...
..
...w
常用缓冲溶液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/LHCI，再加水稀释至200毫升
pHXYpHXY
2.0
2.4
2.6
2.8
50
50
50
50
44.0
32.4
24.2
16.8
3.0
3.2
3.4
3.6
50
50
50
50
11.4
8.2
6.4
5.0
甘氨酸分子量=75.07，0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+0.2mol/LHCl，再加水稀释到20毫升
pH(20℃)XYpH(20℃)XY
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
5
5
5
5
5
4.070
3.960
3.295
2.642
2.022
3.2
3.4
3.6
3.8
5
5
5
5
1.470
0.990
0.597
0.263
邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23，0.2mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
pH0.2mol/L
Na
2
HPO
4
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
pH0.2mol/L
Na
2
HPO
4
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
4.8
5.0
0.40
1.24
2.18
3.17
4.11
4.94
5.70
6.44
7.10
7.71
8.28
8.82
9.35
9.86
10.30
10.60
18.76
17.82
16.83
15.89
15.06
14.30
13.56
12.90
12.29
11.72
11.18
10.65
10.14
9.70
5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
10.72
11.15
11.60
12.09
12.63
13.22
13.85
14.55
15.45
16.47
17.39
18.17
18.73
19.15
19.45
9.28
8.85
8.40
7.91
7.37
6.78
6.15
5.45
4.55
3.53
2.61
1.83
1.27
0.85
0.55
Na
2
HPO
4
分子量=14.98，0.2mol/L溶液为28.40克/升。
Na
2
HPO
4
·2H
2
O分子量=178.05，0.2mol/L溶液含35.01克/升。
C
4
H
2
O
7
·H
2
O分子量=210.14，0.1mol/L溶液为21.01克/升。
...
..
...w
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
pH钠离子浓度
（mol/L）
柠檬酸（克）
C
6
H
8
O
7
·H
2
O
氢氧化钠(克)
NaOH97%
盐酸（毫升）
HCl（浓）
最终体积
（升）①
2.2
3.1
3.3
4.3
5.3
5.8
6.5
0.20
0.20
0.20
0.20
0.35
0.45
0.38
210
210
210
210
245
285
266
84
83
83
83
144
186
156
160
116
106
45
68
105
126
10
10
10
10
10
10
10
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶
液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）
pH0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
pH0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
4.8
18.6
17.2
16.0
14.9
14.0
13.1
12.3
11.4
10.3
9.2
1.4
2.8
4.0
5.1
6.0
6.9
7.7
8.6
9.7
10.8
5.0
5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
8.2
7.3
6.4
5.5
4.7
3.8
2.8
2.0
1.4
11.8
12.7
13.6
14.5
15.3
16.2
17.2
18.0
18.6
柠檬酸C
6
H
8
O
7
·H
2
O：分子量210.14，0.1mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na
3
C
6
H
5
O
7
·2H
2
O：分子量294.12，0.1mol/L溶液为29.41克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2mol/L）
pH(18℃)
0.2mol/L
NaAc
(毫升)
0.3mol/L
HAc
(毫升)
pH(18℃)
0.2mol/L
NaAc
(毫升)
0.3mol/L
HAc
(毫升)
2.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
0.75
1.20
1.80
2.65
3.70
4.90
9.25
8.80
8.20
7.35
6.30
5.10
4.8
5.0
5.2
5.4
5.6
5.8
5.90
7.00
7.90
8.60
9.10
9.40
4.10
3.00
2.10
1.40
0.90
0.60
Na
2
Ac·3H
2
O分子量=136.09，0.2mol/L溶液为27.22克/升。
...
..
...w
7．磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）
pH
0.2mol/L
Na
2
HPO
4
(毫升)
0.2mol/L
NaH
2
PO
4
(毫升)
pH
0.2mol/L
Na
2
HPO
4
(毫升)
0.2mol/L
NaH
2
PO
4
(毫升)
5.8
5.9
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
8.0
10.0
12.3
15.0
18.5
22.5
26.5
31.5
37.5
43.5
49.5
55.0
92.0
90.0
87.7
85.0
81.5
77.5
73.5
68.5
62.5
56.5
51.0
45.0
7.0
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
8.0
61.0
67.0
72.0
77.0
81.0
84.0
87.0
89.5
91.5
93.0
94.7
39.0
33.0
28.0
23.0
19.0
16.0
13.0
10.5
8.5
7.0
5.3
Na
2
HPO
4
·2H
2
O分子量=178.05，0.2mol/L溶液为85.61克/升。
Na
2
HPO
4
·12H
2
O分子量=358.14，0.2mol/L溶液为71.628克/升。
NaH
2
PO
4
·2H
2
O分子量=156.01，0.2mol/L溶液为31.202克/升。
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa
值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaH
2
PO
4
：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；
Na
2
HPO
4
：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32
配酸性缓冲液：用NaH
2
PO
4
，pH＝1～4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，
配碱性缓冲液：用Na
2
HPO
4
，pH＝10～12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电
泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难
溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH
受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于0.1。
其缺点为：①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；
②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15mol/L）
pHmol/L/15Na
2
HPO
4
(毫升)
mol/L//15KH
2
PO
4
(毫升)
pHmol/L//15Na
2
HPO
4
(毫升)
mol/L//15KH
2
PO
4
(毫升)
...
..
...w
4.92
5.29
5.91
6.24
6.47
6.64
6.81
6.98
0.10
0.50
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
9.90
9.50
9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00
7.17
7.38
7.73
8.04
8.34
8.67
8.18
7.00
8.00
9.00
9.50
9.75
9.90
10.00
3.00
2.00
1.00
0.50
0.25
0.10
0
Na
2
HPO
4
·2H
2
O分子量=178.05，1/15M溶液为11.876克/升。
KH
2
PO
4
分子量=136.09，1/15M溶液为9.078克/升。
8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2MK
2
PO
4
+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至29毫升
pH(20℃)X(毫升)Y（毫升）pH(20℃)X(毫升)Y（毫升）
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
5
5
5
5
5
5
0.372
0.570
0.860
1.260
1.780
2.365
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
5
5
5
5
5
5
2.963
3.500
3.950
4.280
4.520
4.680
9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）
pH0.04M巴比妥
钠溶液
0.2V盐酸pH0.04M巴比
妥钠溶液(毫
升)
0.2N盐酸(毫
升)
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
8.2
100
100
100
100
100
100
100
100
18.4
17.8
16.7
15.3
13.4
11.47
9.39
7.21
8.4
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4
9.6
100
100
100
100
100
100
100
100
5.21
3.82
2.52
1.65
1.13
0.70
0.35
巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升
10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100
毫升。
pHX(毫升)pHX(毫升)
7.10
7.20
7.30
7.40
45.7
44.7
43.4
42.0
8.10
8.20
8.30
8.40
26.2
22.9
19.9
17.2
...
..
...w
7.50
7.60
7.70
7.80
7.90
8.00
40.3
38.5
36.6
34.5
32.0
29.2
8.50
8.60
8.70
8.80
8.90
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0
三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2CH2OH
C
HOCH2NH2
分子量=121.14;
0.1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）
pH0.05M硼砂
（毫升）
0.2M硼酸
（毫升）
pH0.05M硼砂
（毫升）
0.2M硼酸
（毫升）
7.4
7.6
7.8
8.0
1.0
1.5
2.0
3.0
9.0
8.5
8.0
7.0
8.2
8.4
8.7
9.0
3.5
4.5
6.0
8.0
6.5
5.5
4.0
2.0
硼砂Na
2
B
4
O
7
·10H
2
O,分子量=381.37;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H
3
BO
3
,分子量=61.83,0.2M溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升
pHXYpHXY
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4
50
50
50
50
50
4.0
6.0
8.8
12.0
16.8
9.6
9.8
10.0
10.4
10.6
50
50
50
50
50
22.4
27.2
32.0
38.6
45.5
甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升
pHXYpHXY
9.3
9.4
9.6
50
50
50
6.0
11.0
23.0
9.8
10.0
10.1
50
50
50
34.0
43.0
46.0
硼砂Na
2
B
4
O
7
·10H
2
O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
pH0.1MNa
2
CO
3
(毫升)0.1MN
2
HCO
3
(毫升)
...
..
...w
20℃37℃
9.16
9.40
9.51
9.78
9.90
10.14
10.28
10.53
10.83
8.77
9.12
9.40
9.50
9.72
9.90
10.08
10.28
10.57
1
2
3
4
5
6
7
8
9
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Na
2
CO
2
·10H
2
O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。
N
2
HCO
3
分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。
15．“PBS”缓冲液
pH7.67.47.27.0
H
2
O
NaCl
Na
2
HPO
4
NaH
2
PO
4
1000
8.5
2.2
0.1
1000
8.5
2.2
0.2
1000
8.5
2.2
0.3
100ml
8.5g
2.2g
0.4g
...
..
...w
pH标准缓冲溶液
StandardpHBufferSolutions
名称
(Name)
配制
(Compoundingway)
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
草酸盐
标准缓
冲溶液
c[KH3(C2O4)2·2H2O]
为0.05mol/L。称取
12.71g四草酸钾
[KH3(C2O4)2·2H2O]溶
于无二氧化碳的水
中，稀释至1000ml
1.671.671.671.671.681.681.691.691.69
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
1.701.711.721.721.741.771.791.81-
酒石酸
盐标准
缓冲溶
液
在25℃时，用无二
氧化碳的水溶解外
消旋的酒石酸氢钾
(KHC4H4O6)，并剧烈
振摇至成饱和溶液
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
-----3.563.553.553.55
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
3.553.553.553.563.583.613.653.67-
苯二甲
酸氢盐
标准缓
冲溶液
c(C6H4CO2HCO2K)为
0.05mol/L，称取于
(115.0±5.0)℃干
燥2～3h的邻苯二
甲酸氢钾（KHC8H4O4）
10.21g，溶于无CO2
的蒸馏水，并稀释至
1000ml
（注：可用于酸度计
校准）
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
4.004.004.004.004.004.014.014.024.04
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
4.054.064.084.094.134.164.214.23-
磷酸盐
标准缓
冲溶液
分别称取在(115.0
±5.0)℃干燥2～
3h的磷酸氢二钠
（Na2HPO4）(3．53
±0．01)g和磷酸二
氢钾（KH2PO4）(3．39
±0．01)g，溶于预
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
6.986.956.926.906.886.866.856.846.84
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
...
..
...w
先煮沸过15～
30min并迅速冷却
的蒸馏水中，并稀释
至1000ml（注：可
用于酸度计校准）
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
6.836.836.836.846.856.866.886.89-
硼酸盐
标准缓
冲溶液
c(Na2B4O7·10H2O)称
取硼砂
（Na2B4O7·10H2O）
(3．80±0．01)g
（注意：不能烘！），
溶于预先煮沸过
15～30min并迅速
冷却的蒸馏水中，并
稀释至1000ml。置
聚乙烯塑料瓶中密
闭保存。存放时要防
止空气中的CO2的进
入（注：可用于酸度
计校准）
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
9.469.409.339.279.229.189.149.109.06
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
9.049.018.998.968.928.898.858.83-
氢氧化
钙标准
缓冲溶
液
在25℃，用无二氧
化碳的蒸馏水制备
氢氧化钙的饱和溶
液。氢氧化钙溶液的
浓度c[1/2Ca(OH)2]
应在（0.0400～
0.0412）mol/L。氢
氧化钙溶液的浓度
可以酚红为指示剂，
用盐酸标准溶液
[c(HCl)=0.1mol/L]
滴定测出。存放时要
防止空气中的二氧
化碳的进入。出现混
浊应弃去重新配制
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
0℃5℃10℃15℃20℃25℃30℃35℃40℃
13.4213.2113.0012.8112.6312.4512.3012.1411.98
不同温度时的pH值(pHindifferenttemperatures)
45℃50℃55℃60℃70℃80℃90℃95℃-
11.8411.7111.5711.45-----
注：为保证pH值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用pH基准试剂配制。
...
..
...w
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
PreparationandpHValuesofCommonpHBufferSolutions
序号
(No.)
溶液名称
(Solutionname)
配制方法
(Preparation)
pH值
(pHvalue)
1氯化钾-盐酸
13.0ml0.2mol/LHCl与25.0ml0.2
mol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml
1.7
2氨基乙酸-盐酸
在500ml水中溶解氨基乙酸150g，加480ml
浓盐酸，再加水稀释至1L
2.3
3一氯乙酸-氢氧化钠
在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40
gNaOH，溶解完全后再加水稀释至1L
2.8
4
邻苯二甲酸氢钾-盐
酸
把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液
与6.0ml0.1mol/LHCl混合均匀，加水稀释
至100ml
3.6
5
邻苯二甲酸氢钾-氢
氧化钠
把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液
与17.5ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水
稀释至100ml
4.8
6六亚甲基四胺-盐酸
在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g，加浓
HCl10ml，再加水稀释至1L
5.4
7
磷酸二氢钾-氢氧化
钠
把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氢钾与23.6ml
0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
6.8
8
硼酸-氯化钾-氢氧
化钠
把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与4.0ml
0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
8.0
9氯化铵-氨水
把0.1mol/L氯化铵与0.1mol/L氨水以2：
1比例混合均匀
9.1
10
硼酸-氯化钾-氢氧
化钠
把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与43.9
ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至
100ml
10.0
11
氨基乙酸-氯化钠-
氢氧化钠
把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化钠与
51.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀
11.6
12
磷酸氢二钠-氢氧化
钠
把50.0ml0.05mol/LNa2HPO4与26.9
ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至
100ml
12.0
13氯化钾-氢氧化钠
把25.0ml0.2mol/LKCl与66.0ml0.2
mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
13.0
本文发布于:2022-12-09 02:38:16，感谢您对本站的认可！
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