IMViC

实验九IMViC与硫化氢试验

一、实验目的

了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。

二、基本原理

IMViC：

•I－吲哚（indoltest）

•M－甲基红（methylredtest）

•V－伏-普（Voges-Prolauertest）

•C－柠檬酸盐（citratetest）

•硫化氢（H2S）

I-吲哚（indoltest）

色氨酸＋H

2

O色氨酸酶吲哚＋NH3＋丙酮酸

吲哚+对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚（红色）

部分细菌能产生色氨酸酶，从而具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚实验可以作为一

个生化检测指标。

大肠杆菌产色氨酸酶阳性（红色）

产气肠杆菌不产色氨酸酶阴性（无色）

M-甲基红（methylredtest）

•甲基红指示剂

•橘黄色（pH6.3）红色（pH4.2）

细菌代谢糖产生酸使培养基变酸（pH下降），使甲基红指示剂变色。

所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别：

两者在培养早期产生有机酸，但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4，而产气肠杆菌则将有

机酸转化为非酸性产物，使pH上升至6左右。

大肠杆菌阳性（红色）

产气肠杆菌阴性（黄色）

V-伏-普（Voges-Prolauertest）

葡萄糖丙酮酸-CO2缩合乙酰乳酸-CO2脱羧乙酰甲基甲醇+OH--2H胍基+二乙

酰红色化合物

测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物（如丙酮酸）的能力。

大肠杆菌不产丙酮酸阴性（无色）

产气肠杆菌产丙酮酸阳性（红色）

碱性条件；加入少量含胍基的化合物可使反应更明显。

C-柠檬酸盐（citratetest）

•有些细菌以柠檬酸钠为碳源，培养基中的柠檬酸和磷酸铵被分解后，产生碱性化合

物，使pH升高。

•培养基（1％溴麝香草酚蓝）：绿色深蓝色

•溴麝香草酚蓝：pH＜6黄色

pH6～7绿色

pH＞7蓝色

大肠杆菌不能利用柠檬酸盐阴性（绿色）

产气肠杆菌能利用柠檬酸盐阳性（蓝色）

硫化氢实验

含硫有机物（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分细菌分解产生H2S，H2S和培养

基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀。

大肠杆菌不能分解阴性（无沉淀）

产气肠杆菌能分解阳性（黑色沉淀）

三、实验器材

1菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌

2培养基：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐斜面培养基、醋酸铅培养基。

四、操作步骤

1接种与培养

•穿刺法分别接种两菌于2支醋酸铅培养基（H2S），37℃培养48h。

•分别接种两菌于2支蛋白胨水培养基（I）、2支葡萄糖蛋白胨水培养基（M＆V），

37℃培养2d。

•划S曲线法分别接种两菌于2支柠檬酸盐斜面培养基（C），37℃培养2d。

2结果观察

•H2S实验：观察是否有黑色硫化铅沉淀产生。

•吲哚实验：2d后的培养物内加3～4滴乙醚，摇动数次，静至1～3min，待乙醚上升

后，沿管壁徐徐滴加2滴吲哚试剂，产生红色环状物者为阳性反应（注意最好选用

色氨酸含量高的蛋白胨培养基）。

•甲基红实验：2d后的培养物内加2滴甲基红试剂，培养物变为红色者为阳性，黄

色者为阴性（注意甲基红不要过量，以免出现假阳性）。

•伏－普实验：2d后的培养物内加5～10滴40％KOH，然后加入等量的5％-萘酚溶

液，用力振荡，37℃保温15～30min，以加快反应速度。红色为阳性。

•柠檬酸盐实验：观察2d后的培养物上有无细菌产生及其颜色，蓝色为阳性，绿色为

阴性。

五、实验报告

1.结果

将实验结果填入下表。“＋”表示阳性反应，“—”表示阴性反应。