酶活力单位

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固态发酵漆酶活性测定：

酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200r/min摇3h，之

后5000r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取能

整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）

酶活反应体系3.0mL（2.3mL0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5

0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL1mmol/L的ABTS）

420nm处测定吸光值的变化。

此实验固态发酵漆酶活性计算公式：

5g0.5mL

100mL

LT36000V

10

)g(/U

3

420











酶

总

ODVN

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

36000:420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm)

T：反应时间（min）

L为比色皿的直径（cm）。

100mL/(0.5mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

液态发酵漆酶活性测定：

酶活反应体系3.0mL（2.3mL0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5

0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL1mmol/L的ABTS）

LT36000V

10

)g(/U

酶

3

420

总







ODVN

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

36000:420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/mol·cm)

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T：反应时间（min）

L为比色皿的直径（cm）。

固态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：

酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔2d取5g发酵物于250mL三角

瓶中，加入100mLH

2

O，在200r/min的摇床中振荡提取3h，之后5000r/min

离心20min。（用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP酶活性。）

在4mL反应体系中含50mmol/L(pH4～5)的乳酸钠缓冲液3.4mL，1.

6mmol/L的硫酸锰溶液0.1mL，酶液0.4mL，预热至37℃时，加1.6mmol

/L的H

2

O

2

溶液0.1mL启动反应。在238nm紫外光处，测定反应4min内

OD

238

差值。在对照组中，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替

H

2

O

2

溶液，其他反应物不变。每分钟使1μmol/L的Mn2+转化为Mn3+所需的酶

量为1个酶活力单位(U)。(ε238=-1)

此实验固态发酵MnP活性计算公式：

5g0.4mL

100mL

LT6500V

10

)(/U

3

238











酶

总

ODVN

mL

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

6500:238nm处Mn2+转化为Mn3+摩尔吸光系数(L/mol·cm)

T：反应时间（min）

L：比色皿的直径（cm）

100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

液态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：

锰过氧化物酶（MnP）活性测定

在4mL反应体系中含50mmol/L(pH4～5)的乳酸钠缓冲液3.4mL，1.

6mmol/L的硫酸锰溶液0.1mL，酶液0.4mL，预热至37℃时，加1.6mmol

/L的H

2

O

2

溶液0.1mL启动反应。在238nm紫外光处，测定反应4min内

OD

238

差值。在对照组中，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替

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H

2

O

2

溶液，其他反应物不变。每分钟使1μmol/L的Mn2+转化为Mn3+所需的酶

量为1个酶活力单位(U)。(ε238=-1)

此实验固态发酵MnP活性计算公式：

LT6500V

10

)(/U

酶

3

238总







ODVN

mL

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

6500:238nm处Mn2+转化为Mn3+摩尔吸光系数(L/mol·cm)

T：反应时间（min）

L：比色皿的直径（cm）

固态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：

酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200r/min摇3h，

之后5000r/min离心20min。（上清用0.45µm滤纸过滤，于-20℃保存滤液，取

能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。）

测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM，pH3.0），0.1mL

10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL

10mMH

2

O

2

启动酶促反应，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替

H

2

O

2

溶液作对照，测OD310(ε310=9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光

度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛

消耗的酶量。

此实验固态发酵LiP活性计算公式：

5g0.4mL

100mL

LT9300V

10

)(/U

酶

3

310总











ODVN

mL

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

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9300:310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm)

T：反应时间（min）

L：比色皿的直径（cm）

100mL/(0.4mL×5g)：固态变成液态的稀释倍数

液态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：

测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM，pH3.0），0.1mL

10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在30±1℃下温浴5min后，于反应加入0.1mL

10mMH

2

O

2

启动酶促反应，以煮沸灭活15min酶液代替原酶液，以蒸馏水代替

H

2

O

2

溶液作对照，测OD310(ε310=9.3×103M−1cm−1)处反应5min前后反应液吸光

度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1μM藜芦醛

消耗的酶量。

此实验固态发酵LiP活性计算公式：

LT9300V

10

)(/U

酶

3

310总







ODVN

mL

N：酶液稀释倍数

V总

:漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）

V酶

:反应添加的酶液体积（mL）

△OD

420

:t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值

9300:310nm处摩尔吸光系数(L/mol·cm)

T：反应时间（min）

L：比色皿的直径（cm）