log100

病毒中和试验测定法之迟辟智美创作

1.固定病毒稀释血清法(α法)本法用于抗血清的中和价.

试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单元剂量

含200个TCID

50

，再将待检血清倍比稀释加等量200个

TCID

50

/ml的病毒液，混匀后37℃1h，每一稀释度接种24

孔细胞培养板4孔，每孔0.2ml.5%C0

2

培养箱培养一按时间

后，记录呈现CPE孔数，以不呈现CPE数和接种数的比为

中和比值.按Karber法计算中和价.其公式如下：

LogTCID

50

）

（TCID

50

用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数.d为

组距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组

CPE与接种数比值之和）

50%中和试验举例

血清稀释

1/101/201/401/801/1601/320

稀释度对数

-1

每一接种剂量含病毒100TCID

50

或100LD

50

或100EID

50

或100ID

50

中和比值

4/44/44/44/42/40/4

代入Karber公式：LogND

50

该抗血清ND

50

(半数中和单元)为10，即1/160，则其中和

价为160ND

50

/ml，可以简写成160.

2.固定血清稀释病毒法(β法)本法用于测定抗血清的中

和指数.将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第

一排加等量正常血清（对比组）；第二排加待检血清（中

和组），混匀后，置37℃1h，分别接种细胞板孔（或鸡

胚、实验植物）进行培养，记录CPE（鸡胚、植物死亡

数），计算TCID

50

（或LD

50

），按下式计算中和指数.

中和组TCID

50

（或LD

50

）

中和指数=————————————

对比组TCID

50

（或LD

50

）

查反对数，即得该待检血清的中和指数.通常中和指

数>50者判为阳性，10-49为可疑，<10者为阴性.例如：

对比组滴度的LD

50

=10

中和组滴度的LD

50

=10

中和指数=10(6.5-4.5)=10=100

中和指数的对数Log=Log100

一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1.因此小于

10（1

（Log1-1.6）则为可疑，超越50((Log>1.7)则是有意义的.