18学士

中国临床康复第加卷第４， 疗２００６—１１—１０出版

Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ｉｏ ２００６ Ｖｏ１．ｉｏ Ｎ０．４１

人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

王莎莉，李英搏，王亚平

１９

・基础研究・

重庆医科大学基础医学研究所重庆市生物化学与分子药理重点实验

・宣，重庆市４０００４６

王莎莉，士，ｌ９５６年生，重庆市人，汉族，１９８２年重庆医科大学毕业，学

士，教授，博士研究生导师，主要从事干细胞生物学和中药药理的研究。

． 中图分类号：Ｒ３９４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—５９２６（２００６）４１—００１９－０３

’ 收稿日期；２００６—０４ ２４修回日期：２００６加５—２４ ｆ０６—５０—３—２２６９／Ｓ，Ｘ１

Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ ｏｆ ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ ｏｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ

Ｗａｎｇ Ｓｈａ—ｌｉ．Ｌｉ Ｙｉｎｇ—ｂｏ．Ｗａｎｇ Ｙａ—ｐｉｎｇ

Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ

Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｅｉｅｎｅｅｓ，

Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００４６，Ｃｈｉｎａ

Ｗａｎｇ Ｓｈａ－ｌｉ，Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｔｕｔｏｒ ｏｆ ｄｏｃｔｏｒ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ

Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，

Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００４６，Ｃｈｉｎａ

Ｒｅ．ｉｖｅｄ：２００６一Ｏ４—２４ Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２００６—０５—２４

Ａｂｓｔｒａｃｔ

ＡＩＭ：Ｔｏ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｔｈｅ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＮＳＣｓ１ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ

ｏｆ ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ（ＴＳＰＧ）ｏｒ ＴＳＰＧ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—ｌ（ＩＬ—１）ｉｎｔｏ

ｔｈｅ ｓｔｒｉａｔｕｍ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ），ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ

ｏｆ ＴＳＰＧ—ｔｒｅａｔｅｄ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｍｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ＰＤ ｍｉｃｅ．

ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｔ ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ

Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ

Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００４ ｔｏ Ｊｕｌｙ

２ｏ０５．①Ｔｈｅ ＮＳＣｓ ｏｆ ｃｏｒｔｅｘ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ

７一ｌ ２ ｗｅｅｋｓ．ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ．ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ

ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｅｈｅｍｅａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ｍｉｃｅ－ａｎｔｉ—ｈｕａｍｎ ｎｅｓｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ．ａｎｄ ａｔ

ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ ＮＳＣｓ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ４．６－ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２一ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ（ＤＡＰＩ）．

②／ｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＳＰＧ ａｎｄ ＮＳＣｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ－ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ：ＮＳＣ ｇｒｏｕｐ：ＮＳＣｓ ｗｅｒｅ ｒｏｕｔｉｎｅｌｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．ＴＳＰＧ ｇｒｏｕｐ：ＮＳＣｓ

ｗｅｒｅ ａｄｄｅｄ ｗｉｔｈ ＴＳＰＧ ａｔ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２００ ｕｇ／ｍＬ ｔｏ

ｃｕｌｔｕｒｅ．ＴＳＰＧ＋ＩＩ，１ ｇｒｏｕｐ：ＩＬ广１ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２００ ｎＷｍＬ

ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＴＳＰＧ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ３ ｄａｙｓ，ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｆｏｒ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． ⑨Ｔｗｅｎｔｙ ｈｅａｌｔｈｙ ａｎｄ ｃｌｅａｎ ｇｒａｄｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ

ｉｎｔｍｇｓｔｒｉｃａｌｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ １－ｍｅｔｈｙｌ－４－ｐｈｅｎｙｌ－ｌ，２，３，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ

（ＭＰＴＰ）ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ３０ ｍｓ／ｋｓ，ｓｏ ａｓ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＰＤ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌｓ．Ｔｈｅ

ｓｃｏｒｅｓ ｏｆ ｐａｒａｌｙｓｉｓ ａｇｉｔａｎｓ，ａｕｔｏ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ

ｒｅｃ０ｒｄｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ＰＤ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ．④Ｔｈｅ ＮＳＣｓ ｔｒｅａｔｅｄ

ｂｖ ＴＳＰＧ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｔｒｉａｔｕｍ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ＰＤ

ｍｉｃｅ ｏｆ ３ ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ＰＢＳ）ｇｒｏｕｐ（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＢＳ ａｔ

ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｏｓｅ）ｗａｓ ｓｅｔ ｕｐ ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ

ｍｏｄｅｌｓ ａｔ ６０（１ａｙｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓＤｌａｎｔａ【ｊｏｎ：ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ＮＳＣｓ ｉｎｓｉｄｅ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｅ ｎｅｕｍｎｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ

ＮＳＣｓ ｉｎｓｉｄｅ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｙｍｓｉｎｅ ｈｙｄｍｘｙｌａｓｅ Ｉａ）

ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎ．

ＲＥＳＵＬＴＳ： ①Ｔｈｅ ｎｅｓｔｌｎ ｉｎ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＮＳＣｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ

ｃｏｒｔｅｘ ｏｆ ａｂｏｒｔｕｓ ｗａｓ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ３ ｐａｓｓａｇｅｓ ｏｆ

ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｍａｒｋｅｄ ＤＡＰＩ ｏｆ ＮＳＣｓ ａｒｒｉｖｅｄ ａｔ １００％．

ａｎｄ ｔｈｅ ｎｕｅｌｅｉ ｏｆ ＮＳＣ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｌｕｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．（￣Ｔｗｅｎｔｙ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌｓ

－ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｅｓｔａｂｈｓｈｅｄ

．③Ｔｈｅ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ａｕｔｏ．ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＰＤ ｍｉｃｅ ｏｆ

ＮＳＣｓ ｇｒｏｕｐ． ＭＰｒＰ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＩＬ－Ｉ ｇｒｏｕｐ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＳＣｓ ｗｉｔｈｉｎ ５ ｍｉｎｕｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ

ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｏｎｔｍｌ ｇｒｏｕｐ（５２．０￣１．６，８１．０￣２．８，９８．０￣３．７，Ｐ＜０．０５ ＯＦ ０．０１）．

（垒） ｒｈｅ ｓｃｏｒｅｓ ｏｆ ｐａｒａｌｙｓｉｓ ａｇｉｔａｎｓ（２ ｐｏｌｎｔｓ／ｍｏｕｓｅ，３ ｐｏｉｎｔｓ／４ ｍｉｃｅ ｉｎ

ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ）．ＰＢＳ ｇｒｏｕｐ：２ ｐｏｉｎｔｓ／ｍｏｕｓｅ。３ ｐｏｉｎｔｓ／４ ｍｉｃｅ．ＮＳＣ ｇｒｏｕｐ

（２ ｐｏｉｎｔｓ／３ ｍｉｃｅ，３ ｐｏｉｎｔｓ／２ ｍｉｃｅ）．ＴｓＰＧ ｇｒｏｕｐ（２ ｐｏｉｎｔｓ／４ ｍｉｃｅ，

３ ｐｏｉｎｔｓ／ｍｏｕｓｅ）．ＴＳＰＧ＋ＩＬ－１ ｇｒｏｕｐ（１ ｐｏｉｎｔ／２ ｍｉｃｅ，２ ｐｏｉｎｔｓ／２ ｍｉｃｅ，

３ ｐｏｉｎｔｓ／ｍｏｕｓｅ）． ⑧Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ＮＳＣｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｏｆ ＰＤ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＴＳＰＧ＋ＩＬ－ｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ

ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ＴＳＰＧ ｇｒｏｕｐ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ＴＳＰＧ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ

ｔｈｅ ＮＳＣ ｇｒｏｕｐ．Ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ＰＢＳ ｇｒｏｕｐ．

ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：ＴＳＰＧ ｃａｎ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＰＤ ｂｙ ＮＳＣ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．

Ｗａｎｇ ＳＬ．Ｌｉ ＹＢ，Ｗａｎｇ ＹＰ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ ｏｆ ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ ｏｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ

Ｋａｎｆｆｕ ２００６；１０（４１）：１９—２１（Ｃｈｉｎａ｝

王莎莉，李萸搏，王亚平．人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中

的作用Ｕ１ｌ中国临床康复，２００６，１０｛４１１：１９—２１ １ｗｗｗ ｚｇｌｃｋｆｃａｍ］

摘要

目的：将人参总皂苷或人参总皂苷与白细胞介素１联合处理的神经干

细胞移植到帕金森病模型小鼠纹状体内，观察人参总皂苷在移植治疗

帕金森病模型小鼠中的作用。

方法：实验于２００４－０９／２００５－０７在重庆医科大学基础医学研究所重庆

市生物化学与分子药理重点实验室完成。①从７～１２周龄流产胚胎脑中

分离皮质细胞，体外培养，纯化，分别用鼠抗人ｎｅｓｔｉｎ抗体行免疫细胞

化学染色，鉴定神经干细胞，并用４，６一二乙酰基一２苯基吲哚标记细胞。

②人参总皂苷与人神经干细胞的体外培养，实验分组：神经干细胞组，

常规培养神经干细胞；人参总皂苷组，常规培养体系中加入人参总皂苷

（终浓度２００ ｍｇ／Ｌ）；人参总皂苷＋白细胞介素１组，在人参总皂苷组培

养体系中加入白细胞介素１（终浓度２００ ｎｇ／Ｌ），均培养３ ｄ，待移植用。

⑧健康清洁级小鼠２０只，腹腔注射１一甲基一４一苯基一１，２，３，６一四羟吡啶

（３０ ｍｇ／ｋｇ），建立帕金森病小鼠模型。记录小鼠震颤麻痹评分，自发活

动和记忆功能，对模型进行评价。④将经人参总皂苷处理的神经干细

胞，按所分实验组注入帕金森病小鼠纹状体内，同时设立磷酸盐缓冲液

组（注入同体积磷酸盐缓冲液），移植后６０ ｄ观测模型鼠行为学改变情

况；荧光显微镜下观察移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和

迁移；酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色，对移植的神经干细胞在脑内分化

为多巴胺能神经元样细胞进行检测。

结果： 从流产人胚胎脑组织中分离、纯化的神经干细胞细胞，经３代

以上的传代纯化培养，神经球ｎｅｓｔｉｎ呈阳性表达，所有神经干细胞细胞

核标记上蓝色荧光，标记率达１００％。②２０只小鼠均建模成功。③神经

干细胞组、人参总皂苷组、人参总皂苷＋白细胞介素１组神经干细胞移

植后帕金森病小鼠５ ｍｉｎ自发活动的次数均多于对照组（５２．０￣１．６，

８１．０＋２．８，９８．Ｏ－ａ：３．７，Ｐ＜０．０５或０．０１）。④震颤麻痹评分（每组对照均为２

分１只，３分４只），磷酸盐缓冲液组２分１只，３分４只；神经干细胞组

２分３只，３分２只；人参总皂苷组２分４只，３分１只；人参总皂苷＋白

细胞介素１组１分２只，２分２只，３分１只。⑤移植的神经千细胞在帕

金森病模型鼠脑内分布和迁移以及分化多巴胺能神经元样细胞的检测

显示，人参总皂苷＋白细胞介素ｌ组优于人参总皂苷组，人参总皂苷组

优于神经干细胞组，磷酸盐缓冲液组无作用。

结论：人参总皂苷在神经干细胞移植治疗帕金森病中发挥促进作用。

主题词：干细胞；细胞移植；帕金森病；小鼠

０ 引言

现代药理学研究表明，人参总皂苷具有抗衰老、抗

氧化、提高免疫力和增强记忆力等作用。作者前期的实

验也证明人参总皂苷有明显的促进神经干细胞增殖和

分化为多巴胺能神经细胞的作用。但是，经人参总皂苷

处理的神经干细胞能否在移植治疗帕金森病模型小鼠

中发挥更好的作用？本实验采用现代生物学实验技术，

将人参总皂苷体外作用于神经干细胞后，植入帕金森病

模型小鼠脑内，比较移植前后小鼠行为学变化，观察移

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２０

ＩＳＳＮ １６７１—５９２６ ｃＮ ２１—１４７０／Ｒ 荪 人参总皂苷在神经干细咆移植治疗帕金森病

．础＾ ｃ０ｍ ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ ’ 模型小鼠中的作用

植细胞在帕金森病小鼠脑内的存活、分布、迁移和分化

情况，旨在为临床上开展神经干细胞脑内移植治疗帕金

森病以及挖掘人参新的临床用药提供理论与实验依据。

Ｉ材料和方法

设计：对照实验。

单位：重庆医科大学，重庆市生物与分子药理重点

实验室。

材料：实验于２Ｏ０４－０９／２００５—０７在重庆医科大学

基础医学研究所，重庆市生物化学与分子药理重点实验

室完成。雄性Ｃ５７／ＢＬ６Ｊ纯系小鼠，清洁级，１８￣２０周

龄，体质量（２０＋２）ｇ，重庆医科大学实验动物中心提供

（合格证号ＳＣＸＫ［渝］２００２０００１）。人参总皂苷，重庆中

药研究所分离、提取 鉴定，纯度＞９５％。ＤＭＥＭ培养

基，美国ＧＩＢＣＯ公司提供；神经干细胞培养添加剂

Ｂ２７，４，６一二乙酰基一２苯基吲哚，１一甲基一４一苯基一１，２，

３，６一四羟吡啶，酪氨酸羟化酶，白细胞介素１Ｃｈｅｍｉｅｏｎ

公司提供；ｎｅｓｔｉｎ抗体，博士德公司提供。

设计、实施、评估者：由重庆医科大学专家组评估，

主要实施者为第二作者。

方法：

人胚胎神经干细胞的分离、纯化、传代及鉴定：按本

室方法进行。收集７￣１２周龄人工流产胚胎，分离纯化胚

脑皮质细胞，将分离细胞种植在神经干细胞培养体系

中，待原代克隆形成后收集细胞，重新培养，此后每５￣７

天分离克隆传代１次。其间分别用鼠抗人ｎｅｓｔｉｎ，鉴定

神经干细胞，并用４，６一二乙酰基一２苯基吲哚标记。

人参总皂苷对神经干细胞的体外培养：实验分组：

神经干细胞组，常规培养神经干细胞，未加任何诱导

剂；人参总皂苷组，常规培养体系中加人人参总皂苷

（终浓度２００ ｍｇ／Ｌ），培养３ ｄ；人参总皂苷＋白细胞介

素１组，在人参总皂苷组培养体系中加入白细胞介素

１（终浓度２００ ｒｉｇ／Ｌ），培养３ ｄ。离心洗涤，收集细胞，调

整细胞浓度待移植用。

帕金森病模型小鼠的建立：按文献ｆｌ，２１Ａ，鼠腹腔

注射１一甲基一４一苯基一１，２，３，６一四羟吡啶（３０ ｍｇ／ｋｇ），

连续５ ｄ。第１０天，将小鼠置于ＺＺ一６Ａ型自发活动监

测仪中，记录小鼠５ ｍｉｎ内自发运动次数；用ＤＴ一６Ａ

小鼠自动跳台测试仪，检测小鼠在通电１０ ｍｉｎ内的错

误次数和潜伏期，以评判小鼠记忆功能；用常规的震颤

麻痹评分方法表对小鼠评分，见表１。

表１震颤麻痹评分方法

与对照组相似

小鼠间断性细小震颤，但活动自如

小鼠频繁性震颤，后肢僵直．颤尾，活动逐渐受限

小鼠连续性震颧．四肢僵直，吞咽活动频繁．活动受限

小鼠因全身麻痹而死亡

神经干细胞脑内移植：将麻醉后的帕金森病模型

小鼠固定于脑立体定位仪上，以前囟为零点，参照小鼠

脑立体定位图谱定位，向纹状体内（前囟后１ ｍｍ，矢

状缝右侧２ ｍｍ，颅骨下１ ｍｍ）移植神经干细胞细胞

（２．５ Ｌ，细胞浓度为５ｘｌ０７）。实验分组：磷酸盐缓冲液

组（注射同体积磷酸盐缓冲液）；神经干细胞组（移植未

经任何处理的神经干细胞）；人参总皂苷组（移植经

２００ ｍｇ／Ｌ人参总皂苷作用的神经干细胞）；人参总皂‘

苷＋白细胞介素１组（移植经２００ ｍｇ／Ｌ人参总皂苷＋

２００ ｎｇ／Ｌ白细胞介素１联合作用的神经干细胞）。细・

胞移植后６０ ｄ后观测其行为学改变，观测指标同前。

移植的神经干细胞在帕金森病模型鼠脑内分布和

迁移：神经干细胞移植后６０ ｄ，用４％多聚甲醛灌注帕

金森病模型鼠，取出脑组织Ｏ紫外光（波长４００ ｎｍ）激

发蓝色荧光，荧光显微镜下观察。

移植的神经干细胞在脑内分化的检测：移植术后

６０ ｄ杀鼠，常规冰冻切片，进行酪氨酸羟化酶免疫组

织化学染色，以鉴定多巴胺能神经元样细胞。

主要观察指标：①帕金森病模型小鼠神经干细胞

移植后行为学（自发活动、记忆功能、震颤麻痹评分）变

化。②移植的神经干细胞免疫化学检测结果。

统计学分析、：所获数据经ＳＡＳ ８．１统计软件进行ｔ

检验和方差分析（ｑ检验），计量资料以 表示。

２ 结果

２．１神经干细胞培养、纯化和鉴定和标记从人流产

胚胎脑组织中分离、纯化的克隆性生长细胞，经３代以

上的传代纯化培养，神经球ｎｅｓｔｉｎ呈阳性表达（图１），

所有神经干细胞细胞核标记上蓝。色荧光，标记率达

１００％（图２）。

２．２ 帕金森病模型小鼠的行为学变化 ２Ｏ只模型小

鼠中，震颤麻痹评分４只２分，１６只３分，均建模成

功。建模前后小鼠行为学（自发活动、记忆功能）均有显

著性差异，见表２。

表２帕金森病模型建立前后小鼠的自发活动与记忆功能

与正常鼠比较， ＜０．ｏ５

■

２．３神经干细胞移植后疗效的评估 ‘

２．３．１ 对自发活动影响 神经干细胞移植前后各组

帕金森病模型小鼠自发活动５ ｍｉｎ的次数对照组、磷’

酸盐缓冲液组、神经干细胞组、人参总皂苷组、人参总

皂苷＋白细胞介素ｌ组分别为（２５．２＋６．２），（２８．０￣２．５），

（５２．０＋１．６），（８１．０￣２．８），（９８．０￣３．７）。神经干细胞组与

对照组比较Ｐ＜０．０５，人参总皂苷组和人参总皂苷＋白

细胞介素１组与对照组比较Ｐ＜０＋Ｏ１。

２．３．２对记忆功能的影响 见表３。

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１ＳＳＮ １６７１￣５９２６ ＣＮ ２１－１４７０／Ｒ ： ｔ 中国临床康复 ２００６年１１月１０臼 第１Ｏ卷 第４ｌ期

表３神经干细胞移植前后各组帕金森病小鼠跳台实验的比较

组别

移植前 移植后

潜 ｓ） ５ ｍｊ 误 潜 ｓ） 误

磷酸盐缓冲液组８０．４５￣２８．３０ １．３￣０．８

神经干细胞组 ７３．６７￣３６．５７ １，４￣０．６

人参总皂苷组 ７４．４４￣１９．Ｏ０ １．５￣０．６

人参总皂苷 ７３．５５￣２０．１０ １．４￣０．３

＋白细胞介素１组

１．３￣０．３

１．３￣０．４

１．２：ｔ－Ｏ．９ｎ

１．０￣０．４ｎ

●与移植前比较． （Ｏ．０５，Ｄ尸＜Ｏ．Ｏｌ

，

２．３．３对震颤麻痹的影响 见表４。

表４移植后小鼠震颤麻痹评分情况 （ｎ＝５，ｎ）

２．４神经干细胞移植后迁移的观蒜神经干细胞移

植后６０ ｄ，荧光显微镜下观察到４，６一二乙酰基一２苯基

吲哚标记的移植细胞大量存活，在脑组织中较广泛分

布（图３）。

２．５移植神经干细胞在脑内分化的观察 酪氨酸羟

化酶免疫组织化学显示：神经干细胞移植后６０ ｄ，人

参总皂苷＋白细胞介素１组有最多的细胞分化为了多

巴胺能神经元，其次是人参总皂苷组（图４）。

３讨论

人参是传统的“补气”中药，人参总皂苷是其主要的

有效成分同。研究显示，人参皂苷单体Ｒｂｌ和Ｒｇｌ选择

性作用于纹状体多巴胺系统，能保护多巴胺能神经元免

受伤害，预防多巴胺耗竭。人参皂苷能通过抗凋亡、抗氧

化等一系列机制来保护黑质神经元 。人参在许多神经

系统疾病，如阿耳茨海默病 、帕金森病阁、周围神经损伤

【目的治疗中，也发挥着积极的作用。但目前国内外实验室

的研究，主要集中在人参对神经元和胶质细胞作用方

面，还没有将其运用到调控神经干细胞的增殖和分化方

面，更未见将经人参总皂苷作用后的人神经干细胞移植

治疗帕金森病，重建退形性变的神经系统。

在促进神经干细胞增殖方面，最主要的神经生长

因子是碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子，它

－们均为有丝分裂促进因子【 。而在众多的诱导神经干

细胞分化为多巴胺能神经元的细胞因子中，以白细胞

・介素１的作用最强。尽管白细胞介素１诱导神经干细

胞分化为多巴胺能神经元的机理还不清楚，但人们已

经观察到白细胞介素１通过增加Ｒｅｔ受体数目，提高

神经前体细胞对神经营养因子的反应性，而进一步分

化为多巴胺能神经元；白细胞介素ｌ对多巴胺能神经

元还具有营养作用［９１。因此作者以白细胞介素１为指

标来观察人参总皂苷单独使用和与白细胞介素１联

合应用时对神经干细胞的诱导分化作用。

２１

作者的前期实验证明：当联合应用人参总皂苷和

白细胞介素１时神经干细胞分化为多巴胺能神经元样

细胞的阳性率远远超过单独应用人参总皂苷或白细胞

介素１。因此在既往实验的基础上，作者进一步将经人

参总皂苷以及人参总皂苷与白细胞介素１作用过的神

经干细胞植入帕金森病模型小鼠纹状体内，观察移植

前后小鼠行为学的变化，移植细胞在脑内的存活、分

布、迁移和分化情况，以进一步研究人参总皂苷在神经

干细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用。实验中

作者通过震颤麻痹评分，反映帕金森病特有的症状以

及肢体的张力和运动协调能力；自发活动，反映中枢神

经系统的兴奋状态；跳台实验，考察其记忆功能［】删。结

果表明：移植２个月后除磷酸盐缓冲液组外，各实验组

帕金森病小鼠的自发活动明显增多，记忆功能明显改

善，震颤麻痹的症状明显减轻。同时作者对标记的神经

干细胞移植后增殖分化进行了鉴定，观察到移植神经

干细胞数量上明显增多，并有大量酪胺酸羟化酶阳性

细胞广泛分布在纹状体，神经元之间建立了一定的联

系。结合帕金森病小鼠行为学症状的明显改变，提示部

分神经干细胞可能已分化为多巴胺能样神经元，并有

一定的功能表达。在这一系列改善中均以移植人参总

皂苷与白细胞介素１联合诱导的神经干细胞组效果最

明显，其症状的改善比较接近正常；移植单独用人参总

皂苷诱导后的神经干细胞的效果又强与未经人参总皂

苷诱导的神经干细胞。这些实验结果与作者Ｊ三ｌ往的体

外实验结果相吻合。因此作者认为，人参总皂苷无论是

在体内外都可以促进神经干细胞的增殖分化，推测这

种作用的发挥可能是通过协同细胞因子和神经生长因

子间接诱导神经干细胞的增殖分化；或者人参总皂苷

能改善脑内的微环境，激活脑组织中的修复机制，从而

使多巴胺能神经元得到一定的保护，从整体上使症状

得到改善。但有关的分子生物学机制还有待深入研究。

（囤１－４见插图４ｌ一２页）

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人参总皂苷在神经千细胞移植治疗帕金森病模型小鼠中的作用

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