美藤

130食品安全导刊2016年9月

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美藤果（

Plukenetiavolubilis

Ｌｉｎｎｅｏ）

又名南美油藤、星油藤、印加果等，

是大戟科的一种木质藤木植物，原生

长在南美洲。２００８年底我国引进种源，

２００９年在云南省试验种植，现种植面积

已达３ ３３３余ｈｍ２。美藤果油来源于南

美油藤种籽，富含不饱和脂肪酸，约占

脂肪总含量的９３％，其中必需脂肪酸亚

油酸和α－亚麻酸分别占３７％、４７％，

有调节血脂、预防心血管疾病、抗氧化

等作用［１－２］。此外，美藤果油还含有生

育酚、甾醇、多酚等活性物质。２０１３

年１月，我国国家卫生和计划生育委员

会将其列为新资源食品［３］。

磷虾属于无脊椎动物，是磷虾科

动物的通称。南极磷虾蕴藏量丰富，

是地球上数量最大的单种生物资源之

一。磷虾油是从磷虾中提取的，含有

磷脂、ω－３脂肪酸、虾青素等多种生

物活性成分，具有抑制肝脂肪化、降

血脂、降血糖、预防心血管疾病等功

能［４－７］。此外，磷虾油含有大量的ω－３

长链多不饱和脂肪酸，其中二十碳五

烯酸和二十二碳六烯酸可能与免疫功

能有关［８］。由于美藤果油和磷虾油原

料丰富，营养价值高，近年来关于其

活性研究较多，但对其免疫作用研究

较少，更未见对两者混合物进行研究

的报道。本实验主要研究美藤果油和

磷虾油合剂能否增强小鼠的免疫功能。

1材料与方法

１．１ 材料

１．１．１ 实验动物

选用健康ＳＰＦ昆明种小鼠，体重

１８￣２２ ｇ，由山东大学动物实验中心提

供。急性毒性实验小鼠２０只，雌雄各半。

免疫功能检测实验雌性小鼠２００只，分

为４个免疫大组，每免疫大组又分为水

对照组、溶剂对照组、低、中、高剂量组，

各１０只。免疫１组用于迟发型变态反

应（ＤＴＨ）实验、血清溶血素测定、抗

体生成细胞数测定；免疫２组用于小鼠

碳廓清实验；免疫３组用于小鼠腹腔巨

噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫４组用

于小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠ＮＫ细

胞活性测定。实验环境温度（２２±２）℃，

相对湿度（５０±１０）％。

１．１．２ 受试物及剂量选择

美藤果油和磷虾油合剂（６７％美

藤果油，３３％磷虾油）为红色油状液

体，由云南省现代农林投资有限公司

提供。人体推荐量为每人每日３．０ ｇ／６０

ｋｇ．ｂｗ，按相当于其５、１０、３０倍确定

小鼠的低、中、高剂量，即各组小鼠

每日剂量分别为０．２５ ｇ／ｋｇ．ｂｗ、０．５０ ｇ／

ｋｇ．ｂｗ、１．５０ｇ／ｋｇ．ｂｗ，经口每日一次灌胃，

灌胃体积按１０ ｍＬ／ｋｇ．ｂｗ。灌胃前用玉

米油配制受试物，低、中、高剂量组

受试物的浓度分别为２５ ｇ／Ｌ、５０ ｇ／Ｌ和

１５０ ｇ／Ｌ，水对照组以等体积的蒸馏水

代替受试物，溶剂对照组连续给予等

体积的玉米油，３０ ｄ后测各项免疫指

标。小鼠以远交系小鼠专用饲料喂饲。

１．１．３ 主要仪器设备

紫外分光光度计、酶联免疫检测

仪、光学显微镜、血细胞计数器、２４

孔和９６孔平底细胞培养板、９６孔Ｕ型

底细胞培养板。

１．２ 方法

１．２．１ 急性毒性试验

采用最大耐受量（ＭＴＤ）试验。

小鼠空腹１６ ｈ后，将合剂原液灌胃１

次，容量为０．２２ ｍＬ／１０ｇ．ｂｗ，即剂量为

２０．４６ ｇ／ｋｇ．ｂｗ，连续观察１４ ｄ，记录

中毒表现及死亡情况。

１．２．２ 脏器体重比值测定

小鼠称重后颈椎脱臼处死，取其

胸腺、脾脏，去尽筋膜，用滤纸吸干

脏器表面血污并称重，计算胸腺体重

比值与脾脏体重比值。

１．２．３ 免疫功能检测

细胞免疫功能检测采用迟发型变态

反应（足跖增厚法，ＤＴＨ）和ＣｏｎＡ诱导

的脾淋巴细胞转化实验（ＭＴＴ法）；体

液免疫功能检测采用抗体生成细胞测定

（Ｊｅｒｎｅ改良玻片法）和血清溶血素的

测定；单核－巨噬细胞功能检测采用小

鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬

鸡红细胞实验（半体内法）；ＮＫ细胞

活性测定采用乳酸脱氢酶ＬＤＨ测定法。

１．２．４ 结果判定依据

根据原卫生部颁发的《保健食品

检验与评价技术规范（２００３年版）》

中关于急性毒性分级标准和增强免疫

力功能判定标准。

１．２．５ 统计学处理

采用ＳＰＳＳ １９．０软件进行统计分

析，计量资料以xs±表示。对所得

数据进行完全随机设计单因素方差分

析（不符合应用条件时需进行数据转

换），进一步两两比较采用ＬＳＤ－ｔ法。

P

＜０．０５为差异有统计学意义。

2结果

２．１ 急性毒性试验结果

两种性别的小鼠均未见明显的中

毒症状，也无死亡。将受试小鼠处死

后进行解剖检查，肝脏、脾脏、肾脏、

心脏、肺、胃和肠等主要器官，均未

美藤果油和磷虾油合剂对小鼠免疫功能的影响

□于学芹 山东大学公共卫生学院、山东医药技师学院中药系马 晓 刘厚福 赵 丽 山东大学公共卫生学院

李文广 云南省现代农林投资有限公司赵长峰山东大学公共卫生学院

摘 要：

探讨美藤果油和磷虾油合剂对小鼠免疫功能的影响，经口给予小鼠不同剂量的美藤果油和磷虾油合剂30d，

检测其体重增长、脾脏和胸腺体重比值以及各项免疫功能指标。结果表明，各组间小鼠体重增长差异无显著性（

P

＞0.05），

小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值差异亦无显著性（

P

＞0.05），小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、NK细胞活性测定结

果均为阳性，小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能测定结果为阴性。美藤果油和磷虾油合剂具有增强小鼠免疫功能的作用。

关键词：

美藤果油；磷虾油；合剂；免疫功能；小鼠

DOI:10.16043/.2016.27.107

Sep.2016

CHINAFOODSAFETY131

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见明显异常改变。受试样品对两种性

别小鼠的ＭＴＤ均大于２０．４６ ｇ／ｋｇ．ｂｗ，

判定合剂属无毒级。

２．２ 不同组间小鼠体重、脏器体重比值

比较

小鼠初始体重均数在各组间

差异无统计学意义（

F

＝０．２１１，

P

＝０．９３１），说明体重分布较为均衡。

灌胃３０ ｄ后，体重增长值均数在各组

间差异均无统计学意义（

F

＝０．３６２，

P

＝０．８３４）。小鼠脾脏体重比值均数

（

F

＝０．２０４，

P

＝０．９３５）和胸腺体重比

值均数（

F

＝０．５９８，

P

＝０．６６６）在各组

间比较，差异亦无统计学意义，见表１。

２．３ 各剂量组小鼠细胞免疫功能指标

比较

小鼠迟发型变态反应结果显示，小

鼠足跖肿胀度均数在各组间比较差异

有统计学意义（

F

＝４．３４３，

P

＝０．００５），

见表２。ＬＳＤ两两比较法结果显示，足

跖肿胀度均数在低剂量组与水对照组

（

P

＝０．７４７）、低剂量组与溶剂对照组

（

P

＝０．９１６）间比较，差异无统计学意义；

在中剂量组与水对照组（

P

＝０．００９）、高

剂量组与水对照组（

P

＝０．００３）、中剂量

组与溶剂对照组（

P

＝０．０２６）、高剂量组

与溶剂对照组间（

P

＝０．０１１）比较，差

异均有统计学意义，即中、高剂量组迟

发型变态反应能力均高于对照组。

ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转

化实验结果显示，各组间的淋巴细

胞增殖能力均数差异无统计学意义

（

F

＝０．４６４，

P

＝０．７６２），见表２。

２．４ 各剂量组小鼠体液免疫功能指标

比较

小鼠抗体生成细胞数测定表明各

组间抗体生成细胞数均数差异无统计

学意义（

F

＝０．２０５，

P

＝０．９３４），见表２。

小鼠血清溶血素实验中，各组间

抗体积数均数在各组间差异有统计学

意义（

F

＝４．７９０，

P

＝０．００３）。ＬＳＤ两两

比较法结果显示，低剂量组与水对照

组、低剂量组与溶剂对照组间比较，

差异无统计学意义；中剂量组与水对

照组、高剂量组与水对照组、中剂量

组与溶剂对照组、高剂量组与溶剂对

照组间比较，差异均有统计学意义，

即中、高剂量组小鼠抗体产生的量高

于对照组，见表２。

２．５ 不同剂量组小鼠非特异性免疫功能

指标比较

２．５．１ 小鼠单核巨噬细胞吞噬功能

影响

采用小鼠单核－巨噬细胞碳廓清

能力测定实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞

噬鸡红细胞能力测定实验。前者吞噬

指数１均数在各组间差异无统计学意义

（

F

＝０．３７１，

P

＝０．８２８）。后者吞噬率不符

合方差分析条件，进行平方根反正弦转

换后进行方差分析；结果显示吞噬率平

方根反正弦转换值（

F

＝０．４８６，

P

＝０．７４６）

和吞噬指数２（

F

＝０．０７０，

P

＝０．９９１）在各

组间差异无统计学意义，见表３。

２．５．２ 小鼠ＮＫ细胞活性改变

小鼠ＮＫ细胞活性百分率不符合方

差分析条件，将百分率进行平方根反

正弦转换后进行方差分析。灌胃合剂

后，小鼠ＮＫ细胞活性率平方根反正弦

转换值均数在各组间差异有统计学意

义（

F

＝５．３８０，

P

＝０．００１）。ＬＳＤ两两比较

法结果显示，低剂量组与水对照组、

中剂量组与水对照组、低剂量组与溶

剂对照组、中剂量组与溶剂对照组间

比较，差异有统计学意义，即低、中

剂量组小鼠ＮＫ细胞活性高于对照组；

高剂量组与水对照组（

P

＝０．０８７）、高

剂量组与溶剂对照组（

P

＝０．０６１）间比

较，差异无统计学意义，见表３。

3讨论

Ｔ细胞、Ｂ细胞介导的细胞免疫和

体液免疫是反映机体免疫调节平衡状

态的重要参数，单核巨噬细胞的吞噬功

能、ＮＫ细胞活性可衡量机体非特异性

免疫功能。美藤果油和磷虾油合剂可增

加小鼠的迟发型变态反应能力和小鼠血

清溶血素水平（两者均有两个剂量为阳

性），即增强小鼠的细胞和体液免疫功

能，同时还能增加小鼠ＮＫ细胞活性，

因此，可认为美藤果油和磷虾油合剂可

增强小鼠的免疫功能。此结果可能与

ｎ－３多不饱和脂肪酸有关［８－９］，还可能

与虾青素提高免疫力作用有关［１０］。

ＤＴＨ是由Ｔ淋巴细胞介导的超敏

反应，它无需抗体或补体参加，在变

应原的作用下形成致敏淋巴细胞，当

再次接触相同变应原时，可表现出一

种迟缓（至少约１２ ｈ后才出现反应，

２４～７２ ｈ达高峰）以细胞变性坏死为

特征的局部变态反应性炎症，具体到

本研究采用的是足趾增厚法，以攻击

前后足趾厚度之差值（足趾肿胀度）

表示ＤＴＨ的程度，反映细胞免疫功能。

ＤＴＨ实验和血清溶血素实验，两者均是

中剂量组和高剂量组与对照组差异有

显著性意义，可能由于美藤果油和磷

虾油合剂剂量和小鼠免疫功能之间存

在剂量反应关系，需要达到一定的量

才能发挥出作用。ＮＫ细胞是一类非特

异性免疫细胞，它无需提前接触抗原

即可杀伤靶细胞，且其杀伤效应无主

要组织相容性复合体限制性，不依赖

抗体；它是机体抗肿瘤、抗感染的重

要免疫因素，也参与第Ⅱ型超敏反应，

还能分泌多种细胞因子，发挥调节免

疫、造血和直接杀伤靶细胞的作用。

ＮＫ细胞活性增强说明非特异性免疫功

能有一定改善。美藤果油和磷虾油合

剂低剂量组、中剂量组活性明显高于

表1 不同组间小鼠脏器体重比值比较（

n

=10）

组别脾脏体重比值（mg/g）胸腺体重比值（mg/g）

水对照组5.34±0.723.24±0.58

溶剂对照组5.32±0.713.30±0.64

低剂量组5.21±0.733.21±0.79

中剂量组5.47±0.903.48±0.79

高剂量组5.21±0.673.62±0.76

F值0.2040.598

P值0.9350.666

132食品安全导刊2016年9月

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对照组，而高剂量与对照组差异无显

著性，原因可能是磷虾油蛋白肽中的

重金属元素（如氟、铜）对小鼠的毒

性作用［５］，可进一步研究磷虾油蛋白

脱脂肽的毒性和食用安全性。

美藤果油和磷虾油合剂对小鼠的

脾脏体重比值和胸腺体重比值无影响，

与徐恺［５］，周大勇［１１］等研究结果不一

致，可能因为本研究的是美藤果油和

磷虾油合剂，而后者则只研究磷虾油，

也有可能跟剂量有关。美藤果油和磷

虾油合剂对小鼠单核－巨噬细胞吞噬

功能亦无影响，与周大勇［１１］等研究结

果不一致，可能由剂量不同所致。

综上所述，美藤果油和磷虾油合

剂对小鼠免疫功能具有增强作用。食

用油在人们日常生活中不可或缺，近年

来我国食用植物油供需形势严峻，自给

率只有４０％左右，约６０％食用植物油依

赖进口［１２－１３］。美藤果种植周期短，美

藤果油和磷虾油资源丰富，作为新资源

食品，两者的共同特点是富含蛋白质和

不饱和脂肪酸，不仅营养价值高，且具

有多种生物活性。本研究发现两者混合

使用可增强小鼠免疫功能，因此，预测

美藤果油和磷虾油合剂将来会有较好的

食用价值和市场前景。

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表2各剂量组小鼠细胞和体液免疫功能指标比较（

n

=10）

组别足跖肿胀度（mm）淋巴细胞增殖能力（吸光度差值）抗体生成细胞数（×103/全脾）抗体积数

水对照组0.27±0.110.238±0.05071.55±20.80147.50±40.49

溶剂对照组0.29±0.130.229±0.07376.05±19.88152.00±35.85

低剂量组0.29±0.150.211±0.06874.18±18.61155.60±39.64

中剂量组0.44±0.16*0.243±0.07077.18±27.36190.50±30.09*

高剂量组0.46±0.15*0.251±0.07680.78±30.92204.60±39.09*

F值4.3430.4640.2054.790

P值0.0050.7620.9340.003

*表示分别与水对照组、溶剂对照组比，

P

<0.05。

表3 不同剂量组小鼠非特异性免疫功能指标比较（

n

=10）

组别吞噬指数1吞噬率平方根反正弦转换值吞噬指数2NK细胞活性平方根反正弦转换值

水对照组6.22±0.490.49±0.110.33±0.120.38±0.08

溶剂对照组5.97±0.520.56±0.170.35±0.130.37±0.08

低剂量组6.22±0.440.50±0.120.34±0.130.45±0.06*

中剂量组6.09±0.570.51±0.130.35±0.130.51±0.08*

高剂量组6.11±0.630.50±0.120.34±0.120.44±0.09

F值0.3710.4860.0705.380

P值0.8280.7460.9910.001

*表示分别与水对照组、溶剂对照组比，

P

<0.05。