TAE缓冲液

常用缓冲液及培养基配方

LB液体培养基：

Bacto-蛋白胨10g

酵母抽提物5g

氯化钠10g

加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。

LB固体培养基：

每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。

SOB液体培养基

Bacto-

蛋白胨

20g

酵母抽提物

5g

NaCl0.5g

加

950ml

水溶解，加入

250mmol/LKCl

溶液

10ml

，用

5NNaOH

调

pH

至

7.0

，定容至

1000

ml

，高压灭菌后保存。使用前加入

5ml

经灭菌的

2mol/LMgCl2。

SOC液体培养基

SOB

中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为

20mmol/L

。

麦康凯固体培养基

每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。

NA固体培养基

牛肉浸膏3g

酵母浸膏1g

蛋白胨

蔗糖

琼脂粉

5g

10g

15g

加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。

TB培养基：

将下列组分溶解在0.9L水中：

Bacto-蛋白胨12g

酵母抽提物24g

甘油4ml

各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH

2

PO

4

/

0.72mol/LK

2

HPO

4

的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。

溶液Ⅰ

葡萄糖

2.25g50mmol/L

1mol/LTris

·

Cl(pH8.0)6.25ml20mmol/L

0.5mol/LEDTA(pH8.0)5ml10mmol/L

调

pH

至

8.0

后，用水定容至

250ml

，高压灭菌后保存。

溶液Ⅱ

10mol/LNaOH2ml

10%SDS10ml

用水定容至

100ml

，现配现用。

溶液Ⅲ

5mol/L

醋酸钾

60ml

冰醋酸

11.5ml

水

28.5ml

高压灭菌后保存。

高盐TE缓冲液

10mmol/,pH8.0*

0.1mmol/LEDTA,pH8.0*

1mol/LNaCl

于室温保存（可在几年内保持稳定）

CTAB抽提液

2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵)

100mmol/,pH8.0*

1.4mol/LNaCl

于室温保存（可在几年内保持稳定）

CTAB/NaCl溶液（10%CTAB/0.7mol/LNaCl）

在80mlH

2

O中溶解4.1gNaCl,缓慢加入10一CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加

热并搅拌。如果需要，可加热至65℃溶解。定容终体积至100ml.

CTAB沉淀液

1%（w/v）CTAB

50mmol/,pH8.0

10mmol/LEDTA,pH8.0

PBS缓冲液：

十二水磷酸氢二钠15g

磷酸二氢钾1g

氯化钠40g

氯化钾1g

定容至5000ml,调pH至7.2。

ELISA包被液：

碳酸钠1.59g

碳酸氢钠2.93g

定容至1000ml，调pH至9.6。

ELISA洗涤液(0.01MPBST)：

5000mlPBS中加2.5ml吐温-20

显色液（底物溶液-邻苯二胺溶液）：

pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液：0.1M柠檬酸（19.2g/L）24.3ml、0.2MNa

2

HPO

4

(28.4

g/L)25.7ml、临用时取上述溶液10ml,加邻苯二胺（OPD）4mg，溶解后加入30％H

2

O

2

15

µl；

终止液：2MH

2

SO

4

TE缓冲液(pH8.0)：

Tris·HCl(pH8.0)10mmol/L

EDTA(pH8.0)1mmol/L

高压灭菌。

10%SDS：

10g十二烷基硫酸钠溶于90ml水中，加热至68℃溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2，定

容至100ml，过滤除菌。

50×TAE缓冲液

Tris242g

冰醋酸

57.1ml

0.5mol/LEDTA(pH8.0)100ml

用水定容至

1000ml

，用时稀释

50

倍。

5×TBE缓冲液：

Tris碱*54g

硼酸27.5ml

0.5mol/LEDTA(pH8.0)20ml

加水定容至1000ml，0.5×使用。

6×DNA上样缓冲液：

0.25%溴酚蓝*

0.25%二甲苯青FF*

30%甘油

甲醛凝胶加样缓冲液(DEPC处理水配制)：

50%甘油

1mmol/LEDTA(pH8.0)

0.25溴酚蓝*

0.25二甲苯青FF*

适量溴化乙锭*

20×SSC：

氯化钠175.3g

柠檬酸钠88.2g

蒸馏水900ml

溶解后用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌保存。

预杂交液：

6×SSC

5×Denhardt试剂

0.5%SDS

100ug/ml经变性并断裂成片段的鲑精DNA

5×甲醛凝胶电泳缓冲液：

0.1mol/LMOPS(pH7.0)*

40mmol/L乙酸钠

5mmol/LEDTA(pH8.0)*

甲醛变性凝胶配方：

加入0.7g琼脂糖到49.7mlDEPC-H2O中，用煮沸法溶解琼脂糖，待溶液冷却至55℃

同时加入7ml10×MOPS（0.2mol/LMOPSpH7.0,20mmol/L乙酸钠，10mmol/LEDTA

pH8.0）电泳缓冲液和13.3ml甲醛，摇匀，制板待用。

0.5mol/L磷酸缓冲液（PH7.2）

134gNa2HPO4,4ml85%H3PO4,用水定容至1L。

探针标记中的逆转录终止液1×TEN

40mmol/LTris-Cl(PH7.5),1mmol/LEDTA(PH8.0),150mmol/LNaCl。

洗膜液Ⅰ2×SSC，0.1％（m/V）SDS

洗膜液Ⅱ0.1×SSC，0.1％（m/V）SDS

SDS-PAGE电泳分析所用的试剂：

30%丙烯酰胺：29g丙烯酰胺和1gN，N’亚甲基双丙烯酰胺，加入60mlddH

2

O，完

全溶解后定容至100ml，过滤，置棕色瓶中备用。

Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，调pH至8.3，用水定容至

1L。

12%分离胶：ddH

2

O3.3ml，30%丙烯酰胺4ml，Tris-HCl（pH8.8）2.5ml，10%SDS0.1ml，

10%过硫酸铵0.1ml，TEMED0.006ml。

5%浓缩胶：ddH

2

O1.4ml，30%丙烯酰胺0.33ml，Tris-HCl（pH6.6）0.25ml，

10%SDS0.02ml，10%过硫酸铵0.02ml，TEMED0.002ml。

考马斯亮蓝染色液：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH

2

O450ml，考马斯亮蓝R-2502.5g。

脱色液（1L）：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O450ml。

2×上样缓冲液：100mmol/LTris-HCl（pH6.8），200mmol/L二硫苏糖醇（DTT），

4%SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油。

蛋白纯化所需的缓冲液：

BufferB(pH8.0)：8Murea、100mMNaH

2

PO

4

、10mMTris-Cl

BufferC(pH6.3)：8Murea、100mMNaH

2

PO

4

、10mMTris-Cl

BufferD(pH5.9)：8Murea、100mMNaH

2

PO

4

、10mMTris-Cl

BufferE(pH4.5)：8Murea、100mMNaH

2

PO

4

、10mMTris-Cl

电洗脱缓冲液：

SDS0.1-0.5g

Tris-Ba3g

甘氨酸18.8g

定容至1000ml

蛋白提取缓冲液：

Tris-HCl，pH6.850mmol/L

SDS4.5%

-疏基乙醇

尿素

7.5%

9mol/L

电转移缓冲液：

Tris-Ba3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，甲醇200ml，调pH至8.3，用水定容至1L。

Westernblot所用试剂：

1×PBS(pH7.4)：NaCl8g，KCl0.2g，KH

2

PO

4

0.24g，Na

2

HPO

4

1.44g，用蒸馏水溶解

至1L

1×PBST：5L1×PBS中加入2.5mlTween-20

封闭液：100mlPBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉

植物基本培养基溶液

大量元素（1L）

七水硫酸镁370mg

磷酸二氢钾170mg

硝酸钾1900mg

硝酸氨1650mg

二水氯化钙440mg

微量元素（1L)

硼酸6.2mg

一水硫酸锰15.6mg

七水硫酸锌8.6mg

二水钼酸钠0.25mg

五水硫酸铜0.025mg

六水氯化钴0.025mg

碘化钾0.83mg

七水硫酸亚铁27.8mg

乙二铵二乙酸二钠37.3mg

有机(1L)

盐酸硫胺素0.5mg

盐酸吡哆辛0.5mg

烟酸0.05mg

肌醇100mg

MSs培养基

10×大量100ml

100×微量10ml

100×铁盐10ml

500×B5有机2ml

6-BA1mg

蔗糖30g

琼脂0.8%

调PH5.8并加水定容至1L

Msr（1L）

10×大量元素100ml

100×微量元素10ml

100×Fe盐10ml

500×B5有机2ml

蔗糖3g

葡萄糖7g

琼脂0.8%

PH5.8加水定容至1L

水稻转化用培养基

培养基成分

NB(基本培养基)

(刘巧泉等,1998)

N6大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、B5微量元素营养液、B5

维生素营养液

Nbi(愈伤诱导和继代

培养基)

NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L

蔗糖、2mg/L2,4-D、2.6g/L植物胶，pH5.8

高渗培养基Nbi、47g/L山梨醇、47g/L甘露醇，pH5.8

NBs(筛选培养基)NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L

蔗糖、2mg/L2,4-D、40mg/LHyg(第二次筛选用量为50mg/L)、

2.6g/L植物胶，pH5.8

MS(再生培养基)MS大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、MS微量元素营养液、

B5维生素营养液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、

2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.8

NBr(再生培养基)NB、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L6-BA、

0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.8

1/2MS(生根培养基)1/2(MS大量元素营养液+EDTA-Fe营养液+MS微量元素营养液)、

B5维生素营养液、3g/L蔗糖、7g/L葡萄糖、40mg/LHyg、2.6g/L

植物胶，pH5.8

水稻转化用激素和化合物的配制

(1)2,4-D(1mg/ml)：称取100mg2,4-D置于小烧杯内，加少量无水乙醇使之完全溶解后，将

水缓慢加入不停搅拌的2,4-D酒精溶液中，不可出现沉淀，定容至100ml，过滤除菌。

(2)6-BA(1mg/ml)：称取100mg6-BA置于小烧杯内，加少量1MKOH溶解，慢慢加灭菌蒸

馏水至100ml，过滤除菌，4℃保存。

(3)NAA(1mg/ml)：称取100mgNAA置于小烧杯内，用1MKOH溶解，慢慢加灭菌蒸馏水

至100ml，过滤除菌，4℃保存。