分离纯化

分离纯化蛋白质的方法及原理之欧侯瑞魂创作

（一）利用分子大小

1、透析：原理：利用蛋白质分子不克不及透过半透膜的性质，使蛋白质和其他小

分子物质如无机盐、单糖、水等分开。

方法：将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行

涉及的问题：

如何加快透析过程

（1）加大浓度差，及时更换透析液

（2）利用磁力搅拌器

经常使用的半透膜：玻璃纸、火棉和其他资料合成

2、超出滤：原理：利用压力和离心力，强行使其他小分子和水通过半透膜，而蛋

白质留在膜上

3、凝胶过滤层析：原理：当分歧分子大小的蛋白质混合物流进凝胶层析柱时，比

凝胶网孔大的分子不克不及进入珠内网状结构，排阻在凝胶珠以外，在凝胶珠缝

隙间隙中向下移动。而比孔小的分子分歧程度地进入凝胶珠内，这样由于分歧大

小分子所经历的路径分歧而到分离。

结果：大分子先被洗脱下来，小分子后被洗脱下来

（二）利用溶解度不同

4、等电点沉淀：原理：分歧蛋白质具有分歧的等电点，当蛋白质混合物调到其

中一种蛋白质的等电点时，这种蛋白质大部分和全部被沉淀下来.。

5、盐析与盐溶：原理：低浓度时，中性盐可以增加蛋白质溶解度这种现象称为

盐溶.当离子强度增加，足够高时，例如饱和或半饱和程度，很多蛋白质可以从水

中沉淀出来，这种现象称为盐析

（三）根据电荷分歧

6、SDS-PAGE全称十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳

原理：通过加热和SDS可以使蛋白质变性，多亚基的蛋白质也解离为单亚

基，处理后的样品中肽链是处于无二硫键连接的，分离的状态。电泳时SDS-蛋白

质复合物在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而主要取决于

蛋白质分子量。所以SDS-PAGE经常使用来分析蛋白质的纯度和大致测定蛋白质的

分子量。

7、离子交换层析：原理：氨基酸分离经常使用阳离子交换树脂，树脂被处理成

钠型，将混合氨基酸上柱，氨基酸主要以阳离子形式存在，在树脂上与钠离子发

生交换，而被挂在树脂上。

氨基酸在树脂上结合的牢固程度取决于氨基酸与树脂之间的亲和力，决定亲和

力的因素有：（1）主要是静电吸引力（2）氨基酸侧链同树脂之间的疏水作用

氨基酸与阳离子交换树脂间的静电引力大小次序依次是：

碱性氨基酸R2+>中性氨基酸R+>酸性氨基酸R0。

因此洗脱顺序应该是：

酸性氨基酸中性氨基酸碱性氨基酸

为使氨基酸从树脂上洗脱下来采取逐步提高pH和盐浓度的方法