溴麝香草酚蓝水溶液

溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物

碱的含量

【摘要】目的测定叶下珠中总生物碱的含量。方法以溴麝香草酚蓝为显

色剂于415nm波长处测定吸光度。结果苦参碱在0.004～0.02mg／ml范围内线性

关系良好（r=0.99754）；其与溴麝香草酚蓝所形成的离子对产物在6h内稳定；

平均加样回收率为98.65％(RSD=1.98％)。结论该方法简单、快速、准确，可用于

生药及产品的生物碱质量控制。

【关键词】溴麝香草酚蓝比色法叶下珠生物碱

叶下珠(别名珍珠草)为大戟科叶下珠属中的一种草本植物，具有清肝明

目、解毒消肿的功效，常用于治疗腹泻下痢、尿路感染、小儿疳积、肝炎、肾炎等

疾病，其化学成分主要有生物碱和黄酮两大类。

生物碱是存在于生物体内的含氮有机化合物，大多数存在于植物中，目前已分

离到三千余种，其中近百种具有很强的生理活性［1］。现代药理研究表明，生物

碱具有抗肿瘤、抗炎、抗心律失常等方面的作用［2，3］，其在医药和农药方面

的应用已引起人们的广泛关注。

对天然生物碱的生物活性、提取、精制、鉴定方法等方面的研究多见报道［

4］。目前总生物碱的含量测定有重量法、酸碱滴定法、分光光度法。考虑到生物

碱的结构，本文采用酸性染料比色法，以苦参碱为对照品，对不同产地来源的叶下

珠中的总生物碱进行了含量测定，建立了叶下珠中总生物碱含量的测定方法。

1材料与仪器

JP600型变辐杆式超声波萃取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；916型紫外-可见

分光光度计（澳大利亚GBC公司），分析天平（上海第三分析仪器厂），酸度计，

苦参碱(中国药品生物制品检定所)，溴麝香草酚蓝和其余试剂均为分析纯。

叶下珠，购自广西、云南、广东。

2方法

2.1储备溶液的配置精确称取苦参碱标准品10mg，用95％乙醇溶解后定

容于50ml的容量瓶，摇匀，备用。

2.2对照品溶液的配置移取“2.1”项下储备溶液5.00ml于50ml容量

瓶，定容，摇匀，备用。

2.3样品溶液的制备取叶下珠粉碎成粗粉，精确称取5g，加入0.5%的乙

酸溶液200ml，浸泡24h，超声波提取30min过滤，往滤液中加入氢氧化钠溶液

至中性，过滤。沉淀用95％乙醇溶解后定容于50ml容量瓶中，备用。

3结果

3.1条件的优选

3.1.1最大吸收波长的确定移取对照品溶液2.00ml，置于125ml的分

液漏斗中，加入pH=7.5的磷酸盐缓冲液5.00ml，加入0.025%的溴麝香草酚蓝

1.00ml，加入氯仿10.00ml，振摇1min，静置30min，分取氯仿层于具塞锥形

瓶中，用无水氯化钙干燥5min，以5.00ml蒸馏水加pH=7.5的磷酸盐缓冲，加

0.025%的麝香草酚蓝，加氯仿的萃取溶液作为参比，在360～550nm波长范围内进

行扫描，结果显示溶液在415nm波长处有最大吸收。

3.1.2pH值的确定移取对照品溶液2.00ml，按照“3.1.1”项下方法分

别加入pH为6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸盐缓冲液，结果显示：当加入的磷

酸氢二钠与磷酸二氢钾的浓度分别为0.008mol/L和0.030mol/L（pH=7.5）时，

溶液的吸光度最大，所以实验选择pH为7.5的磷酸盐缓冲溶液。

3.1.3溴麝香草酚蓝用量的确定移取对照品溶液5.00ml，按照

“3.1.1”项下方法分别加入0.025%的麝香草酚蓝1.00，2.00，3.00，4.00，5.00

ml，结果显示，当加入的麝香草酚蓝体积为4.00ml时，溶液吸光度最大，所以实

验选择溴麝香草酚蓝的用量为4.00ml。

3.2标准曲线的绘制移取苦生碱对照品溶液1.00，2.00，3.00，4.00，

5.00ml，置于125ml的分液漏斗中，加入二次蒸馏水至5.00ml，加入pH=7.5

的磷酸盐缓冲液5.00ml，加入0.05%的溴麝香草酚蓝4.00ml，加入氯仿10.00

ml，振摇1min，静置30min，分取氯仿层于具塞锥形瓶中，用无水氯化钙干燥

5min，分别在415nm波长处测定吸光度。以浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐

标，绘制标准曲线，得回归方程A=-0.0263+25.675C（r=0.99754），苦参碱检

测浓度在0.004～0.02mg/ml范围内与吸光度有良好的线性关系。

3.3稳定性实验移取对照品溶液2.00ml，按“3.1.1”项下方法在415

nm波长处测定吸光度。并在室温下每隔1h测定1次吸光度，连续测定6次，结

果表明，苦生碱与溴麝香草酚蓝的显色产物在6h内稳定，其RSD=1.65％。

3.4精密度实验分别移取2.00ml对照品溶液3份，按“3.1.1”方法在

415nm波长处测定吸光度，RSD=1.2％。

3.5加样回收实验移取样品溶液(广西武鸣样品)1.00ml，按照“3.1.1”

方法测定总生物碱的含量。在样品溶液中加入3.00ml的苦参碱对照品溶液后测定

吸光度，计算总生物碱含量，进行加样回收实验。平行测定3次。样品溶液体积

1.00ml，生物碱平均含量0.05907mg，加入量0.06000mg，平均回收率

98.65%，RSD=1.98%。

3.6总生物碱的测定将6种不同产地来源的叶下珠药材粉，按照实验方法

测定总生物碱含量。结果见表1。

表1不同产地来源叶下珠中总生物碱含量测定结果（略）

4结论

由于叶下珠中生物碱成分易溶于酸性溶液，因此采用0.5％醋酸作为提取液，

结合超声波提取方法，可以保证药材中生物碱成分的完全提取。

根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，酸性染料在此条件下

解离成阴离子，两者发生离子对反应，定量结合生成有色络合物，该络合物可被有

机溶剂定量萃取的原理，本实验用苦参碱作为标准物质在pH=7.5的缓冲溶液中与

溴麝香草酚蓝定量显色，从而求得叶下珠中总生物碱的含量。

pH环境对显色反应影响显著。本实验中使苦参碱与溴麝香草酚蓝分别在pH为

6.0，6.5，7.0，7.5，8.0的磷酸盐缓冲液中反应后测定吸光度，结果表明，当在

pH为7.5的磷酸盐缓冲液中，显色反应达到最佳。

【参考文献】

［1］刘喜纲，刘翠哲，常金花.应用酸性比色法测定总生物碱的含量［

J］.中国药房，2007，18(11):875.

［2］李金陵，程爱民，荆宇红，等.重要苦参抗肿瘤作用的实验研究［

J］.中国肿瘤临床与康复，2002，9(2):28.

［3］周军，梅艳，易丽.苦参生物碱药理作用研究进展［J］.儿科药

学杂志，2008，14(1):61.

［4］梁丹，李志伟，李明，等.天然生物碱的研究与应用［J］.安徽农

业科学，2007，35(35):11340.