标准曲线法

请问如何绘制标准曲线标准曲线的作法

（1）标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括

待测样品的可能变异最低与最高值，一般可选择5种浓度。浓度差距最好是成倍增加

或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。

（2）标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少

仪器不稳定而产生的误差。

（3）标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度一浓度标准曲线。

①用普通方格纸作图。图纸最好是正方形（长：宽=1:1）或长方形（长：宽=3:2）,

以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占

用相同的格数。

在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度

位置向上延长，光密度位置向右延长、交点即为此座标标点。然后，将各座标点和原

点联成一条线，若符合Lambert-Beer氏定律，则系通过原点的直线。

②若各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上

的点尽量均匀地分布在直线的两边。

③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的

型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。

④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应

用。

⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。当

更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。

⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。

标准曲线法法也称外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法。

与分光光度分析中的标准曲线法相似，首先用欲测组分的标准样品绘制标准曲线。具

体方法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的色谱条件下，

等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲

线，此标准曲线应是通过原点的直线。若标准曲线不通过原点，则说明存在系统误差。

标准曲线的斜率即为绝对校正因子。

在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱

图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上直接查出注入色谱

柱中样品组分的浓度。

标准曲线法的优点是：绘制好标准工作曲线后测定工作就变得相当简单，可直接

从标准工作曲线上读出含量，因此特别适合于大量样品的分析。

标准曲线法的缺点是：每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温，流

动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。止匕外，

标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品

（或已知准确含量的样品），而实际样品的组成却千差万别，因此必将给测量带来一

定的误差。