巴氏小体

⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察

⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察

摘要

巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗

传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒

⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。

引⾔

在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。⼜称X⼩体、性

染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩

体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、

XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。

综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，LyonM．F于1961年提出Lyon假说，主要内容有：

(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；

(2)X染⾊体失活是随机的。因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。例外：有袋类失活的X染⾊体全

部是⽗⽅的。

(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的

后代细胞中该染⾊体均失活。

Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合

症。随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活

的。如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基

因是失活的。

巴⽒⼩体的⽣物学观察，对于优⽣学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发⽣，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之⼀鉴定癌

细胞，有重要价值[1]。

本次实验将通过实验掌握鉴定⼈类X染⾊质的⽅法，在显微镜下正确识别巴⽒⼩体的形态特征及所在部位，并了解巴⽒⼩体失

活的有关假说以及为失活X染⾊体上的基因所控制的遗传性状地特点。

1.实验材料

1.1.⽣物材料：⼈体⼝腔颊部上⽪细胞，⼈体发根⽑囊细胞。

1.2.器材：显微镜，解剖针，⽛签，眼科镊，载玻⽚，盖玻⽚，滤纸条。

1.3.试剂：硫瑾，1mol/LHCl，蒸馏⽔，45%醋酸。

2.实验步骤

2.1.观察⼈⼝腔颊部上⽪细胞巴⽒⼩体

2.1.1.取材⽤灭菌的⽛签轻刮⼝腔颊部上⽪，涂⽚，晾⼲。

2.1.2.加1mol/L的盐酸⽔解10-15分钟。轻轻⽔洗，晾⼲。

2.1.

3.硫瑾染⾊10-20分钟，洗净，晾⼲。

2.1.4.显微镜观察。巴⽒⼩体应靠近核膜边缘，染⾊较深。

2.2.观察发根⽑囊细胞巴⽒⼩体

2.2.1.拔取带⽑囊头发⼀段，45%冰醋酸解离5分钟。

2.2.2.剥取⽑囊，硫瑾染⾊10分钟，洗净。

2.2.

3.压⽚（压⽚前可先⽤解剖针敲⽚，使细胞分散），镜检。⽑囊细胞密度⽐⼝腔上⽪细

胞标本较低，但较为集中。

3.实验结果

3.1.结果图⽰

图1⼈⼝腔上⽪颊部上⽪细胞（男性标本，未显⽰巴⽒⼩体，10×10）

图2⼈体⼈⼝腔上⽪颊部上⽪细胞（⼥性细胞，圆圈中⽰巴⽒⼩体，10×40）

3.2.结果分析

巴⽒⼩体为⼥性细胞中所特有的染⾊体结构，是l条X染⾊体呈异固缩状态所形成。其直径为lµm左右，其形状有微凸形、三⾓

形、卵形、短棒形和双球形等。巴⽒⼩体⼀般位于核膜附近，颜⾊⽐周围的核物质深。⼀般正常⼥性⼝腔粘膜细胞中，X染⾊

质约15%左右，平均16.4%，不超过30～35%，仅含1个X染⾊质。男性的细胞中发现X⼩体有⼩于2%的出现率，但⼩体结构不

规范、典型。

本次试验中对男性⼝腔颊部上⽪细胞标本与⼥性⼝腔上⽪标本都进⾏了硫瑾染⾊法观察，其操作过程引⼊杂质较多，导致显微

镜视野中不够整洁。

男性⼝腔颊部上⽪细胞标本中出现⼤量深染⾊的颗粒状结构（如图1），对X染⾊质的观察与判断造成⼀定影响。经过仔细辨

别，没有在标本中发现X染⾊质，男性X染⾊质检出率为0。

⼥性⼝腔颊部上⽪细胞标本共发现含X染⾊质细胞核5个，细胞核计数结果45~50个，X染⾊质出现频率为10%~11%，较标准数

值偏低。可能原因：挑取标本过程有⼀块⼝腔上⽪完整剥下，造成后来制⽚时出现⼤量细胞粘连在⼀起，对辨认X染⾊质、计

数及显微观察都造成⼀定影响。

4.注意事项

本次实验的难点在于标本杂质的控制，视野中细胞清晰，杂质少的装⽚标本视为质量较好。

1.载玻⽚要⾮常⼲净，洗净酒精浸泡后晾⼲或烤⼲，以免制⽚后杂质过多。

2.实验前先⽤⽔将⼝漱净，第⼀遍刮取的样本弃去，尽可能除去⼝中杂物。注意不要刮破上⽪，涂⽚后要等材料晾⼲后在染⾊

或解离，否则丢失材料。

3.使样品中混⼊其他细胞（如真⽪层细胞，其细胞核较⼤，染⾊较深）。

4.注意视硫瑾浓度确定染⾊时间，否则造成染⾊过浅或背景着⾊皆影响观察。

参考⽂献

[1]杨⼤鹏主编.遗传学实验,果蝇唾腺染⾊体标本的制备与观察,2010年9⽉.

（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）