外植体

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外植体消毒

1、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。

2、仪器：超净工作台，含MS培养基的培养瓶，镊子，培养皿，酒精灯，接种

器械（解剖刀、剪子、镊子等）。

3、试剂：70%酒精，95%酒精，0.1%升汞或漂白粉、无菌水等。

方法步骤

1、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。

2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20分钟。

3、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用70%酒精喷雾降尘，并擦拭工

作台面。

4、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95%酒精在酒精灯火焰上

灼烧，放置冷却。

5、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：

（1）水洗，滤纸吸干。

（2）70%酒精中浸泡约30-60秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，

以免损伤材料组织细胞）。

（3）在0.1%升汞中浸泡10分钟；或在10%漂白粉上清夜中泡10-15分钟；

（4）无菌水冲洗3-5次。

6、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。

（1）先解开包口纸，将试管或培养瓶拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧

数秒钟。

（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到试管或培养瓶中，轻轻插入或

放在培养基表面。

（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。

（4）操作期间应经常用70%酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%酒

精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳

嗽等。

7、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用70%酒精擦拭工作台面。