pbs缓冲液的配制

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

科研实验2010-04-2022:25:48阅读935评论0字号：大中小订阅

0.01MPBS

PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO4

4.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L

称7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，

溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L。

保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而

非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水

0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L

的Na2HPO4,即可。

然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：

0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。

0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。

0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀释至1000ml即可。

若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另PH值的0.2MPB（100ml)配方：

pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）

5.793.56.5

5.8928

5.99010

6.087.712.3

6.18515

6.281.518.5

6.377.522.5

6.473.526.5

6.568.531.5

6.662.537.5

6.756.543.5

6.85149

6.94555

7.03862

7.13367

7.22872

7.32377

7.419ml81ml

7.51684

7.61387

7.710.590.5

7.88.591.5

7.9793

8.05.394.7

0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水

中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在

15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱

中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非

Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于

免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调

PH、定容、灭菌消毒。

PH7.67.47.27.0

H2O1000

NaCl8.58.58.58.5

Na2HPO42.22.22.22.2

NaH2PO40.10.20.30.4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的

影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明

显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实

验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制

问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重

新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml

双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μlTween-20加入PBS100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好

浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，

但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取

少量试一试，配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和

0.5mMMgCl2。

0.05mol/LPBS(磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution，PBS)的配制：

甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水

至1000ml;

乙液：0.05mol/LKH2P04溶液:称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至

1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混

合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH甲液ml乙液mI

5.292.597.5

5.595.095.0

5.9110.090.0

6.2420.080.0

6.4730.070.0

6.6440.060.0

6.8150.050.0

6.9860.040.0

7.1770.030.0

7.3880.020.0

7.7390.010.0

8.0495.05.0

你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。

有不少人认为常规漂洗用0.01MPBS，配试剂用0.1MPBS，但也有很多人不分浓度也没有出现

问题；