格合格合格合格合格

备注：回收率合格标准为＞７０％；本底菌数＜ＯＯｃｆｕ／Ｏ．５ｍｌ

（９．２）验证结果第二次汇总表

本底菌数

各种材质叵收率（％）

菌液名称

（ｅｆｕ／皿）

３０４不锈钢

３１６Ｌ不锈钢

彩钢板

铝桶

金黄色葡萄球菌５９８３．１７８．０８６．４７９．４

环境菌６６８４．８７８．８８６．４７５．８

白色念珠菌４９７１．４７７．６７３．５

７２．４

结论合格合格合格合格合格

备注：回收率合格标准为＞７０％；本底菌数＜

ＯＯｃ例０．５ｍ１

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（９．３）验证结果第三次汇总表

本底菌数

各种材质回收率（％）

菌液名称

（ｃｆｕ／ｍ１）

３０４不锈钢３１６Ｌ不锈钢彩钢板铝桶

金黄色葡萄球菌６５８１．５７５．４８０．０

７０．８

环境菌６６８１．８７７．３８６．４７５．８

白色念珠菌４４７０．５８１．８７２．７７５．Ｏ

结论合格合格合格合格合格

备注：同收率合格标准为＞７０％；本底菌数＜ＩＯＯｃｆｕ／Ｏ．５ｍｌ

（１０）验证结论

通过验证及数据表明，按照本方法进行采样操作，３０４不锈钢、３１６Ｌ不锈

钢、彩钢板及铝桶擦拭回收率均大于７０％，表明在该擦拭方法下所得出的检验

结果是有效的、可接受的，可以用于洁净室中３０４不锈钢、３１６Ｌ不锈钢、彩钢

板及铝桶表面的擦拭菌检查。

４．５．３人员出入洁净区验证

人员是洁净区最大的污染源，需要采取严格的更衣程序，减少人员表面微

生物的携带量，减少人员对洁净区的影响。对进出洁净区，尤其是进出Ｂ级洁

净区的人员进行严格的更衣程序培训并进行出入程序的验证，以证明Ｂ级洁净

区工作人员能够熟练掌握更衣要求，最大限度的减少人员进入洁净区对无菌产

品的污染。

（１）人员出入Ｂ级洁净区的风险分析

项目

风险点风险评估风险控制

穿无菌内衣、戴帽子严格按照ＳＯＰ的规定依

更农顺序时，皮肤可能会与外

人体脱落物或微生物可

据正确顺序戴帽、穿农。

表面接触。

能会污染外表面。

消毒手（手套）。

直接用手拿取无菌外

手上的微生物会污染无戴上无菌手套，再穿无菌

更衣动作

农外表面。菌衣外表面。

外衣。

戴上口罩后，呼出的气将口罩戴在无菌衣内，呼

口罩戴在无菌外农外体会从口罩上下边缘扩出的气体从口罩上下边

戴口罩

面。

散到室内，有对环境污缘扩散到无菌衣内，降低

染的风险。对环境的污染。

晁ｆ：自身佩戴的眼镜

眼周保护不好，会污染戴可灭菌的眼罩，将眼周

眼周的保护不能灭菌，眼周（眉

无菌环境的产品。进行有效地保护。

毛、睫毛）。

操作行为生产过群中整个人员人部分操作都通过双手每次接触物品后应对双

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着装被污染物污染的来完成，手指和手腕被手（手套）进行消毒，晾

可能性。污染的可能性最大，易干后进行下一步操作。没

产生交叉污染：头部、有操作时，应定期（每个

口罩、肩部、前臂、眼１０到２０分钟）对双手进

罩更靠近人体皮肤，也行消毒。监控操作人员易

是易被微生物污染的部被污染的部位。

位。

无菌衣或手套出现污染、破损或人对环境或产品造成污发现异常，立即退出洁净

异常体皮肤外露。染。区，更换新的。

（２）人员出入Ｂ级洁净区程序

（２．１）进Ｂ级洁净区流程口１堕］｛堕！Ｈ三忙习仨寸臣９圈

（２．２）出Ｂ级洁净区流程

（３）更衣程序的确认

由ＱＡ人员对进入洁净区的所有人员，每人监控３次更衣程序，按照下表

的内容进行评估，被评估人员完成了表格中描述的情况，在表格相应位置打

“√”；如果未完成表格中描述的情况，在表格相应位置打“×”。评估结束，

对着装不规范的人员应立即通知其不可接受的活动，并演示和告知正确的行为。

表４—２７个人卫生及着装规范评估表

评估时间：年月

ＱＡ评估人员：

被评估人：

日

观察结果

恰当的着装行为

第１次第２次

第３次

在进入洁净区前未化妆及佩戴饰物（如手表、戒指、耳环等）。√√√

穿绿色岗位服进入参观走廊。√√√

在一更用洗手液洗手并烘干。√√√

在二更消毒手，先袋帽子，再穿无菌内农。√√√

帽子应将头发全部覆盖住，没有任何部分暴露。√√√

消毒手的时间不少于３０秒，再次消毒手后进入二更。√

√√

在三更再次消毒双手，在戴无菌手套前使双手完全干燥。√√√

山东大学硕士学位论文

戴合适规格的无菌手套，确保戴后紧实，在手指处无空隙。√√√

检查手套，确保无洞或破损等任何缺陷。√√

√

将洁净工作鞋放在分隔线相对洁净的一侧。√√√

戴上手套，再对号取出无菌外衣，先戴口罩。√√√

口罩必须遮住鼻梁至下巴的部分。√√√

穿无菌农过程中，衣服不得触及地面，将衣带系好，调整整洁。√√√

戴上无菌眼罩。√√√

穿戴完成后再戴－Ｎ无菌手套，袖口束在手套内。√√√

进入气闸间，再次消毒双手。√

√√

离开洁净区后，脱掉手套。＿√√

注：“√”表示正确执行，“Ｘ’’表示未能正确执行。

（４）无菌洁净服的微生物监测

对进入Ｂ级洁净区的人员进行监控，监测时间为进入Ｂ级洁净区操作前和

完成操作离开Ｂ级洁净区时各取样一次，每人监测３次。可接受标准为≤２ＣＦＵ／

碟。

监测方法：操作前用棉签擦拭法取样，出Ｂ级区前用接触碟法采样，采

样点包括为双手手指、手腕、头部、眼罩、口罩、肩部、前臂和脚套，如下图

所示。

山东人学硕十学位论文

图４—４无菌洁净用微生物限度采用点示意图

４．５．４消毒剂消毒效果验证

消毒剂是指消毒时所用的化学试剂。消毒剂能使微生物数量在５～１０分钟

内下降３个对数单位，但不能杀灭孢子和病毒。不同的消毒剂具有不同的组分

和作用，消毒剂的杀菌效果会受到被消毒表面的类型、与被消毒剂表面的接触

时间以及相关表面的微生物种群的影响，因此应根据实际情况取用无污染、无

残留的消毒剂，并进行消毒剂消毒效果的验证。“们

按照使用需求配制相应浓度的消毒剂，并经０．２２ｕｍ的滤膜过滤除菌，配制

消毒剂应用无菌纯化水或注射用水。

（１）试验菌株

所用的菌株传代次数不得过超过５代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌

种为第Ｏ代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特征。

山东人学硕七学位论文

表４—２８微生物菌种目录

名称代号培养基

金黄色葡萄球菌》忑ｃＣ６５３８ＴＳＡ

铜绿假单胞菌

甑ｃＣ９０２７ＴＳＡ

枯草芽孢杆菌ＡＴＣＣ６６３３ＴＳＡ

白色念珠菌ＡＴＣＣ１０２３１ＴＳＡ

黑曲霉ＡＴＣＣ６５３８ＳＤＡ

（２）菌悬液制备

用接种环取一环金黄色葡萄球菌的斜面培养物，接入ＩＯｍｌＴＳＢ培养基中，

振荡使菌苔分散均匀，同法进行铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、

黑曲霉的增菌操作，细菌３０３５℃培养１８—２４ｈ，真菌２０－２５℃培养７２ｈ。

（３）悬液定量杀菌试验

用稀释法测定消毒剂作用前试验菌的浓度值（ｃｆｕ／ｍ１），应为１０６～

１０８ｃｆｕ／ｍｌ。取１２支灭菌大试管，用无菌吸管各加入待测消毒液４．５ｍｌ。取金黄

色葡萄球菌菌悬液０．５ｍｌ，加入上述其中两支试管中，迅速混匀，按照规定的

作用时间立即计时。待试验菌与消毒剂相互作用至预定时间，将作用后的混合

液倒入盛有ｌＯＯｍｌＯ．１％蛋白胨水（中和剂）的滤器中迅速过滤，用至少３００ｍｌＯ．１％

蛋白胨水冲洗滤膜，每次冲洗量不得超过ｌＯＯｍｌ，滤干后将滤膜取下，若试验

菌为细菌，将滤膜贴入ＴＳＡ培养基中，３０－３５。Ｃ培养１８—２４ｈ，若试验菌为真菌，

将滤膜贴入ＳＤＡ培养基中，２０—２５。Ｃ培养７２ｈ，观察结果，并计算菌浓度（ｃｆｕ／ｍ１）。

同法进行其他试验菌的操作。每种消毒剂的杀菌试验均应重复三次。

（４）结果评价

（４．１）计算杀灭对数值：

杀灭对数值（ＫＬ）＝消毒剂作用前试验菌浓度对数值（Ｎ０）一消毒剂作用后

试验菌存活浓度对数值（Ｎ。）

（４．２）杀灭对数值均≥３．０，可判定消毒合格。

（５）消毒剂消毒效果汇总

山东大学硕士学位论文

表４—２９７５％酒精消毒效果汇总表

消毒剂名称：酒精消毒剂浓度：７５％接触时间：５分钟

消毒剂作用

消毒剂作用

消毒剂作用

杀灭对数值

结论名称

前浓度

时间（ｍｉｎ）

后浓度

（ＫＬ）

（ｃｆｕ／ｍ１）（ｃｆｕ／ｍ１）

臾

１５０．２４＊１０２５

色

葡

萄

２０．６８＊１０７５０＿３５木１０２５合格

球

菌金

３５０．２９＊１０２５

铜

ｌ

５Ｏ－３３奉１０２

４

绿

假

２０．６＂１０６５０．３５＊ｌＯ‘４合格

堇

胞

菌３５０．４２＂１０２

４

枯

５０．４２＂１０４２

苴

芽

２０．５２＊１０６５０．５５＂１０４２不合格

孢

杆

菌３５０．４９＊１０４

２

白

１５０．４２＊１０２４

色

念２

０．４７＊１０６

５０’３８｝１０２４合格

珠

菌

３５０．４０＊１０２４

１５Ｏ．３３＊ｉ０４２

黑

曲２０．４６＊１０６５０．３５＂１０４２不合格

霉

３５０．４１＊１０４

２

备注：杀灭对数值均＞／３．０，判定消毒合格

结论：

ｌ７５％的酒精在作用时间５ｍｉｎ时，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、白色念珠茵作用效

果良好，能够较好杀灭；对枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌作Ｈｊ效果不好，不能较好地杀灭；

２当环境中发现枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌时，应更换消毒剂。

表４—３００．２％新洁尔灭消毒效果汇总表

消毒剂名称：新洁尔灭

消毒剂浓度：Ｏ．２％接触时间：５分钟

消毒剂作用

消毒剂作用

消毒剂作用

杀灭对数值

结论名称

前浓度

时间（ｍｉｎ）

后浓度

（ＫＬ）

（ｃｆｕ／ｍ１）

（ｃｆｕ／ｍ１）

公‘

１５０７

黄

菌鲁２０．６８＊１０７５５７合格

萄

球３５８

６

７９

山东大学硕士学位论文

铜

１５６５

绿

假

Ｏ．６＇１０６５０５合格

．邑

２

胞

菌３

５４５

枯

５０．４４＇１０４２

蓖

芽

Ｏ．５２＇１０６５Ｏ．４５＂１０４２不合格

孢

２

杆

菌３

５Ｏ．３９＂１０４２

１５０．３５＊１０。４

白色

念珠２０．４７＂１０６５０．３９＊１０２４合格

菌

３５Ｏ．３６＇１０２４

１５０．３７＂１０４２

黑

曲２０．４６＇１０６５０．４２＂１０４２不合格

霉

３５０．４０＂１０４２

备注：杀灭对数值均＞／３．０，判定消毒合格

结论：

１０．２％的新洁尔灭在作用时间５ｍｉｎ时，对金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、白色念珠菌

作用效果良好，能够较好杀灭；对枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌作用效果不好，不能较好地杀灭：

２当环境中发现枯草芽孢杆菌、黑曲霉菌时，应更换消毒剂。

４．５．５环境菌的分离与鉴别

（１）环境菌分离

菌种分离主要在培养皿上进行，常用的方法是划线法和稀释法。其目

的是使微生物的单个个体通过繁殖，在固体培养基上长出肉眼能见的群体，然

后根据培养特征，用接种针挑取所需菌种并在显微镜下检查，证明为单一形状

的菌体。

（１．１）划线法

在酒精灯火焰下灼烧接种环，待其冷却后，按无菌操作法取一环待分

离菌液，左手握住琼脂平板，稍抬起平皿盖，右手持接种环伸入平皿内，在平

板的第一个区域沿“之”字形来回划线。划线时接种环与平板表面呈３０。～４００

轻轻接触，用腕力使接种环与琼脂表面作轻轻滑动，注意不要划破琼脂表面。

灼烧接种环，等其冷却后，将培养皿旋转约７０。，用接种环在已划线的第一区域

接触一下，再在第二个区域进行划线，并依次在第三和第四区域进行划线。如

山东人学硕十学位论文

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（２）环境菌的鉴定

（２．１）外观鉴别：通过肉眼观察判断菌落形态并记录，通过简单染色法

镜检确定菌体在显微镜下的形态，通过革兰氏染色确定是革兰氏阳性菌还是革

兰氏阴性菌。

（２．２）种属鉴定‘３０１

当同一地点多次出现同一菌落时，应对该菌落进行种属鉴定。菌落种属鉴

定委托山东省药品检验所进行。将分离纯化的两株菌种由山东省药品检查所签

定，其中编号为“ＬＫ００１”的菌落经鉴定为“沃氏葡萄球菌”，编号为“ＬＫＬＫ００２”

的菌落经鉴定为“腾黄微球菌”。（菌落中属鉴定报告附后）

球菌主要是人员引入，因此应加强洁净区内无菌操作意识的培养。

（２．３）菌种保存

菌种的保藏方法有：试管熔封（密封）保藏法、甘油冷冻管保藏法、液体

石蜡覆盖保藏法、斜面低温保藏法、芽孢液保藏法。

斜面低温保藏法为工作菌种的最常用的保藏方法，操作简单，使用方便。

操作时，将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，按规定时间培养后（细菌１８～

２４小时，真菌３～５天），转移至２－８。Ｃ冰箱中保藏。保藏时间依微生物的种类

而有所不同。

８２

龠心

山东大学硕士学位论文

（２．４）环境菌的应用

环境监测中经常出现的菌株，说明消毒剂对其作用效果不明显，则应在消

毒剂的验证、环境洁净度验证等验证操作中，将该菌株作为试验菌加入。

湿热灭菌柜验证出现的污染菌，则应考虑该菌的耐热性，须进行耐热性试

验并确认后作为湿热灭菌柜验证过程中的微生物挑战试验菌株。

生物负荷中出现的污染菌，在确认其不能被０．４５ｕｍ滤膜截留后，在验证滤

膜及滤芯性能时，应将其作为试验菌加入。

４．６本章小结

本章主要探讨了洁净厂房与空调净化系统验证、湿热灭菌艺的可靠性

验证、干热灭菌工艺的可靠性验证、除菌过滤工艺验证、包装容器的密封性验

证、非最终灭菌无菌原料的无菌工艺模拟验证以及过滤前料的微生物负荷检查

方法验证、表面微生物负荷检查方法学验证、人员出入洁净区验证、消毒剂消

毒消毒效果验证、环境菌的分离与鉴别并委托山东省药品检验所对分离的两株

菌落进行了菌种鉴定。

对除菌过滤工艺验证进行了较深入的研究，对如何选择挑战用菌落的体积

提供了公式，分析了无菌过滤面临的最差工艺条件，进行了细菌存活性的试验、

细菌截留试验、化学兼容性和溶出物试验，为非最终灭菌无菌原料药的无菌过

滤工艺如何进行验证提出了实际生产中可行的实施方案。

对非最终灭菌无菌原料药的无菌工艺模拟验证进行了较深入的研究，根据

无菌模拟试验的风险分析和非最终灭菌无菌原料药的工艺流程，制定了非最终

灭菌无菌原料药的无菌工艺模拟验证的工艺流程，并组织实施了该验证。

山东大学硕士学位论文

ｂｉｏＭｅｄｅｕｘＣｕｓｔｏｍｅｒ：

Ｓｙｓｔｅｍ＃：

沃氏葡萄球菌（ＬＫＬＫ００１）

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山东大学硕士学位论文

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８５

山东大学硕士学位论文

本课题研究的结论

本课题通过对无菌检查局限性研究、非最终灭菌无菌原料药生产过程中存

在的风险进行分析，以及相关的验证研究，得出以下结论：

１、以《中华人民共和国药典》（２０１０年版二部）无菌检查法结果来判定

产品是否无菌，并不能保证无菌药品的“无菌性”。因此对于非最终灭菌的无菌

产品而言，更严格的无菌验证才是证明产品无菌的依据。

２、非最终灭菌产品的无菌保证是基于风险分析的理念和系统的理念，在

各系统均处于有保证的前提下，无菌才能够有保证。

３、基于《药品生产质量管理规范》（２０１０年修订）（简称：ＧＭＰ）的基本原

则，参考国际通行的技术指导原则，将非最终灭菌无菌原料药的无菌保证体系

建立的方法及验证方法作为ＧＭＰ的附录，有利于我国制药企业更好地建立无菌

保证体系和验证手段。

４、对非最终灭菌无菌原料药影响无菌保证的关键因素进行重点分析和验

证：（１）产品灭菌前微生物污染水平的控制；（２）灭菌／除菌工艺的可靠性；（３）

包装容的密封性；（４）无菌工艺模拟验证（５）良好的生产质量管理等。

随着我国制药企业对非最终灭菌无菌保证的认识不断提高，通过系统的验

证和良好的生产质量管理，我国非最终灭菌无菌药品的无菌保证水平会不断的

提高，非最终灭菌的无菌药品的质量更有保证。

山东大学硕士学位论文

参考文献

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【１１】ＩＳＰＥ制药工程基准指南系列一无菌生产设施（第二版２０１１．９）

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Ｄｒｕｇ

ＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｏｄｕｃｅｄ

ｂｙＡｓｉｐｔｉｃＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇ－－ＣｕｒｒｅｎｇＧｏｏｄ

Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ

Ｐｒａｃｔｉｃｅ行业指南无菌加工生产的无菌药品—现行的

无菌质量管理规范（ＣＧＭＰ）

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【１４１欧洲空气过滤标准，ＥＮｌ８２２．４：２０００高效空气过滤器（ＨＥＰＡ和ＵＬＰＡ）

滤芯泄漏测定（扫描法）

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【１６］ＰＤＡ，Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｏｉｓｔｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ

ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ：ｃｙｃｌｅ

ｄｅｓｉｇｎ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｑｕａｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｏｎｇｏｉｎｇ

ｃｏｎｔｒｏｌ，２００７

ｒｅｖｉｓｉｏｎ．

８７

山东大学硕士学位论文

【１７ｌＰＤＡ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｄｒｙ

ｈｅａｔ

ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ

ｕｓｅｄ

ｆｏｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄ

ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ．

【１８１ＰＤＡＴｅｃｈｎｉｃａｌ

ＲｅｐｏｒｔＮｏ．２６，＂Ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ

Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｏｆ

Ｌｉｑｕｉｄｓ，＂ＰＤＡ

Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ

Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖ．５２，ｎｏ．Ｓ１

（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｍａｒｃｈ，１９９８

１９９８一ＰＤＡ发行除菌过滤验证技术报告

（Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ

Ｒｅｐｏｒｔ

Ｎｏ．２６）

【１９１

Ｌｅａｈｙ，Ｔ．Ｊ；Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｍ．，ＶａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆＢａｃｔｅｒｉａｌＲｅｔｅｎｔｉｏｎ

Ｃａｐａｂｉｌｉｅｓ

ｏｆ

Ｍｅｎｂｒａｎｅ

Ｆｉｌｔｅｒｓ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｅｃｈｎ０１．１９７８，２（１１），６４—７５．

［２０１

ＰＤＡ，Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ

ｍｏｉｓｔｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎ

ａｕｔｏｃｌａｖｅ，２００２

ｒｅｖｉｓｉｏｎ，

［２１】ＡＳＴＭ．ＳｔａｎｄａｒｄＴｅｓｔＭｅｔｈｏｄｆｏｒＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＢａｃｔｅｒｉａｌＲｅｔｅｎｔｉｏｎｏｆ

ＭｅｍｂｒａｎｅＦｉｌｔｅｒｓＵｔｉｌｉｚｅｄｆｏｒ

Ｌｉｑｕｉｄ

Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．２００５．

【２２】Ｃｌｏｎｔｚ，Ｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ

Ｌｉｍｉｔａｎｄ

Ｂｉｏｂｕｒｄｅｎ

Ｔｅｓｔ：Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ

Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ

ａｎｄ

ＧｌｏｂａｌＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ（２ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ），２００８．

１２３】ＦＤＡ人用药品和生物制品包装用容器密封系统指导原则。

［２４１国家食品药品监督管理局药品认证管理中心．药品ＧＭＰ指南．２０１１年。

［２５】ＷＨＯ，Ｇｏｏｄ

ＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇＰｒａｃｔｉｃｅｓｆｏｒＳｔｅｒｉｌｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ

Ｐｒｏｐｏｓａｌ

ｆｏｒ

Ｒｅｖｉｓｉｏｎ，２００９．

【２６】ＥＵＧＭＰＡｎｎｅｘ２０ＱｕａｌｉｔｙＲｉｓｋＭａｎａｇｅｍｅｎｔ，２００６．

［２７１

ＰＩＣ／Ｓ，Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆ

ａｓｅｐｔｉｃｐｒｏｃｅｓｅｓ，２００９．

［２８１

ＰＤＡ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ

Ｒｅｐｏｒｔ

Ｎｏ．１３ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓｏｆａｎＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ

Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ

Ｐｒｏｇｒａｍ，２００１．

【２９】中华人民共和国卫生部，消毒技术规范，２００９版。

【３０】汤杨，袁林娜，药品中大肠埃希菌可疑菌的鉴定［Ｊ】，药物分析杂质，

２００１１０。

山东大学硕士学位论文

致谢

衷心感谢尊敬的导师王唯红教授在我攻读硕士学位期间给予的精心教导和

帮忙！您严谨的治学态度、渊博的知识，丌阔的教学思维，宽容豁达的处世风

范无不让我深感钦佩，也使我深受启发，让我收获颇多，您的言传身教将使我

一生受用。

衷心感谢鲁抗立科药业有限公司的员工对我学习、工作和生活的指导和帮

忙！感谢公司各位领导对我工作的关心指导，感谢对我的课题计划的制定、进

展和完成。

感谢各位同学们的帮助和支持，祝各位同学们事业有成！感谢所有帮助和

关心过我的人。

攻读硕士学位的过程中充满了艰辛，同时也获得了知识并将获得的知识用

于公司无菌原料药的生产质量管理过程中，为顺利通过《药品生产质量管理规

范》（２０１０年修订）和即将开始的荷兰官方ＧＭＰ审计提供了知识储备。在攻读

硕士期间，我盼望多年的宝宝降生，这给了我无比喜悦和工作的热情，激励着

我克服困难完成学业。

感谢各位专家和教授对本文进行评审，从您们那里一定获得更多的指导和

帮助。

山东大学硕士学位论文

攻读硕士期间发表的文章

１《沉降菌测试沉降碟暴露时间的考察与研究》；《生物技术世界》；２０１３

年４月刊（总第６５期）；２０１３年９月；第６０页；第一位次；国际连续出版物

号：ＩＳＳＮｌ６７４—２０６０；国内统－ｔ：ｌＪ号：ＣＮｌ卜５６７２／Ｑ

９０

学位论文评阅及答辩情况表

专业技术是否博导

总体评价

姓名所在单位

职务（硕导）※

论

匿名略做修改ｌ

、又

匿名略做修改羔

评

阅

人

专业技术

是否博导

姓名

所在单位

职务

（硕导）

主席张庆柱教授是山东大学药学院

郭秀丽教授是山东大学药学院

答

副主任药

辩

俞淑文

师谀山东大学附属中心医院

委

员

委

吴敬德副教授是山东大学药学院

会

成

李凌冰教授是山东大学药学院

员

员

答辩委员会对论

Ｂ答辩秘书黼答辩日期，】移峰饵鸠砖文的总体评价※Ｃ

备注

※优秀为“Ａ”；良好为“Ｂ”；合格为“ｃ”；不合格为“Ｄ”。

非最终灭菌无菌原料药无菌保证的建立与验证

作者：颜宾

学位授予单位：山东大学

引用本文格式：颜宾非最终灭菌无菌原料药无菌保证的建立与验证[学位论文]硕士2013